全 文 ：《免疫学杂志 》1 5 9 9年第 n卷第 4 期 I m mu no[ og ie al J ou r n al V ol 1 1 N o 4 1 9 95
岩黄连总生物碱对小鼠免疫功能的影响
童 鲤 ’ 吴练中 ’ 梁益永 ,
摘 要 本文研究了岩黄连总生物碱 ( C S B T A )对小鼠免疫功能的调节作用 , 发现 C S B T A 在
体内增强溶血空斑值和增强小鼠的迟发型超敏反应 . 在体外增强同种异型 小鼠脾细胞的混合培养
反应和增强有丝分裂原刺激脾细胞的增殖反应 , 另外 C S B T A 增强 T 细胞产生 I L 一 2 和 IF N 一y 的水
平 ,提示 C S B T A 在免疫调节中是一种增强剂 。
关键词 岩黄连总生物碱 溶血空斑 迟发型超敏反应 白细胞介素 2
岩黄连是婴粟科紫荃属 ( C o r y d a l i s S a x i -
e o l a B
u n t i n g ) 植 物 , 已 制 成 岩 黄 连 总 生 碱
( C o r y d a l i s S a x ie o la B u n t i n g T o t a l A l k l o
-
l id s
,
C S B T A ) 的注射 液 , 用于临床 , 具有 清
热 、 消肿止痛等作用 ,也用于治疗肝 炎 、 肝 硬
化等疾病 。通过体内 、 半体内及体外法抗肿瘤
试验 ,发现 C S B T A 对小鼠肉瘤 、 艾氏腹水 瘤
及肝癌 、 腹水癌大 鼠肉瘤 2 56 均有一定的抑
制作用 , 对瘤细胞呼吸有抑制作用 l[] ; 在小鼠
试验中有显著增强小 鼠腹腔巨噬细咆吞噬功
能 , 对小 鼠 、 猴和猫均有强安定作用图 。 为此 ,
我 们对 C S B T A 进行 了免 疫功 能的实验 研
究 , 结果如下 :
材料和方法
1
.
1 若黄连总生物碱的 提取与分 离 生药
料经 95 % 乙醇提取 , 按常规法分得 生物 碱 ,
由本院 中心实验室提供 。
1
.
2 试 齐,} C o n A 美 国 S i g m a 产 品 , P H A
广州医药工业研究所产品 , L P S 上海第二军
医大学 微生物学 教研室提 供 , 3 H 一T d R 北京
原子能研究所提供 。
1
.
3 实脸动物 B a lb /。 小 鼠 , C s 7 B I丫6 小
鼠 , 10 ~ 12 周龄 , 雌雄不限 , 由本院动物室提
供 。
1
.
4 溶血 空斑试脸 不同剂量 的 C S B T A
经小 鼠腹 腔注 射 , 连续 d7 , 第 d8 用 s R B C
l m l (4 X I护 细咆 / m l) 经腹腔注射 各小鼠 , 于
免疫第 d4 进行溶血空斑试验 。 按 Je m e 法 3j[
测定 小 鼠 B 淋巴 细 胞产生特异性 抗 SR B C
抗体的能力 。
1
.
5 异型小 鼠脾 细胞 引起 的迟发型超敏反
应 取 B al b /。 小 鼠随机分组 , 给药 当天 用
C
s 7
B I
J
/ 6 小 鼠脾 细胞 ( 1 x 1 0 6 /m l ) 腹部皮下
注射 0 . l m l , 第 7 d 用 C s7 B I J / 6 小 鼠脾细胞 2
x l 06 / m l 注射 50 川于脚掌皮下 , 对侧脚掌同
法给予生理盐水 , 次日处死动物 , 用游标尺量
脚厚度 , 二脚掌厚度之差表示迟发型超敏反
应的强度 [ ; : .
1
.
6 同种 异型小 鼠脾细 胞 的混 合培 养反
应 取 B a lb /。和 C S , B L 6/ 小鼠脾分别制成 8
x l护 / m l 的细 胞悬液 , 实验在 96 孔培养板
上 进行 , 每 孔加入两 种小 鼠脾细胞悬液 各
5 0 “ l , 不 同浓度的药物 1 0 0尸 l , 对照组加入含
有 2 0 %小牛血清的 1 6 4。 培养液 10 0拜l , 置含
有 5% CO : 培养箱中培养 9 h6 , 终止培养前
1 6 ~ 1 8 h
, 每孔加 0 . 5 拼C i , H 一 T d R , 最终测定
C P M
。
1
.
7 小 鼠脾细胞增殖试脸 在 96 孔培养板
上 , 药物设三个不同浓度及对照组 , 每组 5 个
平行孔 , 每孔加入 5 0拌I C o n A 、 P H A 或 I一 P S
溶液 , 各药物 组 每孔加相应 浓度 的 药 物
1 0 0“ 1 . 最后每孔加入 5 0 “ 1 8 x 1 0 6 的 B a l b / e
小鼠脾细 胞悬液 . C o n A 、 P H A 和 I J P S 的浓
度分别 为 10科g /m l 、 6 2 · 5拌g /m l 、 6 2 · 5拼g / m l 。
置含有 5% CO : 培养箱中 37 ℃ 培养 72 h 。 终
扬州大学医学院免疫学和微生物学教研室 扬 州 2 2 5 0 01
2 3 8
DOI : 10. 13431 /j . cnki . i mmunol . j . 19950075
《免疫学杂志 》1 9 9 5 年 第 n卷第 4 期 I m mu n ol og ie al J u r n a ol V ol 1 1 N o4 1 9 9 5
止 培养 前 1 6 ~ 1 8 h 每孔 加 入 0 .5 “ C i 3 H-
Td R
, 用液体闪烁计数器测定 C P M 。
1
.
8 细胞 因子的诱导及测定
1
.
8
.
1 对 小鼠 T 细胞分泌 I F N 一下的影响 :
取各小 鼠脾细胞 (5 x 1 s0 / m l ) 加植物血凝素
( 6 2
·
5拼g /m l )刺激 , 3 7 o C 5 % C O Z 培养箱培
养 7 2 h 。 用 T i l l e s 和 F i n l a n d 等改良的微量细
胞病变法 5[] 测培养上清液中 I F N 一下活性 . 靶
细 胞为 L 。 , 细 胞 , 病毒为水 泡性 口 炎病毒
( V S V )
。 先将 I j g: ,细胞制成单层 , T N F 一了保
护 , 用 V S V 攻击 ,观察细胞病变 ,判定 I F N 一 7
活性 . 根据文献 5[J , 以 l m l 干扰素标本能保护
50 %细胞免 受 “ 攻击病毒 ” 损害的最大稀释
管 ,取其倒数即可为 IF N 一 7 单位 /m l 。
1
.
8
.
2 对小 鼠脾细胞产生 I L 一 2 的影响 : 小
鼠脾细胞诱导 -I 一 2 的方法按文献 61[ , I L 一 2 的
测 定 方法 用小 鼠响腺细 胞 , 测 定方法 见文
献 [ ’ 〕。
2 结果
2
.
1 宕黄连总生物碱对正常小 鼠 P F C 的 影
响 实验组小鼠经腹腔分别给予不同剂量 ,
对照组给予 生理 盐水 , 在 R B C 免疫后的第
d4 进行 P F C 实验 ,从表 l 可看出 , 与正常对
照组 比 , S Om g k/ g 剂量时可显著提高小 鼠 B
细 胞的溶血空斑数值 (尸 < 0 . 01 ) , 随着药物
剂量的增大 ,仍有显著的作用 。
2
.
2 宕黄连总生物 碱对小 鼠 引起迟发型超
敏反应的影响 结果见表 2 。
2
.
3 岩黄连总生物碱对 同种异型小 鼠脾细
衣 1 C S B T A 对正常小 鼠 P F C 的 影响
T
a b 1 T h e e f f e e t C S B T A o n P F C o f n o r m a l m i e e
G r o u P D o s e (m g / k g
·
d ) M
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d i
e a t io n r o u t e N o
.
o f m ie e o f t h e P F C
Rù,立月b4亡JO心.1月气
.No一50286
C o n t r o !
C S B T A
C S B T A
C S B T A
5 0 X 7
1 0 0 X 7
2 0 0 X 7
IP
i P
i P
1 0
1 0
1 0
1O
.
2 5士 1 .
.
9 9士 1 .
.
4 6士 1 .
.
6 1士 2 .
尸 < 0 . 0 1
尸< 0 . 0 1
P < 0
.
0 1
C o m P a r e d w i t h e o n t r o l
表 2
T
a b Z
G r o u P
C
o n t r o l
C S B T A
C S B T A
C S B T A
C S B T A 对 引起 同种异种 小鼠 D T H 的形响
T h
e e f f e e t C S B T A o n D T H t o a ll o t y p i e s p l e e n e e l l ( A S C ) i n n o r m a l m ie e
D
o s e (m g / k g
·
d ) M
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e a t i o n r o u t e N o
.
o
f m i
e e
T h i e h n e d i f f e n e e ( m m
,王士 s ) P
5 0 X 7
1 0 0 X 7
2 0 0 X 7
I P
I P
I P
. p
1O
1 0
1 0
1 0
0
.
7 5士 0 . 0 1 2
0
.
7 8士 0 . 0 4 6
0
.
8 5 士 0 . 0 2 9
0
.
9 2 士 0 . 0 5 2
P < 0
.
0 1
尸 < 0 . 0 1
P < 0
.
0 1
oC m p
a r e d w i t h e o n t r o l
胞混合培养反应的影响 结果见表 3 。 在同
种 异型小 鼠脾细 胞的混合培 养中 , 加 C S B -
T A
, 浓度自 4 0尸g /m l 开始有 显著的增 强作
用 (尸 < 0 . 0 5 ) , 随着浓度增加 ,此作用渐增 。
2
.
4 宕黄连总生物碱对脾 细胞增殖作 用
结果见表 4 。
2
.
5 宕黄连总生物城对正常小鼠诱生 IF N -
y 活性 的 影响 结 果 见 表 5 , C SB T A 在
l o o m g / k g 的剂量时显著提高正常小鼠 T 淋
表 3 C S B T A 对异 型小 鼠脾细 胞 M L R 的影响
T a b 3 T h e e f f e e t C S B T A o n M L R
o f a l lo g e n ie
s P le e n e e ll in m ie e
G
r o u P
C o n t r o l
C S B T A
C S B T A
C S B T A
D
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( I` g /m l )
3
H
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T d R
(王士 : )
c pm P
·
19 51 2士 15 9 0 . 82
21 4 0 0 士 23 0 2 . 1 7
2 2 8 0 0 士 2 3 8 7 . 4 7
24 4 8 0士 1 6 5 1 . 3 6
P ( 0
.
0 5
P < 0
.
0 1
叹口匕éJl`
0,目月任OU
C o m p a rde w i t h e o n t r o l
2 3 9
《免疫 学杂志 》 19 9 5 年 第 n 卷第 4 期 In 、 m u n o lo g i ea l Jo u rn a l Vo l 1 1 N o 4 19 9 5
表 4
T
a b 4
C S B T A 增强丝 裂原对小 敲脾 细 胞的增位作用的影响
T h e ef f e et C S B T A o n m it o g en s t i m u l a t e dn 1U r盆n e s pl en o ey t es pro l if e ra t io n fl1 1l1 l C e
G ro u P D
o s e( 寻, g /m l ) N o
,
H
一
T d R
e p m (王士 s )
C
o n t r o
l
C S B T A
C S B T A
C S B T A
C O一飞A
1 2 2 7 8士 5 4 7 . 3 8
1 3 1 2 0 士 4 6 5 . 8 3
1 4 1 5 0 士 4 6 0 . 9 8 .
1 5 0 2 0士 1 9 2 . 3 5 .
P H A
1 0 9 4 0士 3 9 1. 1 5
1 1 4 9 6士 3 8 3 . 5 1
1 2 3 5 8士 7 3 4 . 0 4 .
1 3 2 6 0士 4 7 2 . 2 3 “
L P S
1 5 2 0 0士 5 4 7 . 7 2
1 5 7 4 0士 4 8 2 . 7 0
1 6 1 6 0士 3 2 0 . 9 3 `
1 7 0 4 0士 5 8 5 . 6 6 .
巴é代口亡亡」
né0一UOJdO`U
P < 0
.
0 1 e o m Pa r e d w i t h e o n t r o l
衣 5 C S B T A 对正常小 鼠诱生 IF N 一 y 活性 的彩响
T
a b 5 T h e e ff e e t C S B T A o n t h e a e t i v i t ie s o f t h e I F N
一丫 i n n o r m a l m i e e
G
r o u P
C
o n t r o l
C S B T A
C S B T A
C S B T A
D o s e ( m g / k g
·
d ) M
e
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e a t io n r o u t e N o
·
o f m ie e 王士 s)
5 0 X 7
1 0 0 X 7
2 0 0 X 7
I P
i P
l P
l P
I N F
一
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u
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5
.
8士 1.
7士 1 .
8
.
6士 1 .
1 0士 1 .
6 4
5 8
4 0
5 8
尸 < 0 . 0 1
P < 0
.
0 1
oC m p
a r e d w i t h e o n t r o l
巴细胞产生 ( P H A 诱导 ) IF N 一 7 的能力 (尸 <
0
.
0 1 )
。
2
.
6 宕黄连 总生物碱对 C o n A 诱生 的脾细
胞产生 I L 一 2 的 影响 结果 见表 6 , C S B T A
在 4 0科 g / m l 或 8 0尸g / m l 两 个 剂 量 时 增 强
C o n A 诱导小 鼠脾细胞产生 lL 一 2 的水平 。
表 6 C S B T A 对 C o n A 诱 导小鼠脾细 胞产生
I L
一
2 的影响
T
a b 6 T h e C S B T A o n C o n A
一
in d u e e d I L
一
2
P r o d u e t io n o f m u r i n e s p le n e y t e s
G
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一
T d R
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( 1
1
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只U工J口.匀亡C o n t r o !
C S B T A
C S B T A
C S B T A
2 0
4 0
8 0
8 5 2 8士 4 5 7 . 0 8
9 0 6 0士 3 3 6 . 1 5
9 1 7 6士 1 9 2 . 0 4
9 9 4 0士 2 0 7 . 3 6
P < 0
.
0 5
P < 0
.
0 1
C o m Pa r e d w i t h e o n r r o l
3 讨论
本工作表 明 C SB T A 能明显提高正常小
鼠的免疫功能 , 从表 l 和表 2看出在腹腔注射
s o m g / k g 的 C S B T A 时溶血空斑数和 D T H
的反应 比正常组有显著的提高 (尸 < 0 . 0 1 ) .
提示 C S B T A 能明显提高机体对特异性抗原
2 4 0
的应答能力 , 从表 3和表 4中可以看出 C S B -
T A 在体外能增强同种异型小鼠脾细胞的混
合培养反应和增强丝裂原对脾细咆的刺激作
用 , 说明 C S B T A 能增强机体的体液免疫和
细胞免疫应答 。干扰素是具有抗病毒 、 抗肿瘤
和免 疫调节等多 种生物活性 的细 胞因子 ;
C S B T A 在 10 0 m g / k g 的 剂 量 时 , 能 增 强
P H A 诱 导 T 细 胞分泌 IF N 一丫的水平 , 提高
小 鼠的免疫功能 。 l J一 2是免疫应答过程中促
进 T 、 B 细胞产生免疫效应不可缺少的细胞
因子 , C SB T A 在 4 0拌 g / m l 时可促进 C o n A 诱
导 T 细胞产生 H一 2 , 随着 C S B T A 剂 量的增
加 , 1 一 2的水平不断提高 , 提示 C S B T A 是很
好的免疫增强剂 。
本文对 C S B T A 作为免疫增强剂提供了
理论 基础 , C S B T A 的免疫增强 作用与抗肿
瘤作用的关系尚待今后进一步的实验研究 。
(致谢 : 本文 中的实验数 据统计处理经我院唐尧
讲 师复核 , 才今此致谢 。 )
参 考 文 献
1
. 柯取艰 ,张宪德 , 吴练中 . 岩黄连有效成份的研究 . 植物学
报 , 1 9 8 2 ; 2 4 ( 3 ) : 28 9
《免疫学杂志 》1 9 9 5年第 n 卷 第 4期 Im m n uo lo g ie a l J o ur n a l V o l 1 1 No 41 9 9 5
2
. 黄燮南 ,刘国雄 , 张 毅 . 岩黄连总生物碱的安定作用 . 中
国药理学报 , 1 9 8 1 ; 2 ( 3 ) : 1 56
3
.
J e r r e N K
.
C e ll
一
b o u n d a n t ib记 y . W i , t a r I u s t Pe r e s s ,
1 9 6 3
:
1 0 9
4
. 高 梅 ,谢蜀生 , 秦风华 . 猪岑多搪对小鼠免疫功能的增
强作用 . 中国免疫学杂志 , 1 9 9 1 ; 7 ( 3 ) : 8 5
5
. 杜 平 . 医用干扰素 . 北京 : 解放军出版社 , 1 9 84 : 21 5 ~
2 9 0
6
. 章灵华 , 王会贤 , 王立为 . 灵芝抱子粉提取物在体内外的
免疫效应 . 中国免疫学杂志 , 19 94 ; 1 0 ( 3 ) : 1 7 0
7
. 张 浦 ,张建中 , I L 一2产生的条件和不同测 定方法的比
较 . 中国免疫学杂志 , 2 9 8 6 ; 2 ( 6 ) : 36 7
( 1 9 9 5
一
0 3
一
0 2收稿 ; 1 9 9 5一 0 6一 0 4修回 )
Im m u n o l o g i e E f f e e t o f C o r y d a l i s S a x i c o l a B u n t i n g T o t a l a l k o l i d s i n
M IC e
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, : g K
u n ,
W
u L l’a , : z h o n g , L t’a n g Y t’y o n g
( D亡户a rt m e n t of I m m u n o l o舒 a n d Mt’ c or b i o l o舒 , 入介 d ic a l oC l l e岁 of Y a , Zg z h o u U n i v e sr i yt ,
y 口 n g z h o u 2 2 5 0 0 1 )
A b s t r a e t T h e i m m u n o lo g ie e f fe e t s o f C o r y d a li s S a x ie o l a B u n t in g T o t a l A l k o l id s ( C S B T A ) i n m ie e w a s
o b
s e r v e
d i
n t h is s t u d y
.
I t h a s b e e n fo u n d th a t C S B T A w a s s ig n i f ie a n t ly i n e r e a s e d t h e p r o d u e t i o n o f h e m o ly s in
p la q u e f o r m in g e e l l ( P F C )
,
d e la y e d
一 t y沐 h y p e r s e n s it iv i ty ( D T H ) t o a l lo t y p i e s p le e n e e l l ( A S C ) i n m o r m a l
m i
e e
.
C S B T A e o u ld a l s o e n h a n e e m i t o g e n ( C o n A
,
P H A
,
L P S ) i n d u e e d m u r in e s p l e n o e y t e s p r o l ig e r a t i o n
, t h
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m i x e d ly m p h o e y t e r e a e r io n ( M L R ) o f
a l lo g e n i e s p le e n e e ll a n d I F N
一下 p r o d u e t io n i n n o r m a l m i e e a n d C o n A 一 i n -
d u e e d IL
一
2 p
r o d u e t io n o f m u r i n e s p l e n co y t
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·
T h e r e s u lt s s u g g e s t t h a t C S B T A e o u ld b e a n e n h a n e e r in im
-
m
u n e r e g u l
a t io n
.
K e y w o r d s C o r y d a l is s a x ie o l a b u n t in g t o t a l a l k o l id s
,
P l
a q u e f o r m in g e e l l
,
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a y e d t y p e h y p e r s e n s i t i v i t y
,
M i
x e
d ly m p h o e y t e r e a e t io n
,
IL
一
2
[ I
n : m洲 o l o g i c a l J o , n a z 1 9 9 5 ;一i ( 4 ) : 23 5 ]
(上接 第 2 3 4页 )
S t u d y o n t h e I n d u e t i o n o f Im m u n e R e s P o n s e i n H u m a n
b y I n j e e t i n g H u m a n A n t i
一
H B s A n t i b o d i e s
J i a W
e n x i a , : g
,
L i H u i x i a
, 材du J .aI w a n , H u Q i l e , L i u W e ,alf ,: g
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a rt m e n t of 1M’ c or bi o l o舒 , W e s t hC i , : a U , : i v e sr i t夕 of M e d i e a l S e i e ,之c e s , C h e n g d u 6 10 0 4 1 )
A b s t r a e t I n t h i
s r e p o r t
, t h e r e g u la t i v e e f f e e t o f th e h u m a n a n t i
一
H B s w a s s t u d ie d in h u m a n b o d y
·
1 0 3
h e a l t h v o l u n t e e r s w e r e in j
e e t e d w i t h h ig h t it r e h u m a n a n t i
一
H b s (A b : ) t h r e e y e a r s a g o
,
1 1 e a s e s w e r e fo ll o w e d
t o d
e t e e t t h
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一
i d i o t y p ie a n t i
一
b o d ie s ( A b Z ) a n d a n t i
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·
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a s i n fe e t e d H B V d u r in g t h is p e r io d
, a n d u s u a l ly t h e t i t r e o f A b : w e r e h ig h e r t h a n th a t o f
A b
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·
T h e s e r e s u l t
s r e e o n
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r m e d t h a t t h e d y n a m ie e h a n g e s b e t w e e n A b Z a n d A b 3 o f i m m u n e s e r a w e r e t o b e
e y e li
e a l b y w a y o f t h e ir i n r e r a e t io n
.
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j
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o n o f e x o g e n o u s h u m a n a n t i
一
H B
s n o t o n ly e o u l d b r i n g a b o u t p a s s iv e
im m
u n i t y b u t a ls o e o u ld in d u e e a e t iv e im m u n i t y b y a e t iv a t i o n o f i d io t y p ie n e t w o r k i n h u m a n b o d y
·
K e y 解o r d s H u m a n a n t i一 H B s , Id io t y p ie n e tw o r k , Im m u n e r e s p o n s e
[ I m m 谈 o l o g i e a l J o ur n a l 1 9 9 5 ; 1 1 ( 4 ) : 2 3 3〕
2 4 1