全 文 ：第 2 期
收稿日期：2009－09－23
基金项目：科技部、财政部“富民强县”专项行动计划（205）；国家科技支撑计划项目（2008BADB5B03）
作者简介：谢 兵（1964－），男，重庆人，教授，主要从事农药化学分析研究，（电话）13595100386（电子信箱）gengguangdong＠sohu．com；
通讯作者，耿广东，副教授，主要从事蔬菜栽培生理与生物技术方面的研究。
第 49 卷第 2期
2010 年 2月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 49 No.2
Feb．，2010
草石蚕（Stochys sieboldii Miq）又名地牯牛、宝
塔菜、螺丝菜等［1］，是唇形科水苏属一年生草本菜类
药用植物，南、北方皆有栽培［2］。 其地下茎富含蛋白
质、淀粉、水苏糖及 B 族维生素，经加工腌渍后清香
脆嫩、开胃可口，既可作为佐餐佳肴，又可作为中
药，有活血祛风、润肺益肾、促进消化和解毒等功
效，可治肺虚咳嗽、肺结核等病症［3－5］。
分子生物学研究对 RNA 提取要求较高， 纯度
高、完整性好、含量高的 RNA 是获得试验成功的前
提和关键。 草石蚕块茎中含有丰富的多糖和蛋白质
等影响 RNA 的提取。 目前，国内关于草石蚕块茎总
RNA 提取方面的文献鲜见报道。本文采取不同方法
提取草石蚕块茎的 RNA，以期探索一种快捷高效提
取高质量草石蚕块茎总 RNA 的方法， 为开展草石
蚕后续分子生物学研究奠定基础。
1 材料与方法
1．1 材料
野生草石蚕 ， 取自贵州省务川县 。 RNAiso
Reagent 试剂，购自宝生物工程（大连）有限公司；
TRIzolR Reagent 试剂，购自美国 Invitrogen 公司；其
他化学试剂均购自国药集团化学试剂有限公司。
草石蚕块茎总 RNA提取及质量分析
谢 兵 1，耿广东 2，张素勤 2，苏 丹 2
（1． 贵州民族学院化学与环境科学学院，贵阳 550025；2． 贵州大学农学院，贵阳 550025）
摘要：采用 3 种方法提取草石蚕块茎的总 RNA，以期筛选出适合草石蚕块茎总 RNA 提取的最佳方法。
结果表明，RNAiso Reagent 法提取草石蚕块茎总 RNA 的 28 S 和 18 S 条带清晰明亮，RNA 无降解，无
DNA 污染，质量较好。 王艳红法和 TRIzolR Reagent 一步提取法提取总 RNA 的 28 S 和 18 S 条带较暗，
提取的总 RNA 有降解现象。 根据紫外分光光度计检测结果分析，3 种方法提取草石蚕块茎总 RNA 的纯
度都较好。 从提取 RNA 的产量来看，RNAiso Reagent 法提取总 RNA 的浓度最高，为 1 112 μg ／ mL，王艳
红法次之，TRIzolR Reagent 一步提取法最低。因此，RNAiso Reagent 法是草石蚕块茎总 RNA 提取的最佳
方法。
关键词：草石蚕；块茎；RNA 提取；RNA 质量
中图分类号：S644．5；Q789 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2010）02－0263-02
Extraction and Quality Analysis of Total RNA in the Tuber of Stochys sieboldii Miq
XIE Bing1，GENG Guang－dong2，ZHANG Su－qin2，SU Dan2
（1．School of Chemistry and Environment Science， Guizhou University for Nationalities， Guiyang 550025，China；
2．Agricultural College，Guizhou University， Guiyang 550025，China）
Abstract： Three methods were compared for the extraction of total RNA from the tuber of Stochys sieboldii Miq in this pa-
per． The results showed that the 28 S and 18 S bands were strong， and the quality of the total RNA was high without
degradation and DNA contamination， when the total RNA extracted by method 1 was detected with non －denaturing gel
electrophoresis． While the 28 S and 18 S bands extracted by method 2 and method 3 were dark， and their total RNA de-
graded． The purity of total RNA extracted by the three methods was high according to the results of UV spectrophotometer
detection． The concentration of the total RNA by method 1 was the highest （1 112 μg ／ mL）， next came method 2， and then
method 3． Therefore， method 1 was optimal for total RNA extraction of the tuber of Stochys sieboldii Miq．
Key words： Stochys sieboldii Miq； tuber； RNA extraction； RNA quality
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2010.02.047
湖 北 农 业 科 学 2010 年
1．2 方法
RNA 提取采用 RNAiso Reagent 法 ［6］、王艳红
法［7］和 TRIzolR Reagent一步提取法，TRIzolR Reagent
一步提取法参照试剂盒使用说明书进行。 试验重复
3次。 提取的 RNA在－70℃冰箱中保存备用。
分别取 3 μL RNA 在 1．2％非变性凝胶上电泳
检测提取 RNA的质量。 取 RNA样品各 30 μL加入
2 970 μL DEPC 水， 混匀后用紫外分光光度计在
200～300 nm 波长范围内检测 RNA 的吸光值 （以无
RNase 的超纯水为空白液调零）， 记录 OD230、OD260
和 OD280，计算 OD260/OD230和 OD260/OD280比值。
2 结果与分析
2．1 RNA完整性检测
琼脂糖凝胶电泳主要用来鉴定 RNA 的完整
性，总 RNA的主要成分是 28S rRNA和 18S rRNA，
可以根据凝胶电泳 28S RNA 和 18S RNA 的完整
性判断 RNA有无降解。
从凝胶电泳检测结果可以看出 （图 1），RNAiso
Reagent 法提取草石蚕块茎总 RNA 的 28 S 和 18 S
条带清晰可见， 条带明亮，28S 条带的亮度是 18 S
条带的 1．5～2．0 倍，说明提取的 RNA 无降解，质量
较好， 而且无 DNA 污染。 王艳红法和 TRIzolR Rea
gent 一步提取法提取的总 RNA 也无 DNA 污染，但
是其 28S 和 18S 条带较暗，并且 28S 和 18S 条带的
亮度差别不大，说明提取的总 RNA有降解现象。根据
RNA 条带的亮度和完整性可以看出 ，RNAiso
Reagent 法提取草石蚕块茎总 RNA 的效果最好，王
艳红法和TRIzolR Reagent 一步提取法的提取效果一
般。
2．2 RNA纯度和浓度检测
紫外分光光度计主要用于检测提取总 RNA 的
纯度和浓度。 从表 1 可以看出，RNAiso Reagent 法
提取草石蚕块茎的总 RNA OD260/OD280 比值最大，
为 1．958； 王艳红法和 TRIzolR Reagent 一步提取法
提取总 RNA 的 OD260/OD280比值比较相近，3 种方法
提取总 RNA 的 OD260/OD280比值都在 1．8～2．0， 说明
这 3 种方法提取草石蚕块茎总 RNA 的纯度都较
好。 利用这 3 种方法提取的草石蚕块茎总 RNA 的
OD260 ／OD230比值都大于 2，说明提取 RNA 的纯度较
好。 从提取 RNA的产量来看，RNAiso Reagent 法提
取总 RNA 的产量最高，为 1 112 μg ／ mL， 王艳红法
次之，TRIzolR Reagent一步提取法最低。
3 讨论
由于草石蚕块茎中糖类、蛋白质和次生物质含
量较高［3－5］，而多糖类与 RNA 具有相似的理化性质，
在 RNA 提取过程中与 RNA 形成难溶物等方式严
重干扰 RNA 的提取或降解 RNA； 因此应根据具体
试验建立适宜的 RNA 提取方法， 才能提取出高质
量的草石蚕总 RNA。
本试验从琼脂糖凝胶电泳结果来看 ，RNAiso
Reagent 法提取草石蚕块茎总 RNA 的 28 S 和 18 S
条带清晰明亮，RNA 无降解，无 DNA 污染，质量较
好。王艳红法和 TRIzolR Reagent一步提取法提取总
RNA的 28 S 和 18 S 条带较暗，提取的总 RNA 有降
解现象。 根据紫外分光光度计检测结果比较分析，3
种方法提取草石蚕块茎总 RNA 的纯度都较好。 从
提取 RNA 的产量来看，RNAiso Reagent 法提取总
RNA 的产量最高，为 1 112 μg ／ mL，王艳红法次之，
TRIzolR Reagent 一步提取法最低。 因此，从 3 种方
法提取草石蚕块茎总 RNA 的完整性、 纯度和浓度
等方面综合考虑，RNAiso Reagent 法是草石蚕块茎
总 RNA提取的最佳方法。
参考文献：
［1］ 王谋强．草石蚕栽培管理技术［J］．农技服务，2004（9）：17-18．
［2］ 陈修源 ．《木草纲目 》草石蚕考释 ［J］．李时珍国药研究 ，1991，
3（2）：97-98．
［3］ 刘 弘， 谭鹏浩． 植物生长调节剂对草石蚕脱毒试管苗生长与
保存的影响［J］． 河南农业，2008（10）：31-32．
［4］ 尹俊发，杨更亮，李志伟，等．高效液相色谱－蒸发光散射检测法
测定草石蚕根茎中的水苏糖 ［J］． 分析化学 ，2003，31（12）：
1409-1412．
［5］ 刘 洪，白志川，孙婵娟，等． 重庆市药用植物草石蚕产业栽培
现状分析［J］．安徽农业科学，2008，36（12）：5102-5103．
［6］ 宋 欣． 玉米双低频酶 cDNA－AFLP 体系的建立及穗数性状相
关基因的差异表达分析［D］．贵阳：贵州大学，2008．
［7］ 王艳红． 水稻开花基因的克隆和功能研究［D］．杨凌：西北农林
科技大学，2005．
表 1 3 种方法提取草石蚕块茎总 RNA 纯度和产量比较
方法
RNAiso Reagent 法
王艳红法
TRIzolR Reagent 一步提取法
OD260/OD280
1.958
1.828
1.823
OD260/OD230
2.122
2.089
2.055
浓度//μg/mL
1 112
468
452
1． RNAiso Reagent 法；2．王艳红法；3． TRIzolR Reagent 一步提取法
图 1 3 种方法提取的草石蚕块茎总 RNA 电泳图谱
1 2 3
264