全 文 ：收稿日期:2007-06-18;　修订日期:2007-09-18
基金项目:辽宁省企业项目博士后基金和美国GreenGbldIuc资助项目
作者简介:赵月然(1979-),女(汉族),辽宁沈阳人 ,现为辽宁中医药大学
药学院在读硕士研究生 ,主要从事天然药物的分离工作.
＊通讯作者简介:窦德强(1967-),男(汉族),吉林镇赉人 ,现任辽宁中医
药大学教授 ,博士学位 ,主要从事天然药物的研究与开发工作.
北美刺人参指纹图谱
及与东北刺人参化学成分比较研究
赵月然 , 康廷国 , 窦德强＊ , 张　放 , 王首千
(辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连　116620)
摘要:目的 研究北美刺人参(Oplopanaxhorridus, OH)的 HPLC指纹图谱 , 为科学评价及有效控制药材质量提供可靠方
法。方法 以紫丁香苷为对照品建立了 O.horridus茎皮的 HPLC指纹图谱 , 色谱条件为:色谱柱 KromasilC18 column(250mm×4.6mm, 5 μm),预柱 Zorbax(12.5mm×4.6mm, 5 μm)流动相为乙腈 -0.05% 磷酸水溶液梯度洗脱 , 流速为 1.0
ml/min,柱温为 35℃, 检测波长 210 nm。对 11批茎皮药材进行了相似度分析 ,并同东北刺人参(O.elatusNakai, OE)茎
皮指纹图谱进行了比较 ,采用系统聚类分析方法处理数据。结果 相同种类药材的相似度较高 , 大于 0.9, 采用聚类分析
可以聚为一类。结论 指纹图谱可用于刺人参药材不同种类的鉴别。
关键词:北美刺人参;　东北刺人参;　指纹图谱;　聚类分析
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0546-02
StudyontheHPLCFingerprintsofOplopanaxhorridusandtheComparisonofConstitu-
entsbetweenO.horridusandO.elatusNakai
ZHAOYue-ran, KANGTing-guo, DOUDe-qiang＊ ,ZHANGFang, WANGShou-qian
(SchoolofPharmacology, LiaoningUniversityofTCM, Dalian116620, China)
AbstractObjectiveTostudyontheHPLCfingerprintsofOplopanaxhoridusforoferingamethodonthequalitycontrolandassessment.MethodsSyringeninwasusedasreferencesubstancetoestablishHPLCfingerprintsofstembarkofO.horridus.
Separationsanddeterminationswerecarriedoutbylineargradientelutionunderfollowingconditions:KromasilC18 column(250mm×4.6mm, 5 μm), pre-columnZorbax(12.5 mm×4.6 mm, 5μm), acetonitrile-0.05% phosphoricacidsolutionasmo-
bilephase, detectionwavelengthofUVat210nm, flow-rateof1.0ml/min, columntemperatureof35℃.Similaritycalculation
softwarewasusedtoevaluatethewholeHPLCspectrumsof11samplesofOHstembark.Furthermore, itwascomparedwithfin-
gerprintofO.elatusNakaistembarkandclusteringanalysiswasappliedfordataanalysis.ResultsThesimilarityofHPLCfin-
gerprintwasmorethan0.9 amongthesametypesofmaterials.ConclusionHPLCfingerprintcanbeusedfordiferentiating
sourcesofsamples.
KeywordsO.horidus;　O.elatusNakai;　Fingerprint;　Clusteringanalysis
　　北美刺人参 Devilsclub〔Oplopanaxhorridus(Sm.)Torr.＆A.
Grayex.Miq., Araliaceae〕为五加科刺参属(OplopanaxMiq.)落
叶灌木。主要分布在阿拉斯加及不列颠哥伦比亚 [ 1] 。北美刺人
参的茎皮及根是当地的传统药用植物 , 可以用于治疗各种疾病 ,
包括关节炎 、感冒 、发热以及糖尿病等 [ 2] 。本文对北美刺人参的
茎皮的指纹图谱进行了系统的研究 ,并对比了北美刺人参茎皮与
东北刺人参茎皮的化学成分 ,为进一步开发刺人参的药用价值提
供科学基础。
1　仪器与材料
Agilent1100型高效液相色谱仪:四元泵;在线脱气机;DAD
检测器;柱温箱;HPChemstation色谱工作站。 Bp210S电子分析
天平(德国 Sartorius公司)。乙腈为色谱纯 , 甲醇 、磷酸为分析
纯 , 水为三纯水(Milipore公司)。紫丁香苷(纯度 98%)为从北
美刺人参自行提取 , 纯化。 北美刺人参 11批茎皮和 1批根皮均
采自美国 HomerAK, 由美国阿拉斯加植物资源中心 (Alaska
PlantMaterialCenter, Bute, Alaska, USA)主任 DavidSmith和
StoneyJ.Wright鉴定。东北刺人参 1批茎皮采自中国本溪 ,由辽
宁中医药大学王冰教授鉴定。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱 KromasilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),
预柱 Zorbax(12.5 mm×4.6mm, 5 μm);流动相为乙腈 -0.5%磷
酸水溶液梯度洗脱 ,运行时间为 60min,梯度洗脱的程序以乙腈含
量随时间的变化(体积比):0 ～ 11 min, 10% ～ 20%乙腈 , 11 ～ 20
min, 20% ～ 32%乙腈 , 20 ～ 30 min, 32% ～ 60%乙腈 , 30 ～ 60 min,
60% ～ 86%乙腈;检测波长 210 nm;流速 1 ml/min;进样量 10 μl;
柱温 35℃;进样前以流动相梯度初始条件平衡 15 min。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取紫丁香苷对照品 2 mg, 甲醇
溶解 , 制成 100 μg/ml对照品溶液 , 放于 4℃ 冰箱中避光保存 ,
备用。
2.3　供试品溶液的制备 取干燥刺人参样品(过 40目筛)1 g, 精
密称定 ,加入甲醇 50 ml, 密塞称重后超声提取 30 min, 放冷 , 补
重 , 摇匀 ,提取液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过 , 弃去初滤液取续滤
液备用 。
2.4　方法学考察
2.4.1　稳定性考察 按照上述供试品溶液的制备方法制备样品
溶液 , 分别在 0, 2, 6, 12, 24 h进样 , 测得各共有峰相对峰面积和
相对保留时间的 RSD均小于 3%。结果表明样品溶液在 24 h内
稳定。
2.4.2　精密度考察 按照上述供试品溶液的制备方法制备样品
溶液 , 连续进样 5次 ,考察仪器的精密度 ,各共有峰相对峰面积和
相对保留时间的 RSD均小于 3%。结果表明仪器精密度良好。
2.4.3　重复性考察 按照上述供试品溶液的制备方法制备 5份
样品溶液 , 测得各共有峰相对峰面积和相对保留时间的 RSD均
小于 3%。表明实验方法重复性良好。
2.5　样品分析
·546·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3　
2.5.1　指纹图谱的测定 将 11批北美刺人参茎皮样品溶液进
行高效液相色谱 HPLC-DAD测定 ,记录色谱图 ,如图 1。其中标
□处峰为对照品峰。
图 1　样品 S1-S11的指纹图谱
2.5.2　相似度分析 采用国家药典委员会编写的 “中药色谱指
纹图谱相似度评价系统(2004A)”进行数据的处理 , 对不同批次
的药材成分的指纹图谱进行相似度评价。结果表明 ,北美刺人参
茎皮样品 1 ～ 11号有 24个共有峰 , 其中 10个为主要特征峰 ,相
似度分别为 0.993, 0.972, 0.988, 0.997, 0.993, 0.997, 0.998,
0.974, 0.937, 0.957, 0.997, 相似度较高。
2.5.3　两种刺人参化学成分比较 以 OH样品 S1与 OE样品
S13指纹图谱进行比较。见图 2 ～ 3。其中 4 s处峰为对照品峰。
东北刺人参与北美刺人参的茎皮差别在于:东北刺人参缺少峰
2,峰 13, 峰 15,峰 17;东北刺人参峰 18, 19, 22相对峰面积在分别
为 89.4, 142.0, 1.86。而 11批北美刺人参的相对峰面积分别小
于 20.0, 11.1, 0.85。 11批北美刺人参峰 14相对峰面积均大于
6.8, 东北刺人参峰 14相对峰面积为 1.69。
2.5.4　聚类分析 聚类分析就是采用定量数学方法 , 根据一组样
品的多个观测指标 , 具体找出一些能够度量样品之间相似程度的
统计量 , 以这些统计量为划分类型的依据。[ 3]在 11批次北美刺人
参指纹图谱相似性评价的基础上 , 采用SPSS11.0统计软件对
这 11批药材进行聚类分析 ,并对北美刺人参根皮(12号样品)和
东北刺人参茎皮(13号样品)同时进行分析 , 结果见图 4。在系
统聚类分析之前 ,为消除由于数据变换的幅度和范围以及数据分
布的非正态性对聚类结果的影响 ,对原始数据进行了变换。变换
数据如下表 1。采用欧氏距离来描述样品之间的距离 , 利用离差
平方和法来计算类与类之间的距离。
图 2　样品S1指纹图谱
图 3　样品 S13指纹图谱
图 4　聚类分析结果
表 1　聚类分析数据
序号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
1 0.087 0.128 0.128 0.096 0.113 0.071 0.093 0.172 0.103 0.239 0.117 0.456 0.246
2 0.016 0.035 0.030 0.020 0.038 0.035 0.020 0.041 0.045 0.031 0.023 0.098 0
3 0.062 0.053 0.050 0.069 0.063 0.072 0.066 0.091 0.071 0.055 0.068 0.083 0.038
4s 0.076 0.071 0.086 0.080 0.055 0.081 0.076 0.276 0.112 0.073 0.085 0.351 0.232
5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
6 0.025 0.074 0.096 0.185 0.298 0.164 0.156 0.444 0.110 0.182 0.229 0.584 0
7 0.051 0.057 0.048 0.048 0.078 0.060 0.055 0.107 0.083 0.052 0.058 0.101 0.193
8 0.043 0.050 0.049 0.034 0.051 0.050 0.049 0.063 0.083 0.054 0.062 0.102 0.234
9 0.049 0.059 0.060 0.044 0.050 0.051 0.051 0.076 0.064 0.048 0.050 0.065 0.197
10 0.046 0.062 0.063 0.059 0.075 0.070 0.057 0.099 0.046 0.060 0.058 0.102 0.123
11 0.056 0.057 0.063 0.066 0.056 0.088 0.051 0.156 0.087 0.076 0.049 0.130 0.223
12 0.109 0.140 0.095 0.121 0.155 0.123 0.124 0.282 0.089 0.089 0.129 0.134 0.674
13 0.063 0.035 0.061 0.051 0.086 0.051 0.055 0.123 0.050 0.034 0.047 0.091 0
14 1.157 0.928 1.034 1.295 1.545 1.321 1.281 2.872 0.763 0.726 1.284 2.488 0.38
15 0.321 0.346 0.319 0.375 0.432 0.375 0.359 0.834 0.230 0.204 0.364 2.291 0.179
16 0.109 0.102 0.115 0.177 0.317 0.149 0.176 0.363 0.171 0.148 0.147 0.457 0.689
17 0.073 0.075 0.082 0.120 0.221 0.088 0.121 0.237 0.115 0.100 0.097 0.321 0.204
18 1.546 1.408 1.461 1.700 2.027 1.713 1.677 3.799 0.873 0.956 1.715 3.262 20.74
19 0.736 1.034 0.955 0.808 0.968 0.814 0.796 1.853 0.470 0.461 0.814 8.470 32.94
20 0.091 0.095 0.088 0.103 0.173 0.135 0.105 0.231 0.128 0.110 0.098 0.387 0.407
21 0.057 0.050 0.058 0.060 0.078 0.063 0.063 0.142 0.043 0.038 0.067 0.204 0.684
22 0.039 0.036 0.073 0.056 0.103 0.056 0.057 0.120 0.089 0.051 0.048 0.218 0.431
23 0.813 0.694 0.762 0.865 1.095 0.874 0.835 1.853 0.520 0.484 0.820 2.919 3.670
24 0.111 0.096 0.097 0.120 0.134 0.124 0.112 0.266 0.072 0.068 0.121 0.599 5.894
3　讨论
本实验主要考察了甲醇 , 60%甲醇 , 60%乙醇 , 95%乙醇 , 丙
酮作为提取的溶剂 , 结果以甲醇为提取溶剂 , 峰数较多 , 峰形好。
提取方法主要考察超声提取 , 热回流 ,索氏提取 ,结果以超声提取
效果最好。超声提取时间分别确定为 15, 30, 45, 60 min, 结果以
30 min最为合适。
洗脱条件的选择是在参考文献 [ 1]基础上分别采用甲醇 -
水 ,乙腈 -水 、甲醇 -0.1%甲酸水 、乙腈 -0.1%甲酸水 、甲醇 -
0.5%磷酸水 、乙腈 -0.5%磷酸水等不同的洗脱系统进行梯度洗
脱。结果表明 ,以乙腈 -0.5%磷酸水为流动相。 检测波长采用
·547·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3 时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期
DAD检测器 , 对 190 ～ 400 nm扫描的各波长下的色谱图进行分析
比较 , 选定 210 nm为检测波长。所得图谱在此波长下记录的色
谱图基线平稳 , 色谱峰数目较多。
聚类分析的数据处理是相对于对照品附近的 5号峰面积进
行数据处理 , 因为此峰的峰形好 , 含量高 ,又是对照品附近峰 , 数
据结果可靠。
北美刺人参(OH)11批药材相似度均大于 0.9, 说明药材的
化学成分和含量无明显差异。 相似度分析的结果与聚类分析的
结果基本一致。样品 S12为 OH根皮 ,其特征峰的个数与 OH茎
皮一致 , 但由于含量的不同 ,与对照谱图的相似度为 0.74,在聚
类分析中单独聚为一类 ,说明不同药用部位有一定的化学成分含
量的差异性。
聚类分析结果显示东北刺人参(OE)的茎皮 S13另为一类 ,
两种种类的刺人参茎皮化学成分有一定的差异。化学成分对比
说明主要差异在于峰 14, 18, 19, 22的相对含量。
参考文献:
[ 1 ] 　JosephTai, SusanCheung, StefanieCheah, EdwinChan, DavidHas-
man.Invitroanti-pro-liferativeandantioxidantstudiesonDevils
ClubOplopanaxhorridus[ J].Ethnopharma-cology.2006, 108(2):
228.
[ 2 ] 　 TrevorC.Lantz, KristinaSwerhun, NancyJ.Turner.DevilsClub
(Oplopanaxhoridus):AnEnthnobotanicalReview[ J].AmericanBo-
tanicalCouncil, 2004, 62:33.
[ 3 ] 　章文波 ,陈红艳.实用数据统计分析及 SPSS12.0应用 [ M] .北京:
人民邮电出版社 , 2006.
收稿日期:2007-04-26;　修订日期:2007-09-27
基金项目:北京市教委科技发展面上项目(No.KM200711417008);
　　　　 人才强教计划—人才引进资助项目
作者简介:黄迎春(1964-),女(土家族), 湖北恩施人, 现任北京联合大学
生物化学工程学院副教授 ,博士学位 ,主要从事生物制药研究工作.
东亚钳蝎提取物
对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用
黄迎春1 , 张铁钢 2 , 林　强 1 , 韩永平1
(1.北京联合大学 生物化学工程学院 ,北京　100023;
2.北京疾病预防控制中心免疫预防所 ,北京　100013)
摘要:目的 研究东亚钳蝎提取物 BmKE及其醇提部位(BmKEA)对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其作用机
理。方法 BmKE、BmKEA、阳性对照 VE灌胃第 5天 , 小鼠腹腔注射四氯化碳造成急性肝损伤 ,测定小鼠血清中丙氨酸转
氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化。结果 BmKE及 BmKEA预处理和治疗后 ,肝损
伤小鼠血清中 ALT, AST活性均有所下降 , 其中 , BmKEA高 、中剂量组达到显著性差异(P<0.05)。 BmKE低剂量组和
BmKEA所有处理组血清中 MDA含量极显著下降(P<0.001)。结论 BmK及 BmKEA通过减少肝细胞 ALT和 AST的泄
漏 , 减少脂质过氧化而保护肝脏免受损伤 , BmKEA是抗氧化的活性部位。
关键词:东亚钳蝎提取物;　肝损伤
中图分类号:R962　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0548-02
HepatoprotectiveEffectofExtractsfromBmKonCarbonTetrachloride-inducedLiver
InjuryinMice
HUANGYing-chun1＊ , ZHANGTie-gang2 ,LINQiang1 , HANYong-ping1
(1.BiochemicalEngineeringColegeofBeijingUnionUniversity, Beijing100023, China;2.InstituteofImmuni-
zationandPrevention, BeijingCentersforDiseasesPreventionandControl, Beijing100013 , China)
AbstractObjectiveTostudytheprotectiveefectofextractfromButhusmartensicKarch(BmKE)andthefractionseparatedu-
singalcohol(BmKEA)onliverinjuryinducedbycarbontetrachloride(CCl4)inmiceanditsmechanism.MethodsMicewereadministratedwithBmKEandBmKEAwithhigh, middleandlowdosages, positivecontrol(VitaminE)for5d, respectively, and
thenacuteliverinjurywasinducedby0.5% CCl4 ip0.1ml×kg-1.Themicewerekiled36hafterCCl4 treatment.Alanineami-notransferaseandaspartateaminotransferase(ALTandAST)activitiesinserumweremeasured.Maleicdialdehyde(MDA)inser-
umwasdetected.ResultsThehighandmiddledosagesofBmKEAsignificantlyreducedthelevelsofALTandAST(P<0.05)in
serum.BmKEAremarkedlydecreasedthecontentofMDA(P<0.001)inserum.ConclusionTheBmkEandBmKEAcanpro-
tectcarbontetrachloride-inducedliverinjuryinmicebyreducingtheleakageofALTandASTfromthelivercelsandlipidper-
oxidation.TheBmKEAisactivepartofantioxidation.
KeywordsButhusmartensicKarch;　Liverinjury;　Antioxidation
　　东亚钳蝎 ButhusmartensiiKarsch, BmK, 属节肢动物门 , 蛛形
纲 , 蝎目 , 钳蝎科 , 是在中国蝎群中分布最为广泛的一种 , 是传统
的药用动物 , 中医以完整的干燥虫体入药 , 称为 “全蝎 ”或 “全
虫” 。其性平 、味腥 、有毒 ,有祛风 、止痉 、通络 、解毒功能 , 可治疗
惊风抽搐 、癫痫 、中风 、半身不遂 、口眼歪斜 、偏头痛 、破伤风 、淋巴
结核和风疹疮肿等症。药理研究表明 ,蝎子对心脑血管疾病和多
种类型的癌症也有一定的疗效 , 对预防许多慢性病有显著的效
果 [ 1] 。由于受到中医 “药食同源 ”的理论的影响 , 现在人们也把
它作为一种功能食品搬上了餐桌。一般认为蝎子对机体作用的
主要成分是蝎毒 [ 2] 。近年 , 有人研究蝎子生长过程中的代谢产
·548·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3