全 文 ：药物分析杂志 C hi r . J P ha m rA na l Z) (X5 , 25 ( 7 ) 一 7 8 1 一
反相高效液相色谱法测定陆英中齐墩果酸和熊果酸的含量
廖琼峰 , 李继 , 吴筱妹 , 毕开顺 ’
(沈阳药科大学 沈阳 1 0 16)
摘要 目的 :建 立同时测定陆英中齐墩果酸和熊果酸的含量渔定方法 。 方法 :采用 H胖 I’s il 一 O仍 2柱 (4 . 6 m m x 250 mm , 5 四 ) , 甲
醇 一 水 ( 85 : 15) 为流动相 ,流速 a s ml · 而 n 一 ’ , 检测波长 21 0 n m ,柱温 30 ℃ 。 结果 : 齐墩果酸在 2 6 一 l以 . 0 此 · m l 一 ’ 范lb1 内线性
良好 , 卜刊 1方程为 Y = 1.淤 xl 了x 一 8 .斯 x l丁 (r 二 .0 卿为 ) ,平均回收率为 lm . l% ;熊果酸在 2 . 3 一 兜 . 0 此 · nrI 一 ’范 l卜I内线性
良好 , 回归方程为 Y = 1. 26 x l了x 一 5
.
1肠 / 10 , ( r = .0 臾从〕) , 平均回收率为叨 . 6% 。 结论 : 该法简便 、准确 、 币现性好 , 适用 于
陆英中齐墩果酸和熊果酸的定量分析 。
关健词 :陆英 ;齐墩果酸 ;熊果酸 ;反相高效液相色谱法
R P 一 H P L C D e t e r m i n ;l t i o n o f o l e a n 0 l i c
U r S 0 l i C A C id in aS
j n b u e u S Ch in 召n s 王S
A c id s n d
L in d l
.
L IA o Qi
o n g 一 fe n g , L l J i , w U X i a o 一 m e i , B l K a i 一 s h u n
’
( S h e n y a n g P h~
a e e u t i e al U n i v e sr i t y
,
S h e n y a n g 1 1X() 16
,
C h i n a )
A b st ra c t o bj
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S a lnb uc us hc ine ns is U
n d l二 M e ht o d s : A H y pe rs il e 一 0 1)S Z e o l u m n ( 4
.
6 m m 2 5 0 m m
,
5 林m ) w a s u s e d 硒 rh t h e m o b il e
p h a s e be i n g m e t h a n o l 一 w a t e : ( 8 5 : 15 )
,
fl o w ar te b e i n召. 0 . 8 m I J · m sn 一 ’ , d e te mr i n a t i n g w a v e l e n gt h l) e i n g 2 10 n m
,
t h e
e o l u m n t e m pe ar t u er b e i n g 30 ℃ . eR s ul st : hT e e al ib ar *i o n e u vr e w a s l i n e a r i n t h e ar n g e o f 2
.
6 一 l以 . 0 林g · m l J 一 ’
fo r o l e a n o l i e a e id (
r = 0
. 卯 , 〕 ) , a n d t h e er 笋 s s i o n o q u a t io n be i n g y 二 1 . 2 6 9 x l o 4 X 一 8 . 2 9 6 / 10 , . T h e a v e r -
a g e r e e o v e口 w a s 10 2 . 1% . hT e e a l ib r a t i o n e u vr e w a s li n e a r i n th e ar n g e o f 2
.
3 一 9 2
.
0 林g · m I J 一 ’ fo r u sr o l ie a e id
(
r = 0
.
9 9 9 9 )
, a n d t h e r e 『 e s s i o n e q u a ti o n b e i n g y = 1 . 2 2 6 x 10 ` X 一 5 . 1 8 6 x 10 , . T h e a v e r a g e er e o v e即 w a s
9 7
.
6%
.
C o n e l u s i o n : Th e m e t h o d 15 s im p l e
, a e e u ar to a n d er p or d u e ib l e fo r q u a l i ty e o n tr o l o f S a m b uc 出 e h ien 出 is
I
J
i n d l二
K e y w o r ds
: S a m buc 璐 e h i舰瓜15 U n d l . ; o l e a n o l i e a e i〔 l : u sr o li e a e id : RP 一 H P L C
中药陆英为忍冬科接骨木属植物陆英 sa m bt 一 等 ,但关于陆英的研究报道仅见对药材的形状 、 显
cus
。 hi en o is iL dn l
. 的干燥全草 , 又称接骨草 、 臭草 。 微特征进行观察及理化鉴别 [6伙本文首次采用反
味甘 、 微苦 , 性平 。 早在 《神农本草经 》中就有记 相高效液相色谱法同时测定陆英中齐墩果酸 和熊
载 ,是我国民间常用草药 ,产于全 国各地 , 资源丰 果酸含量 。
富 。 有祛风利湿 , 活血散癖 , 消炎止痛 , 镇痉消肿 1 仪器与试荆
凳薛聂!膏瞿斋粼:黔翼篡资瞿: 一 杯岛津 CL 一。DA 高效液相色谱仪 ; 、 P。 -的有效成分熊果酸 、齐墩果酸对四氯化碳引起 的 10 A 紫外检测器 ;C LA S 一 CL 10 A 色谱工作站 。 对
急 、慢性肝损伤具有明显的防治作用 z[] 。 齐墩果 照品齐墩果酸 (批号 70 9 一 9 803 ) 和熊果酸 (批号
酸和熊果酸的含量 测定有衍生 化气相色谱法 仁’ 1 、 1 07 42 一 20 2 12 ) 购 于 中国药品生物制 品检定 所
毛细管胶束 电动色谱法川 和 高效液相色谱法 [二` ] (纯度均大于 98 % ) 。 陆英由湖南 、 江西和安徽等地
* 通讯作者 ( e o二 s po n d i n g a u t h o r )
药物分析杂志 Ch in JhPr am An l aZ( X ) 5
,
25 ( 7 )
购得 ,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定 。 甲醇为色
谱纯 ;提取用乙醇为分析纯 ;水为二次蒸馏水 。
2 色谱系统及系统适用性试验
色谱柱 : H y p e r s i l 一 O D S: ( 4 . 6 m : n x 2 5 0 m m ,
5 林m ) ;流动相 : 甲醇 一 水 ( 85 : 15 ) ; 流速 : .0 s mL ·
而 n 一 ’ ;检测波长 : 1Z 0 ln ;柱温 : 30 ℃ ;进样量 : 20 泌。
按齐墩果酸和熊果酸计算理论塔板数不低于 7X( X) ,拖
尾因子在 .0 95 一 1. 05 之间 ,两峰与相邻峰的分离度大
于 1 . 5 。
3 溶液的制备
3
.
1 混合对照品溶液 取齐墩果酸和熊果酸对照
品约 5 m g ,精密称定 , 置 10 m L 量瓶中 ,用甲醇溶解
并定容至刻度 ,制成每 1 m L含齐墩果酸 0 . 52 m g 和
熊果酸 0 . 46 m g 的混合对照品溶液 。
3
.
2 供试品溶液 取陆英样品各约 1 9 , 精密称
定 , 置索氏提取器中 ,加人 95 % 乙醇 10 m L , 回流
提取 s h 后 , 于旋转蒸发仪上挥干溶剂 , 残渣用甲
醇溶解 ,定量转移至 10 m L 量瓶中 , 用甲醇定容至
刻度 , 摇匀 ,精密吸取该溶液 1 . 0 m L 置 or m L 量
瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 微孔滤膜过滤 , 取
续滤液备用 。
4 线性关系考察
精密吸取上述混合对照品溶液 a 05 , a l , Q Z , a s ,
1
.
0
,么 o mL
,置于 or mL 量瓶中 ,用 甲醇稀释至刻度 。
吸取加 泌 ,注人高效液相色谱仪 , 以对照品峰面积为
纵坐标 ( )Y ,以对照品溶液的浓度 (此 · mL 一 ’ )为横坐
标 ( X ) ,绘制标准曲线 ,结果表明 :齐墩果酸 、熊果酸浓
度分别在 2 6 一 1以 . 0 此 · mL 一 ’ 和之 3 一 哭 . 0 此 ·
mL
一 ’范围内线性良好 ,回归方程分别为 :
Y 二 1
.
2 69 x 10 4 X
一
8
.
2 9 6 x 10 3 r = 0
.
99 9
Y 二 1
.
2 2 6 x 10
4
X
一
5
.
18 6 x 10 3 r = 0
.
99 9
5 精密度试验
精密吸取齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液
20 林L ,注人高效液相色谱仪 , 重复 6 次 , 测得峰面
积 ,计算齐墩果酸和熊果酸的峰面积平均值分别为
5 15 3 7 9 和 4 2 0 5 3 , R S D 分别为 1 . 0% 和 0 . 9 % 。
6 , 友性试验
取江西新建样品 ,按 “ 3 . 2 ” 项下方法平行制备 6
份溶液 ,取 20 林L进样分析 ,齐墩果酸和熊果酸含量
平均值分别为 0 . 5 6 5 5 m g · g 一 ’ 和 2 . 0 59 m g · g 一 ’ ,
R SD 分别为 3 . 0% 和 2 . 8% 。
7 回收率试验
取江西新建已知含量的陆英样品约 0 . 5 9 ,精密
称定 ,共 6 份 , 分别精密加入 520 此 · m L 一 ’ 的齐墩
果酸对照品溶液 0 . 3 , 0 . 6 , 1 . 0 m L 和 840 此
·
m L
一 ’
的熊果酸对照品溶液 0 . 5 , 1 . 0 , 1 . 5 m L , 按 “ 3 . 2 ” 项
下方法操作 ,齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别
为 10 2 . 1% , 9 7 . 6% 。
8 样品侧定
取;不同陆英样品 9 个 , 按 “ 3 . 2 ” 项下方法制备
溶液后进样分析 , 按标准曲线计算齐墩果酸和熊果
酸的含量 ,所得结果见表 1 ,其色谱图见图 1。
衰 1 防英样品训定结果 `叱 · g 一 , , . 二 2)
T a b I A且 . y 成肠. 云uc . d 山“ . 臼 L I. 门 . p r目 . 引加
黑 部位(砚四 1 ) 齐墩果破 麟果艘(月玉. d 阮 . 云」) ( u 拍d 」e 二记 )
安 . 毫州 ( 浅曲俐 . A汕` ) 全草 仆 . 七 )
翻南永兴 ( Y O叫乒 .叱 , H
~
) 全草 ( h的 )
江西宜春 ( Y i e卜un , 】I创叹乒i ) 全草 伪. 由 )
江西新建 ( X i nj二】四堪冲 ) 全革 (阮山 )
湖南永兴 ( Y . 叫乒 I叱 , H~ ) 茎 ( 砒m )湖南永兴 ( Y叫乒 i叱 , H一 ) 叶 ( l已汀)湖南永兴 ( Y . 唱冲ng , H一 ) 根 (献 )
0
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.
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.
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.
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.
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.
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图 1 对照品 ( A )与江西新建样品 ( )B 色谱图
igF I C }的四 t q必助 an Of e h e而 cal 比 fe 比 n ce s司帕切曰 ces ( A ) 朋 d ~ p卜
f拍 . Ji叫幼 兀川ha ( B )
1
.齐墩果酸 (日份目山 e 函 d ,孤 4 m ) 2 . 熊果酸( u几d i c 州d , 2 1 . s nu )
药物分析杂志 C lli n J Pham rA na l 2) 0(5
,
25 ( 7 ) 一 78 3 一
9 讨论
,
.
1 提取溶剂的选择 本实验以甲醇 、 95 % 乙醇对
陆英药材超声提取 30 m in , 回收溶剂至干 ,残渣用 甲
醇溶解 , 定 量转移 至 or m L 量瓶 中 , 精密 吸取
1
.
0 m L用甲醇稀释定容置 10 m L 量瓶中 , 每种溶剂
平行做 2 份 。 结果表明 95 % 乙醇提取率最高 。
9
.
2 提取方法的选择 本实验以 95 % 乙醇为提取
溶剂 ,考察了超声 、 回流 、冷浸以及索氏提取 4 种提
取方法 ,每种方法平行做 2 份 。 结果表明索氏提取
提取率最高 。
9
.
3 提取时间的选择 本实验以 95 % 乙醇分别索
氏提取 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 1 2 h , 结果表明 9 5% 乙醇索 l戈
提取 s h 为最佳提取方法 。
,
.
4 小结 陆英中化学成分复杂 ,且齐墩果酸和摊
果酸结构中无共扼体系 , 紫外吸收波长较短 ,本文选
Z or n m 可同时测定该 2 种化学成分的含量 。 流动
相中甲醇比例的增减 ,柱温的变化 ,对保留时间和分
离效果影响很大 。 从表 1 可看出陆英中熊果酸的含
量明显高于齐墩果酸 。 不同产地的陆英中 ,齐墩果
酸和熊果酸含量存在一定差异 , 可能与不同生长条
件有关 。 同一产地的陆英不同药用部位 , 齐墩果酸
和熊果酸的含量也有较大差异 。 本法简便易行 、 准
确灵敏 ,适应范围广 , 可用 于检验 、 评价陆英及其产
品质量以及生产工艺控制 。
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( 本文于 2《X抖 年 l ) ] 12 [1修改回 )