全 文 :第 32 卷 第 3 期
2 0 1 4 年 3 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 32 No. 3
Mar. 2 0 1 4
中
华
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医
药
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学
刊
DOI:10. 13193 / j. issn. 1673-7717. 2014. 03. 067
茉莉根醇浸膏镇痛作用的实验研究
毛磊1,张玲1,刘奇1,丁艺雪1,张如松1,赵维良2
(1.浙江中医药大学药学院,浙江 杭州 310053;2.浙江省食品药品检验所,浙江 杭州 310004)
摘 要:目的:研究茉莉根醇浸膏对小鼠的镇痛作用。方法:采用醋酸扭体法、热板法、热水浴法、尾根加压法
进行茉莉根醇浸膏对小鼠的镇痛实验研究。结果:茉莉根醇浸膏可明显抑制ip0. 6%冰醋酸诱发的小鼠扭体反
应,最大抑制率为 44. 38%;药物对热板模型小鼠痛阈无显著影响;药物高剂量能显著提高热水浴刺激的小鼠痛
阈(P < 0. 05) ;药物可明显提高小鼠尾根受机械刺激的痛阈(P < 0. 01)。结论:茉莉根醇浸膏对小鼠扭体实验、小
鼠尾根加压实验及小鼠热水浴甩尾实验均显示较好的镇痛作用,但对热板实验无镇痛作用。
关键词:茉莉根醇浸膏;醋酸扭体法;热板法;热水浴法;尾根加压法;镇痛作用
中图分类号:R284. 3 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)03-0641-04
Study on Analgesic Effects of Alcohol Extract of Root of Jasminum sambac(L.)Ait
MAO Lei1,DING Yixue1,LIU Qi1,ZHANG Ling1,ZHANG Rusong1,ZHAO Weiliang2
(1. College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang,China;
2Food and Drug Inspection Office of Zhejiang Province,Hangzhou 310004,Zhejiang,China)
Abstract:Objective:To study the analgesic effects of alcohol extract of the root of Jasminum sambac(L.)Ait. Meth-
ods:The analgesic effect was studied by using tests of acetic acid - induced writhing,hot plate,hot water - induced tail
flick and exerting pressure on tail in mice. Results:Alcohol extract of the root of Jasminum sambac(L.)Ait remarkably
inhibited the writhing response induced by 0. 6% acetic acid,and the max inhibitory rate was 44. 38% . There was no sig-
nificant effect on releasing the pain threshold on hot plate test in mice. High dose could significantly increase the pain
threshold (P < 0. 05)on hot water - induced tail flick test in mice. Drugs can improve the pain threshold on exerting
pressure on tail in mice (P < 0. 01). Conclusion:Alcohol extract of the root of Jasminum sambac(L.)Ait has good anal-
gesic effects on acetic acid - induced writhing,hot water - induced tail flick and exerting pressure on tail in mice,but has
no analgesic effect on hot plate test in mice.
Key words:Alcohol extract of the root of Jasminum sambac(L.)Ait;acetic acid - induced writhing;hot plate;hot
water - induced tail flick;exerting pressure on tail in mice;analgesic effect
收稿日期:2013 - 10 - 10
作者简介:毛磊(1989 -) ,男,江苏扬州人,硕士研究生,研究方向:
天然药物有效成分的研究与新药开发。
通讯作者:赵维良(1959 -) ,男,浙江杭州人,主任中药师,硕士,研
究方向:天然药物有效成分的研究与新药开发。
疼痛是一种不愉快的感觉和情绪上的感受,伴有或具
有潜在的组织损伤[1],是临床最常见的症状之一,涉及临
床各科,见于多种急、慢性疾病过程之中。疼痛在心理、生
理、精神及社会多个方面都严重影响着患者的生活质量,已
成为全球性的公共健康问题。因而对各种痛症的研究和治
疗日益受到全球医药界的重视。探讨疼痛的发病机理,寻
求有效防治痛症的途径、方法和药物是当前医药界的重要
任务之一。
木犀科植物茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait) ,在我国
南方的江苏、浙江、福建、台湾、广东、四川、云南等省广泛栽
培。其花、根和叶均可供药用,但花、叶与根的性味、功效又
有所差异。其根苦、温,有毒,具有麻醉、安眠、止痛之功,用
于跌损筋骨、龋齿、头痛、失眠等症[2 - 4]。《本草会编》中记
载,“以酒磨一寸服,则昏迷一日乃醒,二寸二日,三寸三
日”。本实验就其镇痛作用进行实验研究,为以后的深入
研究提供药理实验研究依据。
1 材 料
1. 1 实验动物
健康 ICR小鼠 170 只,体重 18 ~ 22 g,由浙江中医药大
学实验动物中心提供,许可证号:SCXK( 浙)2008 - 0033。
1. 2 实验药品
茉莉根:产自金华,经浙江中医药大学张如松教授鉴定
为木犀科植物茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait) 的根。95%
乙醇( 分析纯) ( 杭州长征化工厂,批号:20051014) ;冰醋酸
( 上海申翔化学试剂有限公司,批号:20050718) ;阿司匹林
肠溶片( 南京白敬宇制药有限责任公司,批号:081002)。
1. 3 实验仪器
BüCHI Rotavapor R - 200 旋转蒸发仪( 瑞士BüCHI 公
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司) ;AHZ - D循环水式真空泵( 巩义市英峪予华仪器厂) ;
DLSB - 10130 低温冷却循环泵( 巩义市京华仪器有限公
司) ;YLS - 6B智能热板仪( 济南益延科技发展有限公司) ;
YLS - 3E电子压痛仪( 山东省医学科学院设备站) ;HH - 2
型数显恒温水浴锅( 常州国华电器有限公司) ;AB104 - N
型电子天平( 瑞士METTLER TOLEDO公司) ;小鼠灌胃器;
1ml注射器;烧杯;量筒等。
2 实验方法
2. 1 药物制备
茉莉根 1500 g,10 倍量 70%乙醇室温浸泡,提取 3 次,
每次 24 h,过滤,滤液浓缩至无醇味,得醇浸膏 388. 4 g,得
率为 25. 89%。取适量于实验前用生理盐水稀释至所需浓
度。
2. 2 小鼠醋酸扭体实验[5]
取健康 ICR小鼠 40 只,雌雄各半,随机分为 4 组,每组
10 只,即茉莉根醇浸膏高剂量组( 按生药量4 g /kg 计算) ,
低剂量组(2 g /kg) ,阿司匹林阳性对照组(0. 2 g /kg) 和阴
性对照组( 给予相同体积的生理盐水) ,给药体积为0. 1
mL /10 g。灌胃给药,每天 1 次,连续 7 d,于末次给药后 1 h
后各组小鼠腹腔注射 0. 6%冰醋酸 0. 2 mL /只,观察小鼠在
15 min内的扭体数及扭体潜伏期。扭体反应表现为腹部收
缩,躯体扭曲,后肢伸展及蠕动。并按下式计算疼痛抑制百
分率:疼痛抑制百分率=[( 阴性对照组扭体次数-实验组
扭体次数)/阴对照性组扭体次数]× 100%。
2. 3 小鼠热板法镇痛实验[5]
取雌性健康 ICR 小鼠若干只,置于预热至(55 ±
0. 5)℃的金属热板上,开始计时,直至小鼠出现舔后足
反应后,停止计时。这段时间为该只小鼠的基础痛阈,
基础痛阈要求在 5 ~ 30 s之间,其余不合格的小鼠剔除。
筛选合格小鼠 40 只,并将其随机分 4 组,每组 10 只。
先测量基础痛阈值,每鼠测 2 次,每次间隔 10 min,取平
均值。然后分别灌胃给高、低不同浓度的茉莉根醇浸膏
水溶液( 按生药量4 g /kg,2 g /kg 计算) ,阴性对照药给
予相同体积的生理盐水溶液,给药体积为 0. 1 mL /10 g,
连续 7 d,末次给药后 1h 测给药后痛阈值,阳性对照组
腹腔注射颅痛定 20 mg /kg,于给药后 0. 5 h 测痛阈值,
测试过程中若小鼠 60 s仍无痛觉反应,则停止测试而按
60 s计。并按下式计算痛阈值提高百分率(%) : 阈值提
高百分率(%)=[( 给药后痛阈值-给药前痛阈值痛)/
给药前痛阈值]× 100%。
2. 4 小鼠热水浴甩尾实验[5]
预先筛选痛阈正常、健康 ICR小鼠 40 只,雌雄各半,随
机分成 4 组,每组 10 只。将小鼠尾下部垂直浸入 50 ℃恒
温水浴中,鼠尾浸入长度自尾端 5 cm 左右,以鼠尾回缩出
水面的潜伏期为痛阈指标。先测量基础痛阈值,每鼠测 2
次,每次间隔 5 min 以上,取平均值。然后分别灌胃给高、
低不同浓度的茉莉根醇浸膏水溶液( 按生药量4 g /kg,2 g /
kg计算) ,阴性对照药给予相同体积的生理盐水溶液,给药
体积为 0. 1 mL /10 g,连续 7 d,于末次给药后 1 h 测定痛
阈,阳性对照组腹腔注射颅痛定 20 mg /kg,于给药后 0. 5 h
测痛阈值。并按下式计算痛阈值提高百分率(%) :阈值提
高百分率(%)=[( 给药后痛阈值-给药前痛阈值痛)/给
药前痛阈值]× 100%。
2. 5 小鼠尾根加压实验[5]
预先筛选痛阈正常、健康 ICR小鼠 40 只,雌雄各半,随
机分为 4 组,每组 10 只。用尾压测痛仪测定小鼠给药前痛
阈,即基础痛阈,方法是:将小鼠尾( 约尾尖1 /3 处) 置于压
痛仪操作台上,施加连续递增压力,当小鼠出现挣扎退缩或
嘶叫反应时,显示器读出的压力值即为痛阈指标。然后分
别灌胃给高、低不同浓度的茉莉根醇浸膏水溶液( 按生药
量 4 g /kg,2 g /kg计算) ,阳性对照组给予阿司匹林(0. 2 g /
kg) ,阴性对照药给予相同体积的生理盐水溶液,给药体积
为 0. 1 mL /10 g,每天 1 次,连续 7 d,于末次给药后 1 h测定
痛阈值。并按下式计算痛阈值提高百分率(%) :阈值提高
百分率(%)=[( 给药后痛阈值-给药前痛阈值痛)/给药
前痛阈值]× 100%。
2. 6 数据处理以及统计方法
采用 EXCEL软件统计系统进行统计处理,各组计量资
料以均值 ±标准差(珋x ± s) 表示,组间差异采用t 检验方法,
以 P < 0. 05 为差异显著的标准;计数资料采用χ2检验,以 P
< 0. 05 为差异显著的标准。
3 结 果
3. 1 小鼠醋酸扭体实验
与阴性对照组比较,茉莉根醇浸膏高、低剂量组均能明
显减少小鼠扭体次数(P < 0. 05,P < 0. 01) ,但对延长扭体
潜伏期无显著性差异。表明茉莉根醇浸膏具有明显的对抗
冰醋酸引起的疼痛作用。见表 1,图 1。
表 1 茉莉根醇浸膏对醋酸致痛
小鼠扭体反应的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
扭体潜伏期
(s)
扭体次数
( 次数)
疼痛抑制
率(%)
醇浸膏高剂量组 4 217. 56 ± 57. 752 19. 30 ± 9. 534** 44. 38
醇浸膏低剂量组 2 207. 00 ± 66. 368 20. 22 ± 8. 151** 41. 72
阿司匹林组 0. 2 402. 33 ± 110. 857** 12. 50 ± 9. 713** 63. 98
阴性对照组 - 201. 60 ± 21. 747 34. 70 ± 8. 577
注:与阴性对照组比较,**P < 0. 01。
图 1 茉莉根醇浸膏对醋酸所致小鼠镇痛的影响
3. 2 小鼠热板法镇痛实验
与阴性对照组比较,茉莉根醇浸膏高、低剂量组在给药
7 d后不能提高小鼠痛阈,无显著性差异(P > 0. 05)。表明
茉莉根醇浸膏不能对抗热板引起的疼痛作用。见表 2,图
2。
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表 2 茉莉根醇浸膏对热板刺激
小鼠疼痛反应的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
基础痛阈
(s)
给药后痛阈
(s)
痛阈提高百分率
(%)
醇浸膏高剂量组 4 20. 04 ± 4. 640 21. 21 ± 10. 883 5. 54
醇浸膏低剂量组 2 20. 65 ± 7. 245 20. 08 ± 5. 043 - 2. 82
颅痛定阳性药组 0. 2 21. 06 ± 8. 072 37. 16 ± 12. 227** 43. 32
阴性对照组 - 21. 60 ± 5. 256 21. 05 ± 6. 673 - 2. 59
注:与阴性对照组比较,**P < 0. 01。
图 2 茉莉根醇浸膏对热板刺激小鼠疼痛反应的影响
3. 3 小鼠热水浴甩尾实验
与阴性对照组比较,茉莉根醇浸膏高剂量组能提高热
水浴刺激的小鼠痛阈,有显著性差异(P < 0. 05)。低剂量
组不能明显提高热水浴刺激,无显著性差异(P > 0. 05)。
表明茉莉根醇浸膏高剂量能对抗小鼠热水浴刺激引起的疼
痛反应。见表 3,图 3。
表 3 茉莉根醇浸膏对热水浴刺激
小鼠疼痛反应的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
基础痛阈
(s)
给药后痛阈
(s)
痛阈提高百分率
(%)
醇浸膏高剂量组 4 4. 86 ± 1. 015 5. 36 ± 0. 618* 10. 39
醇浸膏低剂量组 2 4. 68 ± 0. 408 4. 97 ± 0. 916 6. 05
颅痛定阳性药组 0. 2 4. 81 ± 0. 840 7. 43 ± 1. 248** 54. 59
阴性对照组 - 4. 89 ± 0. 599 4. 60 ± 0. 839 - 5. 89
注:与阴性对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01。
图 3 茉莉根醇浸膏对热水浴刺激小鼠疼痛反应的影响
3. 4 小鼠尾根加压实验
与阴性对照组比较,茉莉根醇浸膏高、低剂量组,阿司
匹林阳性对照组均能明显提高小鼠痛阈(P < 0. 01,P <
0. 05)。茉莉根醇浸膏高、低剂量组给药后痛阈均高于阿司
匹林阳性组,但无显著性差异(P > 0. 05) ,高剂量组痛阈提
高百分率可达 68. 59%,高于阿司匹林阳性组的 37. 70%。
表明茉莉根醇浸膏具有明显的对抗机械压力引起的疼痛作
用。见表 4,图 4。
表 4 茉莉根醇浸膏对尾根加压
小鼠疼痛反应的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
基础痛阈
(g)
给药后痛阈
(g)
痛阈提高百分率
(%)
醇浸膏高剂量组 4 261. 66 ± 60. 698 441. 13 ± 53. 171** 68. 59
醇浸膏低剂量组 2 278. 94 ± 66. 843 452. 06 ± 90. 223** 62. 06
阿司匹林阳性组 0. 2 287. 31 ± 71. 936 395. 64 ± 49. 739* 37. 70
阴性对照组 - 312. 39 ± 26. 670 314. 00 ± 68. 367 0. 52
注:与阴性对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01。
图 4 茉莉根醇浸膏对尾根加压小鼠疼痛反应的影响
4 讨论与结论
动物模型是研究疾病的发病机理以及寻求开发新的药
物或更有效的治疗手段的基础,理想的疼痛模型应该具备:
①致痛原因近似临床实际情况;②动物的疼痛行为反应以
及逃避疼痛刺激的反射活动与某种或某些慢性疼痛症状相
似,可以客观检测;③便于进行疼痛发生机制的研究;④慢
性制备简便,成功率高,可重复性强。⑤反复刺激几乎不引
起或只引起极小的组织损伤。
目前国内外筛选镇痛药常用的镇痛方法有物理( 热、
电、机械) 和化学刺激法,其中物理法多用于筛选较强镇痛
药,化学法主要用于筛选具有抗炎作用的镇痛药,但这些方
法都各有优缺点。另外动物实验结果与临床试验结果的平
行关系也是未知的,因此对茉莉根醇浸膏的药效学实验设
计了多种镇痛实验方法。
小鼠扭体实验是将一定量的化学刺激物质注入小鼠腹
腔,刺激脏层和壁层腹膜,引起深部较大面积较长时间的炎
性疼痛,致使小鼠出现扭体反应[5]—腹部内凹收缩、躯干
与后肢伸展、臀部抬高、蠕行等。以出现的扭体次数为疼痛
反应的定量指标。该实验是筛选镇痛药的一种较敏感、简
单、重复性好的方法,缺点是缺乏一定的特异性,不仅镇痛
药有效,有些非镇痛药( 如中枢抑制药) 也可能出现阳性结
果,个体差异较大,需同时辅助其他镇痛模型评价药物的镇
痛作用[5],故辅以了小鼠热水浴甩尾法以确证茉莉根醇浸
膏的镇痛作用。本实验采用 0. 6%冰醋酸 ip小鼠制做扭体
模型,结果显示小鼠注射冰醋酸后,表现出腹部内凹收缩、
躯干与后肢伸展、臀部抬高、蠕行等歪扭反应,与文献报道
一致,说明该模型制做是成功的。茉莉根醇浸膏高低剂量
组均可较好的抑制小鼠扭体反应,减少其扭体次数,最大抑
制率达 44. 60%,表明茉莉根醇浸膏对腹腔注射化学刺激
物质引发的小鼠扭体反应具有显著地抑制作用。
小鼠热板实验是一种常用的热刺激致痛模型[6],不同
个体对热板刺激反应有不同表现,舔足为一保护性反应,因
收稿日期:2013 - 10 - 17
作者简介:赵艳霞(1985 -) ,女,山东人,硕士研究生,研究方向:中
药化学成分。
通讯作者:邓雁如(1963 -) ,女,江西人,教授,研究方向:中药化学
成分。
此通常作为疼痛反应指标,热板致痛反应有高位中枢参与,
对仅具有外周镇痛作用的非甾体抗炎药不敏感,是区分麻
醉性镇痛药和非甾体镇痛药有效模型[7],适用于筛选具有
较强镇痛作用的药物。对镇痛药的定位有一定的作用,所
以在疼痛的实验研究中,热板疼痛模型应用比较广
泛[8 - 10]。实验结果显示,与阴性对照组比较,茉莉根醇浸
膏高低剂量组不能对抗热板引起的疼痛作用。说明该药可
能不是中枢镇痛药或者是中枢镇痛作用不是很强。需要借
助其他镇痛模型进行进一步验证。
小鼠热水浴甩尾法和热板法都是热刺激的致痛模型,
对镇痛药的敏感性相同。但是小鼠热板反应有高位中枢参
与,而小鼠甩尾反应为脊髓反射。实验结果表明,茉莉根醇
浸膏高剂量组对由热水浴刺激引起的伤害性反应有明显的
抑制作用,显示出一定的镇痛作用。说明该药发挥的镇痛
作用可能在脊髓水平上。结合热板实验结果来看,该药的
镇痛作用部位可能有中枢的参与。
小鼠尾根加压法同样也属反射性测通模型,本方法的
优点在于同一小鼠痛阈变化很小,相近重量小鼠变异系数
很小,重复性好,对强弱镇痛药均有效,所以辅以机械刺激
实验以确证茉莉根醇浸膏的镇痛作用,实验结果表明,其具
有明显的对抗机械压力引起的疼痛作用(P < 0. 01) ,疼痛
提高百分率可达 68. 59%。
实验结果表明茉莉根醇浸膏具有镇痛作用,可以对抗
化学刺激、热刺激和机械刺激引起的伤害性反应。但对其
有效成分以及镇痛机制尚有待于进一步的研究探讨。
参考文献
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HPLC测定仙鹤草中山奈酚 - 3 - O -
(6 - p -香豆酰基)- β - D -吡喃葡萄糖苷含量
赵艳霞,陈芳,邓雁如
( 天津中医药大学,天津市中药化学与分析重点实验室,天津300193)
摘 要:目的:建立高效液相色谱法测定仙鹤草药材中山奈酚- 3 - O -(6 - p -香豆酰基)- β - D -吡喃葡
萄糖苷含量的方法。方法:采用依利特ODS C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm,5 μm) ; 流动相为乙腈- 0. 05%磷酸
(30 ∶ 70) ,流速为1. 0 mL·min -1,柱温为 30 ℃;检测波长315 nm。结果:山奈酚- 3 - O -(6 - p -香豆酰基)- β
- D -吡喃葡萄糖苷的线性范围为 1. 272 ~ 8. 904 μg·mL -1(r = 0. 9999) ;加样回收率为100. 5%,RSD为1. 94%。
结论:该方法简便易行、准确、重复性好,为仙鹤草药材的质量控制提供了依据。
关键词:仙鹤草;山奈酚- 3 - O -(6 - p -香豆酰基)- β - D -吡喃葡萄糖苷;HPLC
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)03-0644-03
Determination of Tiliroside in Agrimoniae Herba by HPLC
ZHAO Yanxia,CHEN Fang,DENG Yanru
(Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Key Laboratory of Chinese Medicine Chemistry and Analysis,Tianjin,300193,China)
Abstract:Objective:To establish the HPLC method for determination of tiliroside in Agrimoniae herba. Methods:The
chromatographic conditions were Hypersil ODS C18 column (4. 6 mm ×250 mm,5μm)at 30 ℃,acetonitrile -0. 05% phos-
phoric acid as the mobile phase. The flow rate was 1. 0 mL·min -1,and the detection wavelength was 315 nm. Results: