全 文 ：第31 卷 第l期
2 0 1 3 年 l 月
中 华 中 医 药 学 刊
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V ol . 3 1 N o. l
Jan . 2 0 1 3
杨梅树皮提取物体外抗人肺腺癌 A5 49 作用的实验研究
戴关海 ,童哗玲 ,任泽明,王波波 ,杨锋
(浙江省中医药研究院基础实验研究所 ,浙江 杭州 3l 0( 刃7
摘 要:日的:分离筛选出杨梅树皮中具有杭人肺腺癌 A5 49 的有效部位 方法:来用系统溶剂提取分离法,
从杨梅树皮中分离出有效成分 ,通过, H 一TdR 掺入法观察各提取物体外对A5 49 细胞的抑制作用 ,确定抑瘤效果
最好杨梅树皮提取物 结果:各杨梅树皮提取物对 A5 49 细胞均有很好的抑制作用 ,其中杨梅树皮醉提取物和氛
仿萃取层部位对人肺膝癌A5 49 的抑制作用最明显,抑制率分别为3.5% 一97 .0% !38 .7% 一9 .4% ,并且具有较
好的量效关系结论:杨梅树皮提取物体外对人肺腺疮A5 49 具有很好的抑制作用
关键词:杨梅树皮提取物;人肺腺痛 A549 ;抗肿瘤
中图分类号 :R2 85 .5 文献标志码:A 文章编号:167 3 一7717( 加13) 01 一0 81 一02
任什eCt of EXt 9acts fro m B ark of 协 ,FiC a rL lb ra on R esiat ing H um an
L ung Ad en ac a ro ino m a A5 49 C ells in V 找ro
D AI Guan gh ai ,TO N G Y eling ,RE N Ze面ng ,W A N G Bobo ,Y A N G Feng
(Institue of Basi e M edieine , Z hej ian g A eade卿 Of 叭ra di tion al C hinese M 诫 eine ,H an 乎hou 3 l0( 犯7 , Zhej ian g , C hina )
A bstra Ct :Obje etir e:To ob se rv e th e efe ct of ex妞cts 加m bark of 屿愉a 几必ra on re si ting the hu m an hi ng ad ~ ar-
ci no ma A万49 cd o in vitro. 赶d彻山:A cti vi ty c0InP os it on w as extracte d fro m bark of 构诚 a o bra wi th 由氏rent solvents
叨d se ns ltivity test of 3H 一Td R inc o耳用ration as say 哺as als o us ed to de te ct the e巧贸t of i南 bit in g A5 49 cel 师 ex坛叨ta
加m bark of 妈诚a 耐 ra in vi tro .双亡3ul/ :1 show ed th at ex trac ts fro m bark of 均诚a ru 6ra had go d inhi hi tio n to A5 49
eel , espe cial y eth an ol声tro leum eth er l即er and eth an olethrl ac etat e l即er. The pro life ra tion inh ihi tion rat es wer 3.5%
一97 .0% 助d 38 .7% 一9 .4% ,朋d al so had a dose 一de Pe nd ent ~ er . co nc l山勿n :E xtracts fro m bark of 场愉a
励 ra has g以记 efe et on re sisti n g tUm or #
Key w ord s:extr acts fro m bark of 胶州ca rub ra ;hu m an hi ng adeno care in ~ A5 49 cel s;an ti 一tu m or
杨梅 [场校 / rub a (肠ur. ) Sieb. et Zu ce.]系杨梅科
(M州cae )杨梅属 (M州ca )植物 ,常绿乔本 ,为我国特产水
果 ,杨梅树皮中主要含有黄酮类 !单宁类 !三菇类 !二芳基庚
烷类等化合物 1-]杨梅树皮味苦 !性温 ,具有抗病毒 !抗
炎 !抗氧化 !清除自由基 !免疫调节及抗雄激素活性及抗过
敏等功能12一, 2我们在进行抗肿瘤药物筛选时 ,发现杨梅
树皮提取物在体外具有较高的抗 A5 49 肿瘤细胞作用 ,现
将结果报道如下
实验材料
实验药物 杨梅树皮:浙江省永嘉县潘坑森森农业开
中,.一学刊
发场提供 ;氟尿略咤(5 一Fu ) :0.25 岁10 m L ,批号 1105131 ,
天津金耀氨基酸有限公司生产
1.2 实验试剂 RP M I一1640 培养液:批号 1108巧05 ,0.
收稿日期:20 12 一08 一13
墓金项目:浙江省科技厅计划资助项目(20 1 FZ 2X珍)
作者简介:戴关海(1972 一) ,男 ,浙江绍兴人 ,副研究员 ,硕士研究
生 ,研究方向:中药药涸魏
通讯作者:杨锋(195 5 一) ,男 ,浙江诸暨人 ,研究员 ,硕士 ,研究方
向:中药药理 E一ail :8 08 22 14 @ 163 .om
25 % 场 Ps in :批号 11081 506 均由吉诺生物医药技术有限公
司产;超级新生牛血清 :杭州四季青生物工程材料有限公司
产 ,批号 1(X) 430 ;氮 一胸腺吻吮核昔 :中国科学院上海应用
物理研究所生产 ,浓度 I lnc / m L ,比度30 c订m M ,批号 10 -
n 一2 ,使用前用 H an k乞液配成 20 林c订m L ;A5 49 细胞株:中
国科学院上海药物研究所引进 ,本实验室液氮保存 ;无水乙
醇 !石油醚(印一o e ) !乙酸乙醋 !氯仿 !正丁醇 !二甲基亚
矾:均为分析纯,由成都市科龙化工试剂厂生产
1.3 实验仪器 CO Z水套培养箱:型号 31n 型 ,美国热电
公司产;液闪仪:型号2050 型 ,PA CK A R D 公司产;细胞收集
仪:浙江绍兴坡扩医疗器械厂产;H R40 一n 一A2 医用净化
工作台:青岛海尔特种电器有限公司;R E20( 刃A 型旋转式
减压蒸发仪:成都市蜀华西部科技中心有限公司生产 ;GS
一6R 离心机:B ec km an 公司生产 ;BSZ ro S 电子天平:Sartori -
us 公司生产 ;CK鸿0 一兄00 倒置显微镜:日本 O LY M PU S 公
司生产;Yx Q 一208 sD 电热蒸汽灭菌器:嘉兴市中新医疗仪
器有限公司生产
2 实验方法
2.1 杨梅树皮提取物的制备 取干燥清洁的杨梅树皮药
材 10以2g ,剪碎 ,置于蒸馏烧瓶中,加 3O x 2m L 的80 % 乙醇 ,
DOI：10.13193/j.archtcm.2013.01.85.daigh.045
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中 华 中 医 药 学 千组
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so e水浴回流提取 2 次 ,每次 Z h ,合并 2 次提取液 ,过滤 ,
滤液减压浓缩 ,回收乙醇 ,干燥 ,得醇提物(A 样品)醇提
物(A 样品)加水热溶后 ,依次用 1.6 倍量石油醚 !氯仿 !乙
酸乙醋 !正丁醇各萃取二次 ,合并各萃取液 ,分别于旋转蒸
发仪上80 e 回收回收溶剂 ,真空减压干燥至恒重 ,得石油
醚萃取物(B 样品) !氯仿萃取物(C 样品) !乙酸乙醋萃取
物(D 样品) !正丁醇萃取(E 样品)粗提部位
2.2 杨梅树皮不同提取物体外抗 A5 49 作用实验 取对
数生长期人肺腺癌 A5 49 细胞株 ,用0 .1% 胰蛋白酶消化 ,
按肿瘤药敏试验方法制成 5 x 10勺m L 浓度单细胞悬液 ,取
10 卜L 分别加至% 孔平底培养板中 ,37 e !5% C 02培养箱
培养 24 h 后分别加人不同浓度(12 .5 一40 林岁m L) 的杨梅
树皮提取物(A 一E 样品)10 泌 ,每一药物浓度做 3 个复
孔 ,同时作含 10 % FC S 的培养液和 5 一Fu (25 卜岁m L) 对
照 ,37 C !5 % C 02培养箱培养 48 h 后分别加人含 0.3 林ei
, H 一Td R 的培养液50 ul ,继续培养 16 h ,用 x s 一24 细胞收
集仪收集细胞 ,20 50 型液闪仪测定每个样品脉冲数(叩m ) ,
用 3 孔的平均 cP m 计算出杨梅树皮不同提取物对 A5 49 细
胞的抑制率
3 实验结果
3.1 杨梅树皮不同有机溶剂提取的得率 结果见表 1
由表 1 可见 , 杨梅树皮 乙醇提取物得率较高, 为
30 .0% ,其次为正丁醇及氯仿提取物 ,分别为 4.69 % 与
2.6 % ,而乙酸乙醋与石油醚提取物得率较少 ,仅为1.49 %
与0.685%
表 1 杨梅树皮不同有机溶剂提取的得率%
提取物名称 10(X) g 杨梅树皮中提取物量(g )
提取物
得率(% )
乙醇提取物(A 样品) 30 .0 30 .0
石油醚萃取物(B 样品) 6.85 0.685
氯仿萃取物(C 样品) 26 .6 2.6
乙酸乙醋萃取物(D 样品) 14 .9 1.49
正丁醇萃取物(E 样品) 46 .9 4.69
3.2 不同杨梅树皮提取物对 A5 49 细胞抑制作用的影响
结果见表 2 ,插页V 图 1一6
由表 2 可见 ,不同杨梅树皮提取物对 A5 49 细胞3H -
Td R 掺人均有明显的抑制作用 ,说明杨梅树皮提取物中有对
户占49抑制作用有效成份其中杨梅树皮醇提取物(A 祥品)和氯仿萃取物(C 样品)对人肺腺癌 A5 49 的抑制作用最明
显 ,抑制率分别为 3.5% 一97 .0% !38 .7% 一9 .4% ,并且具
有较好的量效关系而相同剂量的杨梅树皮乙酸乙醋萃取
物(D 样品)与正丁醇萃取(E 样品)抑制作用相对较弱
由插页V 图 1一6 可见 , 1640 对照组细胞为贴壁生长 ,
生长良好 ,悬浮细胞(死细胞 )极少 而杨梅树皮氯仿萃取
物作用后 ,出现对 A5 49 细胞生长有明显抑制情况 ,出现大
量的悬浮细胞 ,并且与浓度出现相关性
综合杨梅树皮提取物的提取得率及本实验对 A5 49 细
胞抑制作用的效果 ,C 样品作用效果比 A 样品好 ,故有待对
C 样品进行进一步成分分析及抗肿瘤实验研究
表 2 不同杨梅树皮提取物对 A5 49
细胞的抑制作用 SI (% )
浓度(闻 mL)药物 )
2(X] l(X) 50 2 5 12 . 5 6 .25
醇提物(A 样品) 97 .0 90 .0 82 .4 45 .3 20 .0 3.5
石油醚萃取物(B 样品) 97 .4 97 .3 80 .7 43 .5 21 .6 16 .6
氯仿萃取物(C 样品) 98 .6 9 .4 92 .3 87 .5 69 .7 38 .7
乙酸乙醋萃取物(D 样品) 92.2 88.3 70.5 25.2 7.3 1.7
正丁醇萃取(E 样品) 89.0 41.2 32.4 2.7 一0.7 5.2
5 一Fu 94 .0
4 讨 论
肺癌死亡率居于各种恶性肿瘤之首位[6] ,而且有增长
趋势 , 目前手术 !放疗及化疗是治疗的主要手段 ,由于这些
治疗对正常细胞有很大的不良反应 , 因此从传统的中草药
中筛选抗癌作用强 !不良反应小的药物成为目前开发新的
抗癌药物的方向之一 ,也是近年来的研究热点[7]
杨梅树皮资源在我国极为丰富 ,经过修剪丢弃的杨梅树
枝可做为长期大量的植物来源[sI 笔者的研究结果表明该植
物具有较强的抗肿瘤活性 ,所以对杨梅树皮开发成为具有抗
肿瘤活性的药物,提高农民收人 ,特别对促进山区农民致富 !推
进新农村建设 !保护生态环境等方面有着重要作用
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第31 卷 第l 期
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中 华 中 医 药 学 刊
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杨梅树皮提取物体外抗人肺腺癌 A 54 9 作用的实验研究
(正文见 81 一82 页)
图 1 1640 对照 ( 火100 ) 图2 氯仿萃取物 50 协岁m L( x 100 )
图 3 氯仿萃取物25.0 卜岁ml( 火10()) 图4 氯仿萃取物 12.5 协g/ mL( x lo )
图5 氯仿萃取物6.25 协岁,,IL ( x 100 ) 图 6 5 一Fu 对照 25.0 林岁m L ( x l(X) )
华药中医
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