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DOI:10. 3736 /jcim20120210
http:/ /ww w. jcimjournal. com
毛志敏 , 宋海燕 , 杨丽丽 , 柳涛 , 励冬斐 , 郑培永 , 刘平 , 季光.
当药和水飞蓟提取混合物对毒性物质诱导的脂肪肝大鼠肝损伤
的防治作用. 中西医结合学报. 2012;10(2):193-199.
Mao ZM , Song HY , Yang LL , Liu T , Li DF , Zheng PY , Liu
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Integr Med . 2012;10(2):193-199.
Received September 1 , 2011;accepted October 26 , 2011;published
online February 15 , 2012.
Full-tex t LinkOut at PubMed. Journal title in PubM ed:Zhong
X i Y i J ie He X ue Bao.
基金项目:上海市教育委员会重点学科建设项目(No . J50305);
上海市科学技术委员会自然基金资助项目(No . 11ZR1436900);
上海市教育委员会预算内科研项目(No. 2010JW35);上海高校
创新团队建设项目(第一期)
Correspondence:Guang Ji , M D , P rofessor;Tel:021-64286261;
E-mail:jiliv er@vip. sina. com
Journal o f Chinese Integrative Medicine (JCI M) or
Zhong X i Y i J ie He X ue Bao is an international , peer-
review ed , open-access journal for the study of comple-
mentary and alterna tive medicine o r integ rative medicine
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ISSN 1672-1977. Published by JCIM Press , Shanghai ,
China.
O rig inal Expe rimental Research　实验论著
当药和水飞蓟提取混合物对毒性物质诱导的
脂肪肝大鼠肝损伤的防治作用
毛志敏1 , 宋海燕1 , 杨丽丽1 , 柳涛1 , 励冬斐1 , 郑培永1 , 刘平2 , 季光1 , 2
1. 上海中医药大学脾胃病研究所 , 上海中医药大学龙华医院消化内科 , 上海 200032
2. 上海高校中医内科学 E-研究院 , 上海 201203
目的:研究当药和水飞蓟提取混合物对大鼠在非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fat ty liver disease ,
NAFLD)基础上由四氯化碳(carbon tetrachloride , CCl4)诱导的肝损伤的防治作用及机制。
方法:雄性Wistar 大鼠随机分为正常组 、CCl4组 、高脂饮食组 、高脂饮食加 CC l4组 、当药和水飞
蓟混合物组(提取物组)、甘草酸二铵组 。正常组和 CCl4组喂食普通饲料 ,其余大鼠均给予高
脂饲料 ,提取物组和甘草酸二铵组大鼠同时分别采用当药和水飞蓟混合物或甘草酸二铵干预 。
8周后 ,除正常组和高脂饮食组外 ,其余各组大鼠均腹腔注射小剂量 CCl4 ,注射 48 h后收集血
清和肝脏组织。苏木精和伊红(hematoxy lin and eosin , HE)染色观察肝脏组织病理学改变 ,
检测血清丙氨酸氨基转移酶(alamine amino trasferas , ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate
amino t ransferase , AST)活性 , 肝组织匀浆中三酰甘油(t riacy lglycerol , TAG)、丙二醛
(malondialdehyde , MDA)、谷胱甘肽(glutathione , GSH)含量 ,并用逆转录聚合酶链反应 、蛋
白质印迹技术检测解偶联蛋白 2(uncoupling pro tein-2 , UCP2)基因和蛋白表达水平。
结果:肝组织 HE染色显示 ,小剂量 CCl4未导致正常饮食大鼠肝脏出现病理学异常改变 ,高脂饮食
组出现肝小叶大面积肝细胞脂肪变性 ,高脂饮食加CCl4组脂肪变性加重 ,肝细胞气球样变和炎性细
胞浸润明显 ,提取物组 、甘草酸二铵组肝细胞脂肪变性、气球样变性和炎性浸润明显减轻。与正常
组比较 ,CCl4组大鼠血清 ALT 、AST 活性 ,肝组织 TAG 、MDA 、GSH 水平和 UCP2表达无明显改变;
193 中西医结合学报 2012年 2月第 10卷第 2期　J ou rnal of C hinese Integrative Medicine , Feb ruary 2012 , Vol. 10 , No. 2
各指标除GSH 外在高脂饮食组较正常组及CCl4组略有升高;高脂饮食加CCl4组血清ALT 、AST 水
平较高脂饮食组显著升高 ,肝组织 TAG 、MDA 含量和 UCP2 mRNA 及蛋白表达显著升高(P<
0. 05),肝组织 GSH 含量明显下降;而提取物组和甘草酸二铵组各指标均显著改善(P<0. 05)。
结论:NAFLD大鼠肝组织对小剂量 CCl4损伤敏感性显著增加 ,肝组织中氧化因素上调 ,抗氧
化应激因素下调是其重要机制 。当药和水飞蓟混合物可逆向调节这些氧化应激因素的改变 ,
从而显著改善 NAFLD大鼠肝组织对 CCl4损伤的易感性 。
关键词:脂肪肝 , 非酒精性;肝损伤;四氯化碳;氧化性应激;植物提取物;大鼠
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激酶 2 /磷酸化信号转导与转录激活因子 3 的影响. 中西医结合学报. 2008;6(9):921-927.
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ted Janus kinase 2 /phospho ry lated signal transduce rs and activa to r s of transcription 3 proteins in the live r of ra ts w ith non-
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谢萍 , 周新喜 , 张琴. 非酒精性脂肪肝的发病机制和治疗 . 中西医结合学报. 2010;8(3):201-209.
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　　非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fat ty liver
disease , NAFLD)是一种与胰岛素抵抗以及遗传易
感性密切相关的代谢应激性肝脏损伤 ,其病理学改变
与酒精性肝病相似 ,但无过量饮酒史 ,包括非酒精性
单纯性脂肪肝 、非酒精性脂肪性肝炎及其相关的肝硬
化和肝细胞癌[ 1] 。NAFLD是遗传-环境-代谢应激相
关性疾病 ,其发病机制主要包括以胰岛素抵抗为主的
“一次打击”和以氧化应激 、肝细胞大量死亡 、纤维化
为主的“二次打击”[ 2] 。随着经济的发展 , NAFLD的
发病率也呈逐年上升的趋势[ 3] 。有报道显示 ,
NAFLD患者对毒性物质肝损伤敏感性显著增加[ 4] ,
对正常人无影响的某些药物 、化学物质等 ,在同等剂
量下可导致 NAFLD患者肝功能损伤 ,其损伤机制和
防治手段的研究显得十分迫切。美大康药业股份有
限公司生产的当药和水飞蓟醇提物(当飞利肝宁 ,批
准文号为国药准字Z51020085)具有化湿利胆 、清热解
毒的功效 ,临床用于治疗各种急慢性肝炎。本研究拟
探讨当药和水飞蓟提取物的混合物是否可改善
NAFLD大鼠对毒性物质的敏感性 ,并进一步研究其
发挥药效的现代生物学基础 ,为 NAFLD的临床用药
提供科学依据和指导。
1　材料与方法
1. 1　主要药品与试剂　当药和水飞蓟混合物由四
川美大康药业有限公司提供 ,生产批号为 100611 ,主
要成分包括当药苷 、当药苦苷 、龙胆碱 、齐墩果酸 、水
飞蓟素等 ,高效液相色谱法测定每克干浸膏含水飞蓟
宾 7. 5 mg;甘草酸二铵 ,江苏正大天晴药业股份有限
公司生产 ,批号为 100512。四氯化碳(carbon tetra-
chloride , CCl4)分析纯 ,购于国药集团化学试剂有限
公司;丙二醛(malondialdehyde , MDA)、谷胱甘肽
(glutathione , GSH)试剂盒 ,购于南京建成生物工程
有限公司;三酰甘油(triacylg lycerol , TAG)试剂盒 ,购
于北化康泰生物有限公司;小鼠抗解偶联蛋白 2
(uncoupling protein 2 , UCP2)多克隆抗体 , 购于
Abcam公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gly ceraldehyde-3-
phosphate dehydrogenase , GAPDH)单克隆抗体 ,上海
康成生物工程有限公司产品;化学发光试剂 ,购于
Millipore 公司。逆转录试剂盒 、聚合酶链反应
(po lymerase chain reaction , PCR)GoTaq Green
M aster混合物 ,为 Promega公司产品。
1. 2　实验动物分组及药物干预　无特殊病原体级
雄性Wistar大鼠 60只 ,体质量(170±10) g ,购自上
海斯莱克实验动物有限公司 ,许可证号为 SCXK(沪)
2007-0005。按照完全随机分组法分为正常组 、
CCl4组 、高脂饮食组 、高脂饮食加 CCl4组 、甘草酸二铵
组及当药和水飞蓟混合物组(以下简称提取物组)。
其中正常组和 CCl4组大鼠喂食普通饲料 ,其余大鼠均
喂食高脂饲料(88%普通饲料 , 10%猪油加 2%胆固
醇),且甘草酸二铵组 、提取物组分别采用对照药甘草
194 中西医结合学报 2012年 2月第 10卷第 2期　Journal of Chinese Integrat ive Medicine , February 2012 , Vol. 10 , No. 2
酸二铵或当药和水飞蓟提取物灌胃干预 ,按人鼠等效
剂量计算(70 kg 成人临床剂量 7倍),大鼠用药量分
别为 0. 3和 0. 225 g /kg ,其余组予生理盐水灌胃 。灌
胃8周后 ,除正常组 、高脂饮食组外 ,其余各组均腹腔
注射 33%CCl4(CCl4 ∶玉米油=1∶2)0. 5 mL/kg体
质量。48 h后麻醉 ,收集血清和肝组织冻存。
1. 3　指标检测方法
1. 3. 1　肝脏组织病理学观察　4%中性甲醛溶液固
定肝组织 ,脱水透明后石蜡包埋并做 4μm切片 ,脱蜡复
水后行苏木精和伊红染色 ,光学显微镜下观察并拍照。
1. 3. 2　血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转
移酶检测　腹主动脉采血离心收集血清 ,采用比色法
检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase ,
ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-
o t ransferase , AST)活性 ,用 HITACHI 7170S生化
仪检测。
1. 3. 3　肝组织 TAG 、GSH 和 MDA 检测　肝组织
剪碎后加入乙醇 、丙酮(1∶1)混合液中 ,于冰浴中匀
浆 ,充分摇匀后 ,放置于 4 ℃冰箱过夜 ,离心取上清
液。按照试剂盒说明书以比色法测定 TAG 含量 。
肝组织生理盐水匀浆取上清 ,按照试剂盒以底物反
应比色法测定 MDA 和GSH 含量 。
1. 3. 4　肝组织 UCP2基因表达检测　每组各取3个
肝脏组织分别加液氮研磨 ,加 TRIzol提取总 RNA ,用
Oligo dT 为引物逆转录得 cDNA ,进行 UCP2 PCR扩
增 ,并同时扩增 β-actin作为内参照。UCP2上游引物
序列:5′-CTACAAGACCATTGCACGA-3′;下游引物序
列:5′-CTCATAGGTGACAAACAT TA-3′。β-actin
上游引物序列:5′-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3′;下
游引物序列:5′-TTTAATGTCACGCACGATTTC-3′。
PCR产物用 1%琼脂糖凝胶电泳 ,用 TANON 凝胶成
像分析系统获得条带光密度值 ,并计算 UCP2与β-actin
的相对比值。
1. 3. 5　肝组织 UCP2蛋白表达检测　采用蛋白质
印迹法检测肝组织 UCP2 蛋白的表达 。每组各取
3个肝组织分别加液氮研磨 ,加裂解液提取组织蛋
白 ,二喹啉甲酸法检测浓度;用 10%聚丙酰烯胺凝
胶分离蛋白 , 转移至聚偏二氟乙烯膜 , 封闭后加
UCP2(1∶500)或 GAPDH(1∶1 000)单抗在4 ℃
孵育过夜;二抗室温孵育 1 h ,加化学发光试剂后 ,
用 TANON凝胶成像分析系统采集条带光密度值 ,
计算 UCP2与 GAPDH 的相对值。
1. 4　统计学方法　应用 SPSS 16. 0软件进行统计
学分析 ,实验数据以 x ±s表示 ,采用单因素方差分
析进行多组间比较 ,组间两两比较用 LSD-t法 , P<
0. 05为差异有统计学意义 。
2　结　果
2. 1　大鼠肝脏组织病理学检测　正常组和 CCl4组
大鼠肝细胞大小一致 ,排列成索状 , 核蓝染 ,位于
细胞中央 , CCl4组与正常组无明显区别;高脂饮食
组肝脏在中央静脉周围可见脂肪变性 , 细胞质疏
松化;高脂饮食加 CCl4组可见小叶内广泛分布肝
细胞大泡脂肪变性 ,细胞质疏松化 ,核被挤压到边
缘 ,在中央静脉周围有大量气球样变性 ,伴炎性细
胞浸润 ,在高倍镜下可见 Mallory 小体形成;提取
物组及甘草酸二铵组病理学改变程度较高脂饮食
加 CCl4组轻 ,脂肪变减轻 ,在中央静脉周围无明显
气球样变和炎性浸润 。甘草酸二铵比提取物改善
效果略差 。见图 1 。
图 1　各组大鼠肝脏组织苏木精和伊红染色(光学显微镜 , ×200)
Figure 1　Liver tissues of rats in different groups by hematoxylin and eosin staining(Light microscopy , ×200)
A:Normal group;B:CCl4 group;C:High-f at diet group;D:High-f at diet plus CCl4 group;E:Dangyao and Shuifeiji g rou p;F:Diammonium
g lycyrrhizinate g rou p.
195 中西医结合学报 2012年 2月第 10卷第 2期　J ou rnal of C hinese Integrative Medicine , Feb ruary 2012 , Vol. 10 , No. 2
2. 2　大鼠血清 ALT 和 AST 活性 　正常组血清
ALT 和 AST 活性与 CCl4组比较差异无统计学意
义 ,而高脂饮食加 CC l4组血清 ALT 和 AST 活性较
高脂饮食组明显升高(P <0. 05);与高脂饮食加
CCl4组相比 , 提取物组及甘草酸二铵组的 A LT 、
AST 水平显著降低(P<0. 05)。见表 1。
2. 3　大鼠肝组织匀浆液 TAG 、GSH 和 MDA 水平
　CCl4组肝组织匀浆液中 TAG 、MDA 和 GSH 含
量较正常组无明显变化 ,而高脂饮食加 CCl4组较高
脂饮食组明显升高(P <0. 05);与单纯使用高脂饮
食加 CCl4相比 ,当药和水飞蓟混合物 、甘草酸二铵
可显著降低肝组织匀浆液中 TAG 、MDA 和 GSH
水平(P<0. 05)。见表 1。
表 1　各组大鼠血清 ALT、AST水平和肝组织 TAG、MDA、GSH含量
Table 1　Serum ALT and AST levels and TAG, MDA and GSH contents of liver tissues of rats in different groups
(x±s)
G roup n ALT (U /L) AST (U /L) T AG (mg /g liver) MDA (μmol /g protein) GSH (m g /g protein)
Nom al con trol 10 32. 92±4. 17* 41. 79±7. 16* 0. 77±0. 26* 5. 30±1. 17* 106. 57±10. 62*
CC l4 10 39. 84±4. 43*△ 50. 17±1. 61△ 0. 93±0. 12*△ 5. 55±0. 89*△ 104. 15±11. 32*△
High-f at diet 10 57. 33±10. 01△ 65. 18±19. 43△ 1. 73±0. 16△ 8. 05±1. 53△ 71. 59±13. 54△
High-f at diet plus CCl4 10 82. 90±15. 80* 84. 14±7. 90* 2. 11±0. 12* 10. 11±1. 13* 28. 10±9. 07*
Dangyao and Shuifeiji 10 43. 28±3. 63*△ 38. 42±13. 35*△ 1. 20±0. 12*△ 6. 50±0. 67△ 51. 48±17. 21*△
Diammonium glycy rrhizinate 10 49. 64±12. 84△ 31. 97±7. 27*△ 1. 18±0. 13*△ 7. 58±0. 64△ 51. 96±15. 77*△
　　*P<0. 05 , vs high-f at diet group;△P <0. 05 , vs hig h-f at diet plus CCl4 group. ALT:alanine aminot ransferase;AST:aspartate
amin otransferase;TAG:t riacylglycerol;M DA:malondialdehyde;GSH :glutathion e.
2. 4　肝脏组织 UCP2 mRNA 表达水平　CC l4组
UCP2 mRNA表达较正常相升高 ,但差异无统计学
意义(P =0. 064);与高脂饮食组比较 ,高脂饮食加
CCl4组 UCP2 mRNA表达明显升高(P<0. 05);与
高脂饮食加 CCl4组比较 ,提取物组 、甘草酸二铵组
的 UCP2 mRNA 表达水平显著降低(P <0. 05)。
见图 2和表 2。
2. 5 　肝脏组织 UCP2 蛋白表达水平 　CCl4 组
UCP2蛋白的表达较正常组升高 ,与高脂饮食组比
较 ,高脂饮食加 CCl4组 UCP2蛋白的表达明显升高
(P<0. 05);当药和水飞蓟混合物 、甘草酸二铵能显
著降低 UCP2的蛋白表达水平(P <0. 05)。见图 2
和表 2。
图 2　各组大鼠肝组织 UCP-2 mRNA(a)和蛋白(b)表达
Figure 2　Expressions of UCP2 mRNA(a) and protein (b)
in liver tissues of rats in different groups
A:Normal group;B:CCl4 g rou p;C:High-f at diet group;D:
High-f at diet plus CCl4 group;E:Dangyao and Shui feiji group;F:
Diammonium glycyrrhi zinate group. UCP2:uncoupling protein 2;
GAPDH:glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenas e.
表 2　各组大鼠肝组织 UCP-2 相对表达水平
Table 2　UCP2 expression of rat liver
tissues in dif ferent groups
(x±s)
Group n
UCP2 mRNA
exp ression
(Ratio to
β-act in)
UCP2 p rotein
expression
(Rat io to
GAPDH)
Nomal cont rol 3 2. 27±0. 05*△ 1. 73±0. 01*△
CCl4 3 2. 36±0. 09*△ 1. 92±0. 02*△
High-fat diet 3 3. 71±0. 02△ 2. 73±0. 02△
High-fat diet plu s CCl4 3 5. 22±0. 02* 3. 06±0. 04*
Dangyao and Shuifei ji 3 2. 41±0. 06*△ 1. 88±0. 01*△
Diamm onium glycyrrhizin ate 3 2. 40±0. 05*△ 1. 86±0. 03*△
　　*P<0. 05 , vs high-fat diet g rou p;△P<0. 05 , vs hig h-f at diet
plus CCl4 group. UCP2:uncoupling protein 2;GAPDH:glyceraldehyde-
3-phosphate dehydrogenase.
3　讨　论
　　本实验参照范建高等[ 5] 报道的方法 ,以高脂饮
食诱导 NAFLD模型。造模 8周后高脂饮食组血清
A LT 、AST 活性和肝组织 TAG 含量显著升高;肝
组织 HE染色后光学显微镜下观察发现 ,模型组肝
细胞排列明显紊乱 ,胞质疏松有大量脂滴 ,脂肪变性
明显 ,提示 NAFLD 大鼠模型的成功建立。采用
CCl4腹腔注射是造成急性肝损伤模型的常规方法 ,
在本实验中使用了预实验中摸索到的剂量(33%
CCl4),按 0. 5 mL /kg 体质量注射 ,血清 A LT 、AST
活性 ,肝脏脂质含量和肝脏组织病理学等指标均证
196 中西医结合学报 2012年 2月第 10卷第 2期　Journal of Chinese Integrat ive Medicine , February 2012 , Vol. 10 , No. 2
实小剂量 CCl4可造成 NAFLD大鼠急性肝损伤 ,而
该剂量对正常大鼠几乎无影响。这表明 ,在环境中
相对于普通人来说为安全剂量的毒性物质 , 对
NAFLD患者由于其损伤敏感性增加可能会造成肝
损伤 。
　　正常情况下 ,肝脏线粒体和内质网会在脂肪酸
β 氧化过程中产生大量活性氧(reactive oxygen
species , ROS),但由于各种抗氧化因子的参与 ,不
会造成氧化-抗氧化水平的失衡 。但病理情况下 ,
ROS过度产生 ,抗氧化能力低下 ,过多 ROS 使抗氧
化因子耗竭 ,导致氧化与抗氧化平衡系统失调 ,产生
脂质过氧化 , 导致氧化应激[ 6] 。氧化应 激在
NAFLD发生发展中具有重要地位。研究表明 ,脂
肪肝肝损伤敏感性增加与肝脏氧化与抗氧化物比例
失调有关[ 7] 。NAFLD肝细胞内大量游离氧自由基
和继发的脂质过氧化 ,几乎耗竭掉还原型 GSH ,其
他毒性物质如 CCl4会加剧此过程 ,从而使 JNK 通
路活化 ,并进一步诱导凋亡。另外 ,在脂质过氧化过
程中 ,产生大量具有反应活性和细胞毒性的中间产
物 ,导致细胞坏死 、凋亡 ,并通过炎症反应破坏肝实
质[ 8] 。在本研究中对大鼠腹腔注射小剂量 CCl4后 ,
与喂食普通饲料组注射 CCl4相比 ,喂食高脂饲料组
的大鼠血清 A LT 、AST 活性升高 ,反映肝脏功能损
伤加重;肝组织 TAG含量也明显升高 ,表明脂肪变
更严重;脂质过氧化产物 MDA 水平上调是氧化应
激的间接反映指标;且 GSH 水平下降 。GSH 能够
自行或经过酶的催化与各种氧化剂反应以减小其对
脂质及蛋白的损伤 ,因此 ,细胞内的 GSH 水平高低
也往往被用于衡量细胞抗氧化能力的重要指标。以
上结果表明 ,NAFLD大鼠在注射 CCl4后促进了氧
化应激的发展 ,是 CC l4等肝毒性物质对 NAFLD 大
鼠造成肝损伤的原因之一 。
　　UCP 是一类位于线粒体内膜上的载体蛋白[ 9] ,
UCP 及其同系物可使线粒体氧化磷酸化解偶联 ,即
进入线粒体内膜的 H +不与 ATP 合成过程偶联 ,此
过程中能量以热的形式散失 , 形成“质子漏”[ 9-11] 。
UCP2广泛存在于骨骼肌 、心肌 、肝脏和胰腺等组
织[ 12] ,在成年人肝实质细胞中 UCP2几乎不表达 ,
但在某些病理情况下如脂肪肝或肝损伤时 ,肝实质
细胞大量表达 UCP2。UCP2 能使经线粒体内膜氧
化与磷酸化解偶联增加[ 13] ,肝细胞内 A TP 耗竭 ,增
加肝细胞对坏死的敏感性[ 14] 。范建高等[ 5] 的研究
也证实 ,随着脂肪肝造模时间的延长 , 肝脏 UCP2
表达增强 , ATP 含量下降 ,两者均于脂肪性肝炎伴
肝纤维化阶段达到峰值;Rashid等[ 15]对 ob /ob小鼠
肝细胞的研究发现 , UCP2 mRNA 转录增加了 5 ～
6倍 ,而正常小鼠肝细胞中并无 UCP2 的转录和翻
译 。Chavin 等[ 16] 在脂肪变性的肝细胞中也发现
UCP2表达增多 ,其线粒体内 ATP 含量与对照组比
较下降约 15%,并且证实 UCP2表达增多是由于与
肥胖相关的氧化应激增强 ,进而使核因子 κB 激活
的结果 。本研究中 ,我们发现 ,无论是基因或是蛋白
表达 ,喂食高脂饲料组大鼠肝脏 UCP2 均高于正常
组 ,在注射小剂量 CC l4后又显著上升 , 表明 UCP2
参与 NAFLD 发展和毒性物质对 NAFLD 的肝
损伤。
　　目前现代医学对 NAFLD和肝损伤并没有很理
想的治疗方法 ,中药在改善肝功能 、抗脂质过氧化 、
调整脂质代谢紊乱等方面有较好的疗效[ 17-19] ,受到
越来越多的关注。当药民间俗称“肝炎草” ,具有保
护肝细胞 、抗炎 、防止或减轻肝细胞损伤并促进受损
肝细胞修复的作用[ 20 , 21] 。水飞蓟的提取物水飞蓟
素被认为是肝细胞膜的有效保护剂 ,药理研究证明
其具有保护肝细胞正常结构和功能 、对抗中毒性肝
损伤 、对抗脂质过氧化 、促进肝细胞再生 、清除体内
的氧自由基以及抗肝纤维化等作用[ 22] 。在本研究
中应用的当药和水飞蓟混合物 ,为天然植物药当
药和水飞蓟的提取物 ,其主要成分是当药苦苷 、当
药苷 、獐牙菜苦苷 、齐墩果酸 、龙胆苦苷 、龙胆碱 、
水飞蓟素等 。应用当药和水飞蓟混合物干预的
NAFLD大鼠血清 ALT 、AST 水平明显下调 ,肝损
伤程度减轻 ,并且肝脏的 TAG 水平也显著下降 ,
表明该药可有效防治 NAFLD大鼠对肝毒性物质
造成的肝损伤 ,并有一定的降脂作用。当药和水
飞蓟混合物干预组大鼠肝组织 MDA 含量下降 ,
GSH 水平上调 ,表明该药物可改善机体的氧化应
激水平 ,其中对氧化应激造成的 UCP2 表达的抑
制 ,是当药和水飞蓟混合物改善脂肪肝肝损伤的
重要药效机制 。
4　利益冲突
　　所有作者声明不存在与本文相关的任何利益
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OBJECTIVE:To study the mechanism of liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4) in rats with non-
alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and the therapeutic effects of the extract mixture of Dangyao (Swertia
pseudochinensis Hara) and Shuifeiji (Silybummarianum Gaertn) on NAFLD rats with liver injury.
METHODS:Male Wistar rats were randomized into normal control group , CCl4 group , high-fat diet group ,
high-fat diet plus CCl4 injection group (model group), diammonium glycyrrhizinate group and extract mixture
group. Except the normal control and CCl4 groups , rats were fed with high-fat diet (88%normal chow , 10%
lard and 2%cholesterol) to induce NAFLD. Diammonium glycyrrhizinate and extracts were given by gavage.
After eight weeks , a nonlethal dose of CCl4 was injected intraperitoneally to all rats except the normal and
high-fat diet groups. And 48 h later , all rats were sacrificed , and serum and liver tissues were collected for
further study. Paraffin-processed liver tissue was stained with hematoxylin-eosin (HE) to observe the
pathological changes. Serum alamine aminotrasferas (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were
measured. The levels of t riacylglycerol (TAG), malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) in liver
tissues were also examined. Expression of uncoupling protein2 (UCP2)wasdetermined by reverse transcription-
polymerase chain react ion and Western blotting.
RESULTS:Liver sections stained with HE showed that the histopathological changes in the normal control
group and the CCl4 group were mild;massive hepatosteatosis diffusing in lobules was shown in the high-fat
diet groups;steatosis , hepatocellular ballooning degeneration and inflammatory infiltration were severe
around the central vein in sections of the model group. Compared with the model group , hepatosteatosis and
ballooning were significantly at tenuated in the treatment groups. Levels of serum ALT and AST , contents of
TAG and MDA and the UCP2 expression in liver tissues of the model group increased obviously , while the
level of liver GSHdecreased. Compared with rats in the model group , the above biomarkers in the treatment
groups were improved significant ly.
CONCLUSION:The mixture of Dangyao and Shuifeiji extracts can decrease the suscept ibility and degree of
liver injury induced by hepatotoxin in rats with NAFLD. Regulation of the balance of pro-and anti-oxidative
stress factors is involved in the mechanism.
KEYWORDS:fat ty live , non-alcoholic;liver injury;carbon tetrachloride;oxidat ive stress;plant extracts;
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