全 文 ：收稿日期:2006-08-14;　修订日期:2006-11-10
项目基金:湖南中医药管理局资助课题(No. 24303)
作者简介:王宇红 (1965-),女(汉族),湖南益阳人 ,现任湖南中医药大学
附一医院副主任药师 ,博士学位 ,主要从事中药新药开发与心脑血管病药
物研究工作.
鱼腥草挥发油 GC指纹图谱及其道地性研究
王宇红1, 2 ,张水寒 1 ,蔡光先1
(1.湖南中医药研究院 ,湖南 长沙　410006;　2湖南中医学院第一附属医院 ,湖南 长沙　410007)
摘要:目的 建立鱼腥草挥发油的指纹图谱 , 为含鱼腥草中药制剂指纹图谱奠定基础。方法 采用水蒸气蒸馏法提取不
同产地鱼腥草的挥发油;用毛细管气相色谱技术测定指纹图谱(GC-FPS);选用聚类法分析结合含量比较判断其道地性结
果 该方法灵敏度高 ,稳定性 、重现性的 RSD <3%。结论 该指纹图谱方法简便 ,重现性好 , 可作为鱼腥草药材的质量控
制方法。
关键词:鱼腥草;　指纹图谱;　聚类分析;　毛细管气相色谱;　道地性
中图分类号:R282. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)02-0295-02
Study on GC-FPS ofVolatileO il ofHouttuynia cordatd Thunb. and itsGenuineness
WANG Yu-hong1, 2 , ZHANG S hui-han1 , CA IG uang-x ian1
(1. Hunan Institute of Trad itionalMateriaMedica , Ch ina;2. Hunan College of Traditiona l ChineseMedicine,
Changsha , Hunan 410007, Ch ina)
Abstract:Objective To develop the chrom atographic fingerprin t fo r the cha rac te ristic o f the vo latile com ponen ts o fHouttuynia
cordatd Thunb. . Methods Vo la tile components ofHouttuyn ia corda td Thunb. from d iffe rent reg ionsw ere ex tracted by steam dis-
tilla tion , and the chrom atographic fingerprin ts we re cha rac te rized by the capillary gas chrom atography. The fuzzy c luster and de-
term ination we re se lected to com pa re the genuineness. R esu lts Th is me thod gave high sensitivity, reproduc tion and RSD w as no
m ore than 3%. C onclusion An analysis of the com bination o f chrom atog raph ic finge rprint and fuzzy cluste r is convenient and ac-
curate. It is suitab le for the qua lity contro l o fHouttuyn ia cordatd Thunb. .
Key words:Houttuynia cordatd Thunb. ;　F inge rprint;　C ap illa ry gas chrom atography;　Fuzzy c luster;　Genuineness
　　鱼腥草为三白草科植物蕺菜 Hou ttuynia cordata Thunb. 的干
燥地上部分 , 具有清热解毒 、消肿排脓 、利尿通淋的功效 , 用于肺
痈吐脓 、痰热喘咳 、热痢热淋 、痈肿疮毒等症 , 因其良好的药理作
用 , 被广泛应用于临床。现代研究表明鱼腥草主要有效成分为其
挥发性物质 , 甲基正壬酮 (m ethy l2 n2nony l2ke tone) 、鱼腥草素
(decanoy l ace ta ldehyde) 、月桂烯(myrcene)等成分 [ 2] 。本文采用
气相色谱法建立鱼腥草药材的指纹图谱 ,结合甲基正壬酮的含量
对该指纹图谱的特征峰数据进行系统聚类分析和相似度评价 ,为
鱼腥草的质量控制提供科学依据。
1　仪器与试剂
　 SP - 6890气相色谱仪(山东鲁南), OV - 17毛细管柱(30 m ×
0. 32 mm ×0. 5μm ,中科院), CT - 1A氮 、氢 、空气发生器(武汉科
林分析技术研究所)。甲基正壬酮对照品(中国药品生物制品检
定所 , 编号:0834-9501),正十五烷(色谱纯), 正己烷(分析纯 )。
10批鱼腥草药材来源见表 1。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件与系统适用性实验 OV - 17毛细管柱 (30 m ×
0. 32 mm ×0. 5 μm), 汽化室温度 200℃, F ID检测器温度 210℃,
升温程序为:柱室初始温度 60℃保持 4 m in, 以 2℃ /m in升温至
100℃, 保持 2 m in,再以 3℃ /m in升温至 130℃, 保持 2 m in, 再以
1℃ /m in升温至 140℃,保持 2 m in, 再以 10℃ /m in升温至 230℃,
保持 1 m in。分流比 1∶50,柱头压 0. 05 M pa, 尾吹压 0. 04 Mpa。
2. 2　参照物溶液的制备 取正十五烷适量 , 精密称定 , 加用正己
烷制成每毫升含 5 mg的溶液 ,作为内标溶液。
2. 3　对照品溶液的制备 取甲基正壬酮对照品 26 m g精密称定 ,
置 10 m l量瓶中 ,加内标溶液溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,即得。
2. 4 　供试品溶液的制备 取本品 75 g,研细 , 参照挥发油测定法
(《中国药典》2005年版Ⅰ 部附录 XD甲法)蒸馏提取挥发油 , 自
测定器上端加水使充满刻度部分 , 再加正己烷 1 m l,连接回流冷
凝管 , 缓缓加热至沸 ,并保持微沸 4 h放置 30 m in, 取正己烷层置
2 m l容量瓶中 , 加内标溶液 50 μl, 加正已烷稀释至刻度 ,即得。
表 1　鱼腥草样品来源
样品 样品收集地　　　 产地
1 江西樟树 浙江
2 润泽堂 湖南
3 广州二天堂 贵州
4 贵州同济堂 湖北
5 湖南安化(道地产区) 湖南安化
6 江西仁德 湖北
7 武汉阳慷 湖北
8 湖南药王堂(道地产区) 湖南
9 湖南常德 湖南
10 成都荷花池 四川
2. 5 　样品的测定 分别精密吸取参照物溶液 、对照品溶液与供
试品溶液各 1 μl,注入气相色谱仪 , 测定 , 记录 60 m in, 即得。 以
正十五烷色谱峰的保留时间为 1计算相对保留时间 ,计算 , 即得。
2. 5. 1　空白实验 取内标液 1. 0 μl,进色谱仪。见图 1。
2. 5. 2　阳性对照实验 取甲基正壬酮对照液 1. 0 μl, 进色谱仪。
见图 2。取 1 μl供试液进气相色谱 。见图 3。
图 1　溶剂 +内标
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 2 时珍国医国药 2007年第 18卷第 2期
图 2　内标 +对照品
图 3　鱼腥草药材供试液
2. 6　方法学研究
2. 6. 1　标准曲线的绘制 分别吸取上述对照液 0. 1, 0. 5, 0. 75, 1,
1. 5 m l, 用正己烷定容至 5. 00 m l, 摇匀。分别进样 1 μl, 测定各
组分的保留时间和峰面积。以甲基正壬酮的质量为 Y , 甲基正壬
酮的峰面积与正十五烷内标物的峰面积之比为 X ,进行线性回归
分析 , 得回归方程为:Y =1. 157X - 0. 03(r=0. 999 2)。
2. 6. 2　精密度实验 取同一份鱼腥草的供试品溶液连续进样 5
次 , 比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积 , 结果表明 ,各
共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致 , RSD <3%,
符合指纹图谱的检测要求。
2. 6. 3　重复性实验 取同一批鱼腥草样品 5份 ,按供试品溶液制
备方法分别制备供试品溶液 ,比较各共有指纹峰的相对保留时间
和相对峰面积 , 结果表明 , 各共有指纹峰的相对保留时间和相对
峰面积基本一致 , RSD <3%, 符合指纹图谱的检测要求。
2. 6. 4　稳定性实验 取同一份鱼腥草的供试品溶液 , 分别在制
备后 1, 4, 8, 16, 24, 48 h进样 , 比较各共有指纹峰的相对保留时
间和相对峰面积 ,结果表明 , 各共有指纹峰的相对保留时间和相
对峰面积基本一致 , RSD <3%,样品在 48 h内稳定 , 符合指纹图
谱的检测要求。
2. 6. 5　 吸取内标溶液与对照品溶液 1 μl, 分别注入气相色谱
仪 , 计算校正因子。分别每个批号的样品进样 1. 0 μl。结果见
表 2。
表 2　10批鱼腥草样品的含量测定结果 μg g- 1
批号 甲基正壬酮 批号 甲基正壬酮
1 45. 7 6 43. 9
2 51. 7 7 68. 3
3 37. 9 8 84. 4
4 43. 1 9 39. 2
5 110. 9 10 66. 5
2. 7　指纹图谱的建立
2. 7. 1　共有指纹峰的标定 共有指纹峰的相对保留时间 采用相
对保留时间标定共有指纹峰:以图谱中标正十五烷为参照物
( s),将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保时间比较 ,
其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算 10批鱼腥草样品
的指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积 , 其中 12
个色谱峰为样品共有 , 见表 3 ～ 4。特标定它们为共有指纹峰。
结果见图 4。以图谱中正十五烷为参照峰(S),计算其它共有指
纹峰的相对保留时间:峰 1(0. 201 6 ～ 0. 246 4),峰 2 (0. 270 0 ～
0. 330 0), 峰 3 ( 0. 284 4 ～ 0. 347 6), 峰 4 (0. 342 0 ～ 0. 418 0),
峰 5 (0. 398 7 ～ 0. 487 3), 峰 6 (0. 508 5 ～ 0. 616 0), 峰 7(0. 603
～ 0. 737), 峰 8(0. 648 0 ～ 0. 792 0), 峰 9 (0. 664 2 ～ 0. 818 8),
峰 10(0. 783 ～ 0. 957), 峰 11 ( 0. 794 7 ～ 0. 971 3), 峰 12
(1. 000)。
表 3　 10批鱼腥草的相对保留时间
峰号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均
1 0. 232 0. 228 0. 214 0. 217 0. 230 0. 231 0. 235 0. 220 0. 213 0. 222 0. 224
2 0. 308 0. 305 0. 287 0. 293 0. 303 0. 307 0. 312 0. 297 0. 287 0. 297 0. 300
3 0. 324 0. 320 0. 304 0. 309 0. 323 0. 323 0. 327 0. 315 0. 303 0. 314 0. 316
4 0. 387 0. 383 0. 365 0. 371 0. 407 0. 386 0. 391 0. 374 0. 364 0. 376 0. 380
5 0. 452 0. 447 0. 430 0. 437 0. 449 0. 449 0. 456 0. 439 0. 429 0. 440 0. 443
6 0. 572 0. 569 0. 554 0. 561 0. 569 0. 570 0. 579 0. 563 0. 553 0. 563 0. 565
7 0. 675 0. 673 0. 659 0. 665 0. 675 0. 672 0. 682 0. 669 0. 657 0. 667 0. 670
8 0. 723 0. 721 0. 712 0. 717 0. 724 0. 721 0. 732 0. 718 0. 709 0. 718 0. 720
9 0. 740 0. 739 0. 732 0. 735 0. 740 0. 738 0. 749 0. 737 0. 730 0. 735 0. 738
10 0. 867 0. 869 0. 869 0. 869 0. 869 0. 866 0. 880 0. 871 0. 869 0. 867 0. 870
11 0. 881 0. 881 0. 881 0. 882 0. 883 0. 880 0. 894 0. 881 0. 881 0. 880 0. 883
s 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 015 1. 000 1. 000 1. 000 1. 001
表 4　10批鱼腥草样品共有指纹峰的相对峰面积
峰号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均
1 0. 886 0. 851 0. 975 1. 094 4. 277 0. 637 1. 001 3. 582 0. 969 0. 970 0. 886
2 0. 630 1. 471 1. 387 1. 548 3. 522 0. 730 0. 719 4. 980 1. 662 1. 667 0. 630
3 1. 856 3. 068 1. 847 1. 837 1. 971 1. 586 1. 892 5. 316 1. 688 1. 651 1. 856
s 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000
图 4　鱼腥草药材共有指纹峰
2. 7. 2　共有指纹峰的相对峰面积 以图谱中内标正十五烷为参
照物( s), 将各共有指纹峰峰面积与同一图谱中参照物的峰面积
比较 ,其比值为各共有指纹峰的相对峰面积。根据《中药注射剂
指纹图谱研究的技术要求》的规定 [ 1] ,单峰峰面积占总峰面积 >
10%时 ,标定其峰面积比值。结果见表 4。
2. 8　系统聚类分析 应用 SPSS软件对 10批鱼腥草样品的
HPLC -FP中各特征峰的相对峰面积进行分析 , 以欧氏平方距离
为测度的聚类图。结果见图 5。
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 2期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 2　
图 5　系统聚类分析图
通过系统聚类分析 ,鱼腥草样品 HPLC -FP的特征峰数据的
系统聚类结果 5, 8号样品为道地药材样品 , 质量均较好。 系统聚
类结果与表 1中不同产地及市售的鱼腥草样品中甲基正壬酮的
含量结果相吻合 , 以湖南道地产区的药材样品为好。
3　讨论
3. 1　 由于我国幅员辽阔 , 鱼腥草生长地域广泛 ,不同居群 、不同
生长季节及不同部位的有效成分含量有很大区别。因此 , 不同产
地 、不同市场收集的鱼腥草药材中甲基正壬成酮成分参差不齐。
为保证药材的质量 , 宜固定基源 , 选择道地药材。
3. 2　色谱柱的确定 分别用 SE - 30(30 m ×0. 32 mm ×0. 5
μm), SE - 54(30 m ×0. 32 mm ×0. 5 μm), OV - 17(30 m ×0. 32
mm ×0. 5μm)三种色谱柱对鱼腥草挥发油进行指纹图谱分析。
结果表明以 OV -17柱对鱼腥草挥发油成分分离最好。
3. 3　程序升温条件的确定 采用如下 3种程序升温条件对鱼腥
草挥发油进行指纹图谱分析:
条件 1:气化室温 T j =260℃,柱室温度 TO =120℃, 氢火焰温
度 TD =260℃;升温程序:120℃保持 2 m in, 以 4℃ /m in升到
160℃, 保持 2 m in, 再以 2℃ /m in升到 180℃, 保持 2 m in, 再以
2℃ /m in升到 200℃, 保持 2 m in, 以 3℃ /m in升到 230℃, 保持
2m in,最后以 3℃ /m in升到 260℃, 保持 5 m in;分流比 1∶50。
条件 2:气化室温 T j=260℃、柱室温度 TO =120℃,氢火焰温
度 TD =260℃;升温程序:120℃保持 2 m in, 以 2℃ /m in升到
160℃, 保持 2 m in, 再以 1℃ /m in升到 180℃, 保持 2 m in, 再以
1℃ /m in升到 200℃, 保持 2m in, 最后以 2℃ /m in升到 240℃, 保持
2 m in,分流比 1∶50。
条件 3:气化室温 T j=260℃, 柱室温度 TO =100℃,氢火焰温
度 TD =260℃;升温程序:100℃保持 2 m in, 以 2℃ /m in升到
240℃, 保持 9 m in, 再以 1℃ /m in升到 180℃, 保持 2 m in, 再以
1℃ /m in升到 200℃, 保持 2 m in, 最后以 2℃ /m in升到 250℃, 保
持 5m in;分流比 1∶50。
对 3种不同程序升温条件下的鱼腥草的指纹图谱进行比较 ,
结果表明:以条件 2为好 ,故确定条件 2为鱼腥草指纹图谱气相
色谱分析条件。
3. 4　指纹图谱分析时间的确定 按条件 2程序升温 , 在终温的
基础上再保持 60 m in。结果表明:在程序升温结束后 ,无成分残
留 ,故确定鱼腥草指纹图谱的分析时间为 90 m in。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会. 中国药典 , Ⅰ 部 [ S] . 北京:化学工业出版社 ,
2005:155.
[ 2 ] 　于健东 ,胡玉霞 ,田金改 ,等.鱼腥草中甲基正壬酮的含量测定 [ J] .
药物分析杂志, 1999, 19 (1):50.
收稿日期:2006-07-05;　修订日期:2006-10-14
基金项目:广西科技攻关资助项目(No. 0480005)
作者简介:黄秀香 (1969-), 女(壮族),广西都安人 ,现任河池学院讲师 ,
现为广西大学化学化工学院在读硕士研究生 ,主要从事天然有机化学研
究工作.
*通讯作者简介:林翠梧 (1958-), 女(汉族),广西北流人 , 现任河池学院
教授 ,主要从事天然有机化学研究工作.
分光光度法测定毛老虎茎中三萜酸的总含量
黄秀香 1, 2 , 袁　霞 1 ,林翠梧 1* , 陈丽芬 1
(1.广西大学化学化工学院 ,广西 南宁　530004;　2.河池学院化学与生命科学系 ,广西 宜州　546300)
摘要:目的 建立香草醛 -冰醋酸体系分光光度法测定毛老虎中总三萜酸的方法。方法 利用在高氯酸的条件下香草醛
-冰醋酸与三萜酸的反应测定总三萜酸。结果 总三萜酸在 2. 53 ～ 13. 14 μg /m l呈良好的线性关系 ,测定样品回收率为
99. 07%。结论 该法简便 、快速 、灵敏。
关键词:毛老虎;　分光光度法;　香草醛
中图分类号:R927. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)02-0297-02
Determ ination of Tota lContent of Triterpenoids in Stem s ofHyptis suaveolens (L. ) P iot
by Spec trophotom etry
HUANG X iu-x iang1, 2 , YUAN X ia1 , L IU C ui-wu1* , CHEN L i-fen1
(1. School ofChem istry and Chem icalEng ineering , GuangxiUniversity, Nanning 530004, China;2. Department
of Chem istry and Life Sciences, Hechi College, Y izhou 546300, China)
Abstract:Objective To deve lop the dete rm ina tion m e thod of tota l trite rpenoids in vanillin-g lac ia l ace tic acid sy stem by spectro-
pho tom etry.M ethods Vanillin was used as co lour deve lop ing reagen t in the presence o f pe rchloric acid. R esu lts The calibration
curve of to ta l triterpeno ids had good linea r re la tionsh ip in the range o f 2. 53 ～ 13. 14 μg /m .l The ave rage recove ry was 99. 07%.
Conc lu sion The me thod is simp le , easy and reproducible .
Key words:Hyptis suaveolens(L. )P io t;　Spec tropho tom etry;　Vanillin
　　毛老虎 Hyptis suaveolens (L. )P io t为唇形科山香属植物 , 别
名山薄荷 、假藿香 , 本属植物共约 400种 , 绝大多数均有药用价
值。 《全国中草药汇编》载:“辛 、苦 、平。 疏风利湿 , 行气散淤。
主治感冒头痛 ,胃肠炎 , 痢疾 , 腹胀;外用治跌打肿痛 , 创伤出血 ,
虫蛇咬伤 ,湿疹 , 皮炎 [ 1] 。”从毛老虎中提取三萜酸国内还未见报
道 , 印度的 M istra , T runaN等 [ 2]曾报道从毛老虎中提取得到三萜
酸 , 我们做预实验时 , 用熊果酸标准品作 TLC对照实验 , 以 1%香
草醛浓硫酸溶液显色 , 两者显示出 Rf值相同的樱红色斑点。 为
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