全 文 ：2以抖年 3月第 27 卷第 l期
M公 . 加以 , Vd .刀 , No . 1
成都中医药大学学报
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飞天娱蛤七对实验性肝纤维化大鼠胰岛 俘
细 胞 功 能 的 影 响
崔大江 邪敏 聂丹丽
(西安交通大学 第二医院 , 西安 71 0 X[ 又 )
摘 要 : 目的 探讨应用飞天埃蛤七杭肝纤维化时时大鼠胰岛 p细胞功能的影响 。 方法 以四氛化破
诱导大成肝纤维化模型 , 设立正常组 , 模型组和飞天埃蛤七组 。 正常组于实验开始时取胰腺 , 模型组和飞
天埃蛤七组则分别于造模后 3 周 , 6 周取映珠作胰岛细胞的分离与培养 , 然后浏定其培养上清液胰岛素含
童 。 结果 3 周模型组大鼠空腹血清胰岛素与正常组差异无显著意义 , 而 6 周模型组大鼠空腹血清胰岛素
为 ( 5 3 . 8 士 3 . 1) m U / l , 正常组为 (24 . 5 土 2 . 5) m U / l , 两组比较 q 二 12 . 87 , 尸 < 。 . 05 ; 3 周模型 组大鼠胰
岛细胞的基础胰岛素分泌与 正常组差异无显著意义 , 而 6 周模型组大鼠胰岛细胞的基础胰岛素分泌童为
(50
.
90 士 12
.
8 6 ) 尸U / inI , 正常组为 ( 3 4 . 5 7 士 5 . 16 ) 科U / d , 两组比较 q 二 1 1 . 05 , 尸 < 0 . 0 2 ; 3 、 6 周飞 天
娱蛤七组大鼠肤岛细胞的基础肤岛素分泌量分别为 ( 156 . 01 土 7 . 11) 四 /而 和 ( 141 . 43 土 3 9 . 0 1) 四 / d ,
均高于相应模型组 , F 值分别为 65 . 50 和 12 . 6 , 尸 < O , 01 。 结论 飞天娱蛤七可增加四氛化破所致肝纤
维化 3 、 6 周大鼠胰岛 p 细胞的基础胰岛素分泌量 。
关 键 词 : 肝纤维化 ; 大鼠 ; 胰岛 ; 胰岛素 ; 飞天埃蛤七
中图分类号 : 2R 85 . 5 ; 5R 75 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1以又 . 仅拓8 ( 2以抖 ) 01 一0 19 一02
研究证实四抓化碳 ( CC4I )造模 9 周的肝硬化大
鼠胰 岛 p 细胞 的 基 础胰 岛素分 泌 量低于 正 常
鼠[ ’ · 2〕。 另有研究表明飞天娱蛤七 (穗 ,九司 i a hc in e -
ia 。
.
L
.
)具有抗肝纤维化作用 .3[ 4 ] , 我们拟在进行飞
天娱蛤七抗肝纤维化相关研究的同时 , 探讨其对肝
纤维化大鼠胰岛俘细胞功能的影响 。
1 材料与方法
1
.
1 实验动物
iW
s
atr 大鼠 40 只 , 雌雄各半 ,体重 25 0 一 30 9 , 由
西安交通大学实验动物中心提供 。
1
.
2 分组及给药方法
大 鼠随机分 3 组 : ( l) 正常组 8 只 : 不加任何处
理因素 ,取 8只大 鼠的胰腺组织 。 ( 2 )模型组及飞天
娱蛤七组共 32 只 : 将 CC玩 及色拉油混合制成 礴叨岁
l 溶液 ,均皮下注射 , 首剂每 1的g 体重 0 , 5而 , 以后每
10 9体重 0 . 3d ,每周 2 次 ;造模开始 10 d 后 ,随机选
取 16 只确定 为飞天娱蛤七组 , 该组按每 10 9 体重
给予 120 扩 l 飞天娱蛤七 (由西安神龙中医医 院提
供 )浓缩液 1 . 5d , 每日灌胃 , 另外 16 只确定为模型
组 ,按每 10 9体重给予等渗盐水 1 . 5以 灌胃 , 分别
于 3 . 6 周末将两组大鼠于清晨空腹麻醉处死后取
血 ,肝脏及胰腺作指标检测 ,各组有 2 只采集不成功
的标本 , 未列人统计 。
1
.
3 肝组织 HE 染色
取大 鼠肝右 叶 , 切取肝组织 cI m x cI m X 3~
,
置于含 0 . 1% DE PC 的 4 % 多聚 甲醛及 0 , lmo U LP BS
固定液中固定 。 汉h 内石蜡包埋切片后 EH 染色 ,观
察各组大鼠肝组织病理变化 。
1
.
4 血清空腹胰岛素水平浏定
125 卜 胰岛素放免分析试剂盒由中国原子能科
学研究院提供 。
1
.
5 胰岛细胞分 离与培养
将 iW s atr 大鼠无菌取出胰腺 , 置 4 ℃ H田永s 液中
清洗 3 次 ,剪碎胰腺 ,放于含有 V 型胶原酶溶液 ( 5以
l) 的锥形瓶中 ,于 38 ℃的恒温水浴摇床中振荡 30 而 n
后 (转速 2X() r/ 而n) ,用 Haz 永s 液终止消化 ,取悬浮细
胞离心 ( s o r/ 而 n , 5而n) , 经用 H a n k s 液清洗离心
后 ,加人含体积分数为 15 % 小牛血清的 RPM I 一 164 0
培养液 , 制成细胞悬液 , 37 ℃ , 5 % C仇孵育箱内培养
24 h 后 , 去除成纤维细胞 , 收集胰岛细胞 , 制成新的
细胞悬液 ,调节细胞浓度至 l x ’ 1护/血 , 置 % 孔板培
养 , 每孔内加人细胞悬液 2的川。
1
.
6 基础胰岛素分泌量浏定
将分离的各组大鼠胰岛细胞悬液加人 % 孔板 ,
基金项目 : 侠西省 自然科学基金 (No : 2X( X) SM料 )
作者简介 :崔大江 , 男 , 1% 3 年 10 月生 ; 医学硕士 , 主治 医师 ;研究方向 : 中西 医结合肝病 。
DOI : 10. 13593 /j . cnki . 51 -1501 /r . 2004. 01. 008
成都中医药大学学报 2以抖 年第 2 4卷
每孔 2 0讨 , 3 周大鼠组为平行孔 3 孔 , 正常组 及 6
周大鼠为平行孔 4 孔 。 加人体积分数 巧% 小牛血
清的 RP M I 一 164 0 培养液 培养 , 转人 24 孔板 培养
24 h
,取上清液用放免法测定基础胰岛素分泌量 。
1
.
7 统计学分析
采用方差分析 。 整个统计资料采用 SAS 软件
于计算机中处理完成 。
2 结果
2
.
1 肝组织病理变化
正常对照组肝小叶结构完整 ,无变性 、 坏死 、 炎
性细胞浸润及纤维组织增生 。 模型组 3 周末时病变
以炎性损害为主 , 肝细胞广泛脂肪变性 , 炎细胞浸
润 ,并可见少量纤维组织 由中央静脉及汇管区向外
延伸 , 飞天娱蛤七组 3 周末时病变与模型组相 似 。
模型组 6 周末在原有病变基 础上可见纤维组织增
生明显 ,但未形成假小叶 , 飞天娱蛤七组可见少量纤
维组织增生 。
2
.
2 正常组与模型组空腹血清胰岛素含量的变化
3 周模型组血清胰岛素与正常组差 异无显著
性 ,而 6 周模型组血清胰岛素则高于正常组 ,见表 1。
表 l 各组大鼠空腹血清胰岛素含 t (云士 : )
组别 n 空腹血清胰岛素含量 ( m U’/ L )
正常组 8 24 . 5 土 2 . 5
3周模型组 6 50 . 6 土 17 . 5
6周模型组 6 53 . 8 士 3 . 1 .
二当 .些生鱼丝些丝 , q 二 12 . 87 , 尸 < 0 . 05
2
.
3 肤岛细胞的基拙胰岛素分泌量检测结果
6 周模型组大鼠胰岛细胞的基础胰岛素分泌量
高于正常组 ; 3 、 6周飞天娱蚁七组大鼠胰岛细 胞 的
基础胰岛素分泌量显著高于相应模型组 。 见表 2
表 2 各组大鼠胰岛细胞基础胰岛素分泌 t (牙土 : )
组别 n 基础胰岛素分泌量 (拌U / m l )
正常组 8 34 . 87 士 5 . 16
3 周模型组 6 39 . 斜 士 4 . 01
6 周模型组 6 50 . 卯 士 12 . 86 .
3 周飞天娱蛤七组 6 15 6 , 0 1 士 7 . 11△
6 周飞天娱蛤七组 6 141 . 43 土 39 . 01 .
. 与正常组比较 , q 二 n .仍 , 尸 < .0 01 ; △与模型组比校 ,
q 二 6
.田 , p < .0 皿 ; # 与模型组比较 , q 二 12 .肠 , p < .0 01
3 讨论
肝硬化时胰岛素的分泌主要经历 3 个阶段 : ( 1)
肝硬化早期胰岛 p 细胞分泌胰岛素和近期 胰岛素
合成无特殊缺陷 ,在大部分患者中甚至是增加的 s[] ,
故可维持大致正常的 糖耐量 。 ( 2 )随着肝硬化和胰
岛素抵抗的进一步发展 ,其胰岛 p细胞不能增加足
够的分泌来补偿胰岛素抵抗 ,胰岛素分泌相对缺乏 ,
糖耐量减退 。 ( 3) 长期的胰岛 p细胞功能代偿增加
而导致其最终功能衰竭 ,胰岛素分泌绝对缺乏 , 发展
为肝源性糖尿病 。
结果提示 CC甄选模后 3 周模型组大鼠胰岛俘细
胞的基础胰岛素分泌量与正常组差异无统计学意义
( p > 0
.
05 )
,
6 周模型组大鼠胰岛 日细胞的基础胰岛
素分泌量则高于正常组 ( 尸 > 0 . 0 5 ) 。 有研究证实
CC拼 所致肝硬化大鼠 (造模后 9 周大 鼠 )的基础胰
岛素分泌量低于正常鼠 .l[ 2 ] , 由此推测在 c c玩 选模
的早期 ( 3 周及 6 周 )胰岛 p细胞的分泌可能是增加
的 ,而造模 9周时肝硬化模型 已建立 ,此时胰岛细胞
的分泌则是减少的 。 本研究结果提示 : 3 周模型组
大鼠空腹血清胰岛素含量与正常组相近 , 而 6 周模
型组大鼠空腹血清胰岛素则高于正常组 。 . 正常情况
下 5 0% 一 8 0%胰岛素经肝脏清除 , 而肝硬化时 由于
肝细胞数量减少和 门静脉系统分流 , 肝脏摄取和灭
活胰岛素的作用将受损 。 早期胰岛素分泌增加和胰
岛素清除减少可能导致肝硬化时血清胰岛素水平增
高 4 一 6 倍 s[] 。 研究结果提示 : 6 周模型组大鼠胰岛
细胞的基础胰岛素分泌量及其空腹血清胰岛素均高
于正常组 ,与此结论相符 。 研究结果还提示 CC从造
模后 3 周及 6周飞天娱蛤七组大鼠胰岛乒细胞 的基
础胰岛素分泌量高于相应模型组 , 由此推测 飞天骤
蛤七是否可能直接对胰岛 俘细胞本身具有 某种作
用 ,从而使得飞天娱蛤七组大 鼠胰 岛 p细胞的基础
胰岛素分泌量高于模型组 。
飞天娱蛤七是五加科植物穗的根皮 , 中药大辞
典以穗白皮收载 , 味微甘 、 苦 、辛 , 归肝 、 脾 、 肾经 , 有
健脾除湿利水之功 。 本研究为该药在肝源性糖尿病
的防治开发应用提供参考依据 。
参考文献
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