全 文 ：KEY WORDS:　mouse;　guinea pigs;　ABR;　tone-pip;　threshold
竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧损伤后抗氧化功能的影响＊
文德鉴1■ , 张　松2 , 张翠兰2 , 董兴高1 , 朱云超1 , 肖本见1
(1.湖北民族学院医学院 , 2.附属医院 , 湖北恩施 445000)
摘要　目的:观察竹节人参主要成分竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧损伤后抗氧化功能的影响。方法:将小鼠用药物处理后 , 建
立小鼠低氧/复氧损伤模型 ,观察小鼠血液中 ROS 、SOD、MDA、CAT 的变化。结果:竹节人参 、竹节人参总皂苷均能降低小鼠 ROS
和 MDA值 ,增强 SOD和 CAT 活性 ,二者作用强度相似。结论:竹节人参和竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧脂质过氧化损伤均有
一定的抗氧化作用。
关键词:　竹节人参皂苷;　低氧/复氧;　活性氧;　超氧化物歧化酶
KEY WORDS:　Panax japonicus saponins;　hypoxia/ reoxygenation;　reactive oxygen species(ROS);　superoxide dismutase(SOD)
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1000-6834(2008)03-0318-02
　　竹节人参(Rhizoma Panacis japonici , RPJ)为五加科植物
竹节人参 Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根茎 , 为常用中
药 ,味甘 、微苦 ,性温 , 归肝 、脾 、肺经 , 具滋补强壮 , 散瘀止痛 ,
止血祛痰的功效。用于病后虚弱 ,劳嗽咯血 ,咳嗽痰多 ,跌扑
损伤 [ 1]。研究表明 RPJ 对小鼠低氧/复氧损伤具有明显的保
护作用[ 2] ,而关于其作用的物质基础未见相关报道。为了探
讨 RPJ 对低氧/复氧损伤保护作用的主要活性部位 , 本实验
以小鼠为对象 ,建立低氧/复氧损伤的模型 ,观察 RPJ 主要成
分竹节人参皂苷(Panax japonicus saponins , PJS)对小鼠低氧/
复氧损伤后抗氧化功能的影响 ,以便为 RPJ 的临床应用和进
一步研究开发提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　药材 、试剂和仪器
RPJ 由宣恩民丰药业有限公司提供;活性氧(ROS)测定
试剂盒 、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒 、丙二醛(MDA)
测定试剂盒 、酸性磷酸酶(ACP)测定试剂盒 、过氧化氢酶
(CAT)测定试剂盒均为南京建成生物研究所产品 , 氯胺酮
(Keta mine)为美国 Sigma 公司产品;BS224S 型电子分析天
平 , CQ-250 超声波清洗器 , RE-52 型旋转蒸发器 , DL-50 型超
级恒温器 , 756MC 型紫外可见光分光光度计 , GL-20G 高速
冷冻离心机。
1.2　动物和分组
昆明种小鼠 40 只 , 体重 18 ～ 22 g , 雌雄兼用 , 由同济医
科大学实验动物中心提供 ,随机分为 4 组(n=10):空白对照
组 、阳性对照组 、RPJ 组和 PJS 组。
1.3　RPJ水溶液的制备
将适量 RPJ 粉碎过40 目筛 ,加 50%乙醇浸泡过夜 , 超声
提取 2次 , 每次 45 min ,合并滤液 , 回收乙醇 , 滤过 , 加适量蒸
馏水 ,并调 pH 至近中性 , G4 垂熔玻璃漏斗滤过 , 使成 1 g.
ml-1水溶液。灭菌 , 冷藏备用。
1.4　PJS水溶液的制备
将适量 RPJ 粉碎过 40目筛 , 加甲醇浸泡过夜 , 超声提取
2次 , 每次 45 min ,合并滤液 , 将滤液蒸干 , 再溶于水中 , 用乙
醚提取 3 次 ,去除脂类物质 , 醚液弃去 , 水层再用水饱和的正
丁醇提取 4 次 ,合并正丁醇液 , 用水洗 3 次 , 最后将正丁醇液
减压浓缩至干 ,即得 PJS。取适量 PJS 加水溶解 ,调 pH 至近
中性 , G4 垂熔玻璃漏斗滤过 , 使成 200 mg.ml-1水溶液。 灭
菌 ,冷藏备用。
1.5　实验方法
RPJ 组 、PJS 组分别用 RPJ 溶液 、PJS 溶液 2 ml行腹腔注
射 ,阳性对照组用 Keta mine按 0.08 g/ kg 行腹腔注射 ,空白
对照组用生理盐水 2 ml行腹腔注射。 30 min 后将小鼠放入
钠石灰瓶(150 ml广口瓶 , 10 g 钠石灰)中 , 每瓶放 1 只 ,塞紧
瓶塞 , 8 min 后取出 ,自由呼吸 8 min 后[ 3] ,将小鼠断头取血 ,
放入带盖的肝素化试管中 , 立即盖紧 , 按试剂盒说明书测
ROS 、CAT 、SOD和 MDA 各项指标。
1.6　统计分析
实验数据以均数 ±标准差( x ±s)表示 , 配对 t 检验 , 由
spss11.5 系统完成。
2　结果
2.1　PJS和 Keta mine对 ROS和 CAT的影响
结果表明 , RPJ、PJS 和 Keta mine 均能降低 ROS , 且 Ke-
tamine的作用显著强于 RPJ 和 PJS , RPJ 与 PJS 比较差异无
统计学意义(P >0.05);RPJ 和 PJS 能增加 CAT 活力 , RPJ
与 PJS 比较差异无统计学意义 , Keta-mine对 CAT 活力影响
与生理盐水比较差异无统计学意义(表 1)。
318 Chin J Appl Physiol 2008;24(3)
DOI :10.13459/j.cnki.cjap.2008.03.006
Tab.1　Effects of PJS on ROS and CAT in mice(U/ ml , x ±
s , n=10)
Group　　 ROS　　 CAT　　
Normal saline 546.00±13.08 69.14±1.77
Keta mine 100.28±6.70＊＊ 69.53±1.40
RPJ 208.34±3.73＊＊ 75.68±1.56＊＊
PJS 210.85±4.58＊＊ 74.87±1.19＊＊
　　＊＊P<0.01 vs normal saline g roup
2.2　PJS和 Keta mine对 SOD、MDA的影响
RPJ、PJS 能增加 SOD活性 , 二者之间作用差异无统计学
意义 , Ketamine能降低 SOD活性;RPJ 、PJS 与 Ketamine均能
减少 MDA ,且两两之间作用差异无统计学意义(表 2)。
Tab.2　Effects of P JS on SOD and MDA in mice( x ±s , n =
10)
Group　　 SOD(Nu/ml)　　　 MDA(nmol/ml)　
Normal saline 144.65±2.93 98.39±14.93
Keta mine 76.07±24.08＊＊ 44.13±5.36＊＊
RPJ 363.79±3.27＊＊ 42.90±6.58＊＊
PJS 361.93±3.92＊＊ 46.05±6.10＊＊
　　＊＊P <0.01 vs normal saline group
3　讨论
小鼠经低氧/复氧应激刺激后有大量氧自由基产生 , 氧
自由基含有不配对电子 , 性质极不稳定 , 能攻击生物膜中的
多不饱和脂肪酸引发脂质过氧反应生成 MDA , 氧自由基及
M DA 通过多种途径造成细胞膜及亚细胞器膜结构破坏 , 导
致损伤[ 4] 。 SOD 是催化 O2 歧化反应的酶类 , 对机体的氧化
与抗氧化平衡起着至关重要的作用 , 能清除超氧阴离子自由
基(O2-),具有保护细胞 、对抗 O2-的侵害的作用。 CAT 是分
解H2O2 的主要酶 , 可使有毒的H2O 2变为无毒的H2O 和O 2。
本实验结果表明 , 竹节人参 、竹节人参皂苷能增加 SOD 和
CAT 活性 ,表现出对小鼠低氧/复氧脂质过氧化损伤后具有
一定的抗氧化作用 , 二者作用无统计学差异 , 其均值也很接
近 ,表明竹节人参皂苷是竹节人参对小鼠低氧/复氧损伤后
具有一定的抗氧化作用的主要活性部位。氯胺酮是一种兴
奋性氨基酸的受体拮抗剂 ,大量实验证实氯胺酮有一定的神
经保护作用。本实验发现 , 氯胺酮能降低 ROS 及 MAD 活
力 ,且降低 ROS 的作用强于竹节人参总皂苷组 ,表明氯胺酮
在小鼠低氧/复氧脂质过氧化损伤的保护作用方面与竹节人
参及竹节人参皂苷存在一致性。 氯胺酮能降低 SOD 活力 ,
其机制可能与依赖性地抑制中性粒细胞的呼吸爆发强度(中
性粒细胞呼吸爆发时产生氧自由基)从而可减少氧自由基的
产生[ 5] 。有关竹节人参及竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧损
伤具有保护作用的机制还有待于进一步开发研究。
4　参考文献
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化学工业出版社 , 2005.93-93.
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复氧损伤的保护作用[ J] .中国公共卫生 , 2006 , 22
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[ 3] 　汪　谦.现代医学实验方法[ M] .北京:人民卫生出
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[ 5] 　罗富荣 , 陈惠孙 , 刘怀琼 , 等.氯胺酮和丙泊酚对中
性粒细胞呼吸爆发功能的影响[ J] .临床麻醉学杂志 ,
2002 , 18(7):367-368
　＊收稿日期:2007-07-23;修回日期:2008-04-14
作者简介:文德鉴(1973-), 男 , 湖北恩施人 , 硕士 , 讲师 , 从事
中草药药理研究。
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键词附在中文关键词下。
本刊编辑部
319中国应用生理学杂志 , 2008;24(3)