全 文 ：收稿日期:2013-12-04 接受日期:2014-04-23
基金项目:国家自然科学基金项目(31370370);教育部高等学校
博士学科点专项科研基金项目(20100162110057);湖
南科学技术厅科技计划项目(2013SK5077);湖南省卫
生厅中医药科研计划项目(2010004，201153)
* 通讯作者 Tel:86-731-82650395;E-mail:tgs395@ aliyun． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2014，26:947-951，956
文章编号:1001-6880(2014)6-0947-06
兖州卷柏的肽类化学成分及对低氧 /复氧
诱导的 PC-12 细胞损伤的保护作用
龙红萍1，李福双1，杨中保1，徐康平1，李 静1，赵兰芳1，
喻 凯1，谭蕾红1，彭 军1，谭桂山1，2*
1中南大学药学院，长沙 410013;2 中南大学湘雅医院，长沙 410008
摘 要:采用聚酰胺、硅胶柱层析、Sephadex LH-20 和制备液相等分离方法对卷柏属植物兖州卷柏的化学成分进
行分离纯化，根据理化性质和现代波谱技术鉴定了 11 个化合物:aurantiamide(1)、aurantiamide acetate(2)、N-
benzoyl-L-phenylalaninol(3)、neoechinulin A(4)、5，7-二羟基色原酮(5)、3-(3-羟基-苯基)-丙酸(6)、3-(3-羟基-苯
基)-丙酸甲酯(7)、肉桂酸(8)、(1H-indol-3-yl)oxoacetamide(9)、3-甲醛-1H-吲哚(10)、3-甲酸-1H-吲哚(11)，以
上 11 个化合物首次从该植物中分离得到，且为首次从卷柏属植物中得到。采用 Hoechst Staining 法评价化合物
1 ～ 4 四个肽在低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损伤中的保护作用，结果表明 4 个肽类化合物在低氧复氧诱导的
PC-12 中表现出较强的抗氧化作用，并具有剂量依赖性，对低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损伤呈现出一定的保护
作用。
关键词:兖州卷柏;化学成分;二肽;低氧 /复氧;PC-12 细胞
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A
Peptide Chemical Constituents from Selaginella involven Spring and Their
Protective Effects on Anoxic /Ｒeoxygenation-Induced PC-12 Cell Damage
LONG Hong-ping1，LI Fu-shuang1，YANG Zhong-bao1，XU Kang-ping1，LI Jing1，
ZHAO Lan-fang1，YU Kai1，TAN Lei-hong1，PENG Jun1，TAN Gui-shan1，2*
1School of Pharmaceutical Sciences，Central South University，Changsha 410013，China;
2Xiangya Hospital of Central South University，Changsha 410008，China
Abstract:Eleven compounds were isolated and purified from Selaginella involven Spring by polyamide，macroporous resin
and Sephadex LH-20 column chromatography，and their structures were elucidated as aurantiamide (1)，aurantiamide
acetate (2) ，N-benzoyl-L-phenylalaninol (3) ，neoechinulin A (4) ，5 7-dihydroxy Chromone (5) ，3-(3-hydroxy-phen-
yl)propionic acid (6) ，3-(3-hydroxy-phenyl)methyl propionate (7) ，cinnamic acid (8) ，(1H-indol-3-yl)oxoacetamide
(9) ，1H-Indole-3-carboxaldehyde (10) ，1H-indole-3-carboxylicacid (11)by chemical and modern spectroscopic meth-
ods． The eleven compounds were isolated from genus Selaginella for the first time． The protective effects of compounds 1-
4 on anoxic / reoxygenation-induced PC-12 cell damage were evaluated by Hoechst Staining method． The four compounds
showed strong antioxidant effect on the PC-12 cell damage induced by anoxic / reoxygenation，and had a dose dependent
effect． Compounds 1-4 showed moderate protective effects on the PC-12 cell damage induced by anoxic / reoxygenation．
Key words:Selaginella involven Spring;chemical constituents;dipeptide;anoxic / reoxygenation PC-12 cell
兖州卷柏(Selaginella involven Spring)为蕨类植
物门卷柏科植物兖州卷柏的全草，又名金不换、金扁
桃、金扁柏等。近年来卷柏属植物因其独特的基因
学特征引起国内外学者的广泛关注，2011 年美国
Purdue大学著名的植物学家 Bank JA教授对卷柏属
植物的基因测序研究结果提示卷柏可能会产生一些
结构独特而新颖的次生代谢产物［1］。研究表明卷
柏属植物含有黄酮类、炔酚类、蒽醌、生物碱类等多
种化学成分，药理学研究结果表明该属植物具有抗
肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老等药理活性［2］。
兖州卷柏具有抗病毒作用在民间使用，目前对于兖
州卷柏的化学成分研究报导较少，为了进一步探讨
兖州卷柏的活性成分及药效学物质基础，本实验对
其 75%乙醇提取物进行化学成分研究，分离得到 11
个化合物，11 个化合物都为首次从卷柏属植物中得
到，其中二肽类结构类型为首次从卷柏属植物中分
离得到。进一步采用 Hoechst Staining 法评价主要
成分在低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损伤中的保护
作用，结果显示化合物 1 ～ 4 四个肽对低氧 /复氧诱
导的 PC-12 细胞损伤呈现出一定的保护作用。
1 仪器与试药
Buchi-540 熔点测定仪(瑞士 Buchi 公司);UV
Probe-2540 紫外可见分光光度计(日本 SHIMADZU
公司);Nicolet AVATAＲ360 FT-IＲ 红外光谱仪，KBr
压片(美国 Nicolet公司);Varian-INOVA-400FT型核
磁共振仪(1H NMＲ 400 MHz，13 C NMＲ 100 MHz，
TMS为内标，美国 Varian公司);Finnigan LCQ-Adva-
tange质谱仪(美国 Thermo 公司);Agilent1100 制备
色谱仪(美国安捷伦公司)。
聚酰胺购于国药集团化学试剂有限公司，薄层
色谱用硅胶(GF254)及柱层析硅胶为青岛海洋化工
厂生产，Sephadex LH-20 购自 pharmacia公司。所用
试剂均为分析纯。
实验药材采自于广西壮族自治区兴安县，由厦
门大学生命科学院李振基教授鉴定为卷柏科植物兖
州卷柏的全草，样品保存于中南大学药学院药物化
学教研室。
大鼠 PC-12(高分化)细胞系购自上海中科院细
胞库。
2 提取与分离
兖州卷柏全草(5 kg)粉碎后经 75%乙醇回流
提取提取 2 次(40 L /1h，40 L /1h)，真空干燥后得兖
州卷柏提取物(400 g)。提取物拌样上大孔树脂
HP-20，分别用水、40%乙醇、70%乙醇和 95%乙醇
梯度洗脱，得四个部位。40%部位上聚酰胺(60 ～
80 目)，用水、40%乙醇、70%乙醇和 95%乙醇梯度
洗脱得 80 个流份，Fr． 15 ～ 32 经 Sephadex LH-20、
HW-40 得化合物 1(20 mg)、2(30 mg)、3(100 mg)、
4(100 mg);Fr． 33 ～ 51 经 Sephadex LH-20 反复纯化
和制备液相得化合物 5(10 mg)、6(20 mg)、7(10
mg)、8(10 mg);Fr． 51 ～ 64 经 Sephadex LH-20 反复
纯化、氯仿重结晶得化合物 9(10 mg)、10(10 mg)、
11(10 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 白色针晶，mp. 176. 7 ～ 178. 2 ℃。
(+)ESI-MS:403［M + H］+，结合 NMＲ 信息，确定
分子式为 C25 H26 N2O3;IＲ νKBr max(cm
-1):3312
(NH) ，1660 和 1632(CONH) ，1592，1580，1524，
1488，1262，738(单取代苯);1H NMＲ (400 MHz，
DMSO-d6)δ:7. 26 (7H，d，J = 8. 0 Hz，H-2，3，4，5，
6，2，6)，4. 68(1H，m，H-8) ，7. 90(1H，d，J = 8. 4
Hz，10-NH) ，7. 16(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-3，5) ，7. 20
(H，t，J = 8. 0 Hz，H-4) ，3. 90(1H，m，H-8) ，3. 87
(2H，m，H-9) ，7. 78(2H，d，J = 8. 0 Hz，H-2″，6″) ，
7. 44(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-3″，5″) ，7. 50(H，t，J = 8. 0
Hz，H-4″) ，8. 51(1H，d，J = 8. 0 Hz，8-NH) ;13 C
NMＲ (100 MHz，DMSO-d6)δ:138. 7(C-1)，128. 4
(C-2) ，129. 5(C-3) ，126. 5(C-4) ，129. 5(C-5) ，
128. 4(C-6) ，37. 6(C-7) ，55. 1(C-8) ，171. 2(C-9) ，
139. 3(C-1) ，128. 4(C-2) ，129. 5(C-3) ，126. 2(C-
4) ，129. 5(C-5) ，128. 4(C-6) ，36. 7(C-7) ，52. 8
(C-8) ，62. 5(C-9) ，134. 4(C-1″) ，127. 8(C-2″) ，
127. 6(C-3″) ，131. 4 (C-4″) ，127. 6 (C-5″) ，127. 8
(C-6″) ，166. 4 (C-7″)。以上数据与文献报道［3］的
数据基本一致，故鉴定化合物 1 为 aurantiamide。
化合物 2 白色针晶(氯仿)，mp． 187. 5 ～ 185. 9
℃。(+)EI-MS:444［M］+，结合 NMＲ信息，确定分
子式为 C27 H28 N2O4;IＲ νKBr max (cm
-1):3312
(NH) ，1720 (OCOCH3)1660 和 1630 (CONH)，
1598，1580，1530，1487，1260，739(单取代苯);1H
NMＲ (400 MHz，DMSO-d6)δ:7. 24 (7H，d，J = 8. 0
Hz，H-2，3，4，5，6，2，6)，4. 68 (1H，m，H-8) ，8. 17
(1H，d，J = 8. 4 Hz，10-NH) ，7. 16 (2H，t，J = 8. 0
Hz，H-3，5) ，7. 20 (H，t，J = 8. 0 Hz，H-4) ，4. 18
(1H，m，H-8) ，3. 87，4. 01 (each 1H，dd，J = 5. 2 Hz，
9. 6 Hz，H-9) ，7. 79(2H，d，J = 8. 0 Hz，H-2″，6″) ，
7. 44(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-3″，5″) ，7. 51(H，t，J = 8. 0
Hz，H-4″) ，8. 54 (1H，d，J = 8. 0 Hz，8-NH) ，1. 98
(3H，s，-COCH3);
13C NMＲ(100 MHz，DMSO-d6)δ:
138. 3(C-1)，128. 5(C-2) ，129. 4(C-3) ，127. 7(C-
4) ，129. 4(C-5) ，128. 4(C-6) ，37. 5(C-7) ，55. 1
(C-8) ，170. 6 (C-9) ，138. 1 (C-1) ，128. 3 (C-2) ，
129. 4 (C-3) ，126. 5 (C-4) ，129. 4 (C-5) ，128. 3
849 天然产物研究与开发 Vol. 26
(C-6)，36. 9 (C-7) ，49. 4 (C-8) ，64. 9 (C-9) ，
171. 5(C-10) ，20. 9(C-10，CH3)，134. 3(C-1″) ，
128. 4(C-2″) ，126. 5 (C-3″) ，131. 6 (C-4″) ，126. 5
(C-5″) ，128. 4 (C-6″) ，166. 4 (C-7″)。以上数据与
文献报道［4］的数据基本一致，故鉴定化合物 2 为 au-
rantiamide acetate。
化合物 3 白色针晶，(+)EI-MS:255［M］+，
结合 NMＲ信息，确定分子式为 C16H17NO2，IＲ νKBr
max(cm-1):3315 (NH)1660 和 1630(CONH) ，
1598，1580，1530，1487，1260，739(单取代苯);1H
NMＲ (400 MHz，DMSO-d6)δ:8. 21(1H，d，J = 8. 4
Hz，8-NH)，7. 78(2H，d，J = 8. 0 Hz，H-2，6) ，7. 44
(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-3，5) ，7. 49 (H，t，J = 8. 0 Hz，
H-4) ，7. 25(4H，m，H-2，3，5，6) ，7. 16(H，m，J =
8. 0 Hz，H-4) ，2. 79，2. 95(each 1H，dd，J = 14. 0 Hz，
5. 2 Hz，H-7) ，4. 16(1H，m，H-8) ，3. 42，3. 48(each
1H，dd，J = 14. 0 Hz，5. 2 Hz，H-9) ;13 C NMＲ(100
MHz，DMSO-d6) δ:135. 0 (C-1)，128. 4 (C-2) ，
127. 5(C-3) ，131. 2(C-4) ，127. 5(C-5) ，128. 4(C-
6) ，166. 2(C-7) ，55. 1(C-8) ，170. 6(C-9) ，139. 7
(C-1) ，128. 4 (C-2) ，129. 3(C-3) ，126. 1(C-4) ，
129. 3(C-5) ，128. 4(C-6) ，36. 7(C-7) ，53. 6(C-
8) ，63. 1(C-9)。以上数据与文献报道［5］的数据基
本一致，故鉴定化合物 3 为 N-benzoyl-L-phenylalani-
nol。
化合物 4 白色针晶，mp． 270. 5 ～ 272. 9 ℃。
(+)EI-MS:323［M］+，结合 NMＲ信息，确定分子式
为 C19 H21 N3O2;
1H NMＲ(400 MHz，DMSO-d6) δ:
11. 05(1H，s，1-NH)，8. 68(1H，s，10-NH) ，8. 33
(1H，s，13-NH) ，7. 42 (1H，d，J = 8. 0 Hz，H-4) ，7. 19
(1H，t，J = 6. 8 Hz，7. 2 Hz，H-5) ，7. 18(1H，d，J =
8. 0 Hz，H-7) ，7. 09(1H，t，J = 6. 8 Hz，7. 2 Hz，H-6) ，
6. 89(1H，s，H-8) ，6. 07(1H，q，J = 10. 4 Hz，6. 8 Hz，
10. 4 Hz，H-16) ，5. 06，5. 02 (each 1H，d，J = 12. 6
Hz，H-17) ，1. 48(6H，s，H-18，19，-CH3)，1. 37 (3H，
d，J = 7. 2Hz，H-20，-CH3);
13 C NMＲ(100 MHz，DM-
SO-d6)δ:144. 2(C-2)，103. 7(C-3) ，126. 3(C-3a) ，
119. 2(C-4) ，119. 7(C-5) ，121. 0(C-6) ，110. 4(C-
7) ，135. 4(C-7a) ，111. 9(C-8) ，125. 2(C-9) ，160. 2
(C-11) ，50. 8(C-12) ，166. 7(C-14) ，39. 2(C-15) ，
145. 4(C-16) ，117. 9(C-17) ，27. 8(C-18) ，27. 8(C-
19) ，19. 9 (C-20)。以上数据与文献报道［6］的数据
基本一致，故鉴定化合物 4 为 neoechinulin A。
化合物 5 白色粉末，ESI-MS m /z:179［M +
H］+，C9H6O4。
1H NMＲ (400 MHz，DMSO-d6) δ:
8. 20(1H，d，J = 6. 0Hz，H-2)，6. 29(1H，d，J = 6. 0
Hz，H-3) ，6. 21(1H，d，J = 1. 6 Hz，H-6) ，6. 37(1H，
d，J = 1. 6 Hz，H-8)，12. 70 (1H，s，5-OH) ，10. 95
(1H，s，7-OH) ;13 C NMＲ (100 MHz，DMSO-d6)δ:
157. 7(C-2)，110. 8(C-3) ，181. 6(C-4) ，164. 7(C-
5) ，99. 3(C-6) ，161. 9(C-7) ，94. 2(C-8) ，158. 1(C-
9) ，105. 2 (C-10)。以上数据与文献报道［7］的数据
基本一致，故鉴定化合物 5 为 5，7-二羟基色原酮。
化合物 6 白色针晶，mp． 126. 7 ～ 128. 2 ℃。
(+)ESI-MS:151［M + H］+，C9H10O2。
1H NMＲ (400
MHz，DMSO-d6)δ:2. 49(2H，t，J = 8. 0 Hz，7. 6 Hz，
H-2)，2. 73(2H，t，J = 8. 0 Hz，7. 6 Hz，H-3) ，6. 61
(3H，m，H-2，4，6) ，7. 05(1H，t，J = 7. 6 Hz，H-
5) ，12. 09 (1H，s，1-COOH) ，9. 25 (1H，s，3-
OH) ;13 C NMＲ (100MHZ，DMSO-d6)δ:171. 4 (C-
1)，35. 5 (C-2) ，30. 6(C-3) ，142. 6(C-1) ，115. 4(C-
2) ，157. 6 (C-3) ，113. 2 (C-4) ，129. 6 (C-5) ，
119. 1 (C-6)。以上数据与文献报道［8］的数据基本
一致，故鉴定化合物 6 为 3-(3-羟基苯基)-丙酸。
化合物 7 白色粉末，mp． 112. 7 ～ 114. 2 ℃。
(+)ESI-MS:165［M + H］+，C10H12O2。
1H NMＲ(400
MHz，DMSO-d6)δ:2. 58 (2H，t，J = 8. 0 Hz，7. 6 Hz，
H-2)，2. 76 (2H，t，J = 8. 0 Hz，7. 6 Hz，H-3) ，6. 61
(3H，m，H-2，4，6) ，7. 05(H，t，J = 7. 6 Hz，H-5) ，
9. 30 (1H，s，3-OH) ，3. 58(3H，s，1-OCH3);
13 C
NMＲ (100 MHz，DMSO-d6)，δ:173. 0 (C-1) ，35. 1
(C-2) ，30. 5(C-3) ，142. 2(C-1) ，115. 4(C-2) ，
157. 7(C-3) ，113. 4 (C-4) ，129. 6 (C-5) ，119. 1
(C-6) ，51. 6(-OCH3)。以上数据与文献报道
［8］的
数据基本一致，故鉴定化合物 7 为 3-(3-羟基苯基)-
丙酸甲酯。
化合物 8 白色针晶，mp． 132. 7 ～ 133. 2 ℃。
(+)ESI-MS:149［M + H］+，C9H8O2。
1H NMＲ(400
MHz，DMSO-d6)δ:7. 68(2H，m，H-2，6)，7. 42(3H，
m，H-3，4，5) ，7. 60 (1H，d，J = 16. 0 Hz，H-7) ，6. 54
(1H，d，J = 16. 0 Hz，H-8) ，12. 46 (1H，s，-COOH) ;
13C NMＲ (100 MHz，DMSO-d6) δ:130. 5 (C-1)，
128. 5(C-2) ，129. 2(C-3) ，119. 5(C-4) ，129. 2(C-
5) ，128. 5(C-6) ，134. 5(C-7) ，144. 2(C-8) ，167. 8
(C-9)。以上数据与文献报道［9］的数据基本一致，
故鉴定化合物 8 为肉桂酸。
949Vol. 26 龙红萍等:兖州卷柏的肽类化学成分及对低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损伤的保护作用
化合物 9 白色粉末，(+)EI-MS:188［M］+，
结合 NMＲ信息，确定分子式为 C10H8N2O2;
1H NMＲ
(400 MHz，DMSO-d6)δ:12. 17(1H，s，1-NH)，8. 69
(1H，s，H-2) ，8. 22(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-4) ，7. 26
(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-5，6) ，7. 52(1H，d，J = 8. 0 Hz，
H-7) ，8. 05，7. 69(each 1H，s，-NH2);
13 C NMＲ(100
MHz，DMSO-d6)δ:138. 6(C-2)，112. 5(C-3) ，126. 6
(C-3a) ，121. 7(C-4) ，122. 9(C-5) ，123. 8(C-6) ，
112. 9(C-7) ，136. 8(C-7a) ，183. 4(C-8) ，166. 5(C-
9)。以上数据与文献报道［10］的数据基本一致，故鉴
定化合物 9 为(1H-indol-3-yl)oxoacetamide。
化合物 10 白色粉末，(+)EI-MS:145［M］+，
结合 NMＲ 信息，确定分子式为 C9H7NO;
1H NMＲ
(400 MHz，DMSO-d6)δ:12. 19(1H，s，1-NH)，8. 30
(1H，s，H-2) ，8. 10(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-4) ，7. 27
(1H，t，J = 8. 0 Hz，H-5) ，7. 23(1H，t，J = 8. 0 Hz，H-
6) ，7. 51(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-7) ，9. 94(1H，s，-
CHO) ;13 C NMＲ(100 MHz，DMSO-d6)δ:138. 8(C-
2)，118. 4(C-3) ，124. 4(C-3a) ，121. 1(C-4) ，122. 4
(C-5) ，123. 7 (C-6) ，112. 7(C-7) ，137. 3(C-7a) ，
185. 3(-CHO)。以上数据与文献报道［11］的数据基
本一致，故鉴定化合物 10 为 3-甲醛-1H-吲哚。
化合物 11 白色粉末，(+)EI-MS:161［M］+，
结合 NMＲ 信息，确定分子式为 C9H7NO2;
1H NMＲ
(400 MHz，DMSO-d6)δ:11. 78 (1H，s，1-NH)，8. 01
(1H，s，H-2) ，7. 97(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-4) ，7. 16
(2H，t，J = 8. 0 Hz，H-5，6) ，7. 51(1H，d，J = 8. 0 Hz，
H-7) ，12. 25(1H，s，-COOH) ;13 C NMＲ (100 MHz，
DMSO-d6)δ:136. 9(C-2)，112. 6(C-3) ，126. 5(C-
3a) ，121. 0(C-4) ，121. 3(C-5) ，122. 5(C-6) ，112. 6
(C-7) ，132. 6(C-7a) ，165. 3(-COOH)。以上数据与
文献报道［12］的数据基本一致，故鉴定化合物 11 为
3-甲酸-1H-吲哚。
4 对低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损
伤的保护作用
PC-12 细胞用含有 10% FBS(Highclone)的 1640
完全培养基进行培养(37 ℃，5% CO2)。然后用不
含血清的 1640 培养基同步化 12 h，加药处理并转入
1%氧分压低氧 24 h，恢复常氧和完全培养基，复氧
24 h。Hoechst Staining 染色法评价细胞凋亡情况，
具体操作如下:吸弃细胞培养液，PBS 洗涤细胞 2
遍，用 Hoechst染色液(33258)于 37 ℃浸染细胞 25
min，去掉染色液，PBS洗涤细胞 2 遍，用荧光显微镜
观察细胞凋亡［13-15］，结果见图 1。
100μm（200×）
Control H/R +10-8M +10-7M +10-6M +10-5M
A
B
C
D
图 1 PC-12 细胞凋亡阳性细胞表达分布
Fig． 1 PC-12 cell apoptosis positive cells express distribution
注:PC-12 细胞在 24 h低氧后，去除低氧培养基，恢复含有不同浓度肽的完全培养基培养 24 h。然后进行 Hoechrst 染色评价凋亡水平。图
A、B、C、D分别为化合物 1 ～ 4。H/Ｒ:低氧复氧;+:H/Ｒ合并使用不同药物。
Note:Within hypoxia for 24h，hypoxia culture was removed，and PC-12 cells were restored complete medium with different concentrations of peptide for
24h． Then apoptosis levels were evaluated by Hoechrst staining． Fig A，B，C，D represented compounds 1 to 4，respectively． H /Ｒ:anoxic / reoxygen-
ation;+:H/Ｒ combined with different drugs．
059 天然产物研究与开发 Vol. 26
Co
ntr
ol H/
R
+1
0-
8 M
+1
0-
7 M
+1
0-
6 M
+1
0-
5 M
30
20
10
0
Ap
op
to
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(p
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ce
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ag
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30
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10
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Co
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+1
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8 M
+1
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7 M
+1
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6 M
+1
0-
5 M
A B
C D
图 2 化合物 1 ～ 4 对抗低氧 /复氧诱导 PC-12 细胞的凋亡作用
Fig． 2 Effects of compounds 1-4 against anoxic / reoxygenation-induced PC-12 cells apoptosis
注:图 A、B、C、D分别为图 1 中化合物 1 ～ 4 所对应的处理组的凋亡率。* :与对照组相比，P ＜ 0． 05;#与 H/Ｒ组相比，P ＜ 0． 05;H/Ｒ:低氧复
氧;+:H/Ｒ合并使用不同药物。
Note:A，B，C，D showed the apoptosis rate of compounds 1 to 4 treatment group，respectively;* :Compared with the control group，P ＜ 0． 05;#:Com-
pared with the H /Ｒ group，P ＜ 0． 05;H/Ｒ:anoxic / reoxygenation;+:H/Ｒ combined with different drugs．
结果显示，低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞严重损
伤，染色体发生了浓缩和断裂，细胞膜结构发生起泡
现象，形成凋亡小体，hoechrst 染色时出现深染而发
亮。兖州卷柏中分离的 4 个肽类化合物在低氧复氧
诱导的 PC-12 中表现出较强的抗氧化作用(图 1)，
10-5M、10-6M和 10-7M 药物浓度显著减少氧化应激
带来的细胞损伤，然而，10-8 M 的浓度，并未减轻活
性氧引起的细胞凋亡，可见，在 10-5 ～ 10-8M 该肽类
化合物具有剂量依赖性的抗氧化作用(图 2)。
5 讨论
PC-12 细胞在缺氧复氧过程中会产生的大量活
性氧(ＲOS)并引起的氧化应激，诱导细胞凋亡的发
生。兖州卷柏中 4 个肽类化合物本身含有很多易氧
化的基团，容易与细胞内产生的活性氧反应，从而具
有细胞保护作用。此外，该类化合物还有可能与体
内氧化应激相关酶的抑制有关，但其抗氧化的保护
机制还有待更深入的研究。在 10-8M 的浓度下，并
未减轻活性氧引起的细胞凋亡，其可能原因是在
10-8M浓度下，药物的浓度太低，被细胞跨膜吸收而
发生作用的药物分子可能很少，难以呈现清除活性
氧的作用。
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( 下转第 956 页)
159Vol. 26 龙红萍等:兖州卷柏的肽类化学成分及对低氧 /复氧诱导的 PC-12 细胞损伤的保护作用
MyD88 是含有 TLＲ结构域的接头蛋白，是 TLＲ
信号通路的下游信号因子，在 TLＲ 信号通路中有关
键性的作用。TLＲs 识别 PAMPs 后，胞质中 Toll 的
TLＲ结构域与 MyD88 羧基末端相互作用，可引起
NF-κB．的激活和转位，促使炎性细胞因子的合成与
释放，从而诱发机体本身的炎症反应。研究发现在
结肠炎小鼠模型中敲除 TLＲ4 和 MyD88 基因，小鼠
可表现出死亡率降低、受损黏膜的自动修复、肠道出
血程度减轻等症状［10］，说明抑制 MyD88 通路可以
功能性的限制肠道的炎症反应。我们的研究结果证
实，黄芩苷能够有效的抑制 DSS 诱导的结肠炎小鼠
模型结肠黏膜 TLＲ2 和 TLＲ4 和 MyD88 mＲNA 的表
达，提示黄芩苷能够通过对 TLＲs /MyD88 通路的调
控来达到抑制结肠的炎症反应起到治疗作用的。
综上所述，本研究结果证实黄芩苷能够有效的
缓解 DSS诱导的结肠炎小鼠模型的症状，降低炎症
反应，其作用机制可能是与 TLＲs /MyD88 通路相关。
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