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药
研
究
绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析
　　杨蓓芬1 ,2 　崔敏燕2
1.浙江工业大学生环学院　杭州　310012　2.台州学院生命科学学院
基金项目:台州学院资助项目(No:05ND19)
Fund pro ject:Item suppor ted by Taizhou College(No:05ND19)
摘要:[ 目的] 绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析。[ 方法] 对绵毛鹿茸草不同提取液的总黄酮 、总绿原酸 、总生物
碱 、总皂甙 、游离蒽醌等次生代谢产物含量和抑菌活性进行测定。[ 结果] 显示:70%乙醇提取液 、60%丙酮提取液对肺炎双球
菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌有中等抑制作用 , 水提取液有弱抑制作用;70%乙醇提取液是肺炎双球菌 、金黄色
葡萄球菌的良好抑制剂 , 60%丙酮提取液是大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌的良好抑制剂。[ 结论]绵毛鹿茸草提取掖对大肠杆菌的抑
菌活性与绿原酸的含量具有显著的正性关 ,对枯草芽孢杆菌的抑菌活性与蒽醌之间存在极显著的相关性。
关键词:绵毛鹿茸草;次生代谢;抑菌活性
中图分类号:R284.1　文献标识码:A　文章编号:1005-5509(2009)02-0265-03
Analysis of the SecondaryMetabolisms Contents and Antibacterial Activity in the Different Organs of Monochasma Savatieri Franch.ex
Maxim Yang Beifen
1 , 2 ,Cui Minyan2 1 .College o f Biological and Env ironmental Engineering , Zhe jiang University of Technolo-
g y ,Hangzhou(310014);2.Ecology Institute of Taizhou University
Abstract:[ Objective] To analyse the content of secondary metabo lisms and antibacte rial activity o f Monochasm a Savatie ri Franch.ex
Max im.[ Method] The contents of 5 secondary metabo lites such as flavono id , chlorogenic acid , tannin ,phenol and anthraquinones in
the different ex tracts o f Monochasma savatie ri Franch.ex Max im were determined.[ Results] I t showed tha t the antibacterial activ i-
ty o f the liquids ex tracted w ith 70%ethanol , 60%acetone on Streptococcus pneuoncae ,S taphylococcus aureus ,Escherichia coli and
Bacillus subtilis w ere moderate ,w hile that o f the liquids ex tracted with w ater was weak.The liquids ex tracted w ith 70 ethano l were
the better inhibitor of Streptococcus pneuoncae and Staphylococcus aureus ,w hile the liquids ex tracted with 60 acetone were the bet-
ter inhibitor of Escherichia co li and Bacillus subtilis.[Conclusion] T here w as positive correlation betw een the antibacterial activity o f
the liquids of Monochasm a savatieri Franch.ex Maxim on Escherichia co li and the content of the chologenic acid.There was also
marked correlation between that of Baillus subtilis and anthra quinones.
Key words:monochasma Savatie ri Franch.ex Maxim;secondary metabo lism;antibacterial activity
　　绵毛鹿茸草 (Monochasma savatieri Franch.ex
M axim)为唇形科鹿茸草属植物 ,别名白头翁 、千重
塔 、白头毛 ,分布于浙江 、福建 、江西 ,常生于山坡向
阳处杂草中或马尾松林下[ 1] 。主要功能为清热解
毒 ,祛风行气 ,凉血止血 ,祛痰 ,用于感冒 ,慢性气管
炎 ,肺炎 ,咳血 ,吐血 ,便血 ,牙龈炎 ,牙髓炎 ,乳痈 ,痈
肿 ,小儿口疮 ,风湿关节痛等。本文对绵毛鹿茸草的
不同提取液中总黄酮 、总绿原酸 、总生物碱 、总皂甙
及其对肺炎双球菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、枯
草芽孢杆菌抑菌活性进行研究 ,并探讨这五类次生
代谢产物与抑菌活性之间的相互关系 。
1　实验与方法
1.1　实验材料和仪器　绵毛鹿茸草于 2007 年 6月
采自浙江千岛湖姥山林场的山坡上。采集时将棉毛
鹿茸草全草用湿布包裹 ,塑料袋封装 ,立即带回实验
室。将材料洗净 , 防入 105℃恒温干燥箱中固定
25min , 再在 80℃条件下干燥 24h , 研磨后经过
0.25mm 金属网筛 ,将烘干样品放入磨口广口瓶 ,置
于干燥器中保存 ,备用[ 2] 。标准品芦丁 、绿原酸 、小
蘖碱 、人参皂甙 Rb , 1 ,8-二羟基蒽醌购自中国药品生
物制品检定所 ,所用试剂均为分析纯 。四种菌种均
由浙江台州医院无偿赠送。培养基为牛肉膏培养
基。吸光度的测定在 T6新世纪紫外-可见分光光
度计上完成。
1.2　绵毛鹿茸草提取液的制备　称取绵毛鹿茸草
粉末 3份 ,每份 1g ,其中 2份分别用 70%乙醇 、60%
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　浙江中医药大学学报 2009年 3月第 33卷第 2期
DOI :10.16466/j.issn1005-5509.2009.02.042
　杨蓓芬,等:　绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析
丙酮在 80℃水浴中回流 6h ,进行提取 ,离心取上清
液 ,并清洗残渣2次 ,离心取上清液 ,将 3次上清液合
并;另 1份用沸水进行提取 0.5h ,离心取上清液 ,反
复多次 ,直至提取液色淡 ,并将几次沸水提取液混
合 。将乙醇 、丙酮 、沸水提取液的浓缩 ,并调节 pH 至
7.0 ,然后用蒸馏水定容至 1ml ,放入 4℃的冰箱中待
用 。
1.3　次生代谢产物含量的测定
1.3.1　总黄酮的提取与测定[ 3] 　取上述绵毛鹿茸
草提取液样品 0.2ml , 挥去溶剂后用甲醇定容至
25ml ,取其中 1m l , 置 10m l 离心管中 , 加入 4m l
0.1mo l/L 三氯化铝-甲醇溶液 ,摇匀 ,在 420nm 处
测定吸光度。以芦丁为标准品 , 其回归方程为 y =
9.6101x+0.0147 , R2 =0.9991。
1.3.2　总绿原酸的提取与测定[ 4] 　取上述绵毛鹿
茸草提取液样品 0.2ml ,挥去溶剂后用 95%乙醇定
容至 25m l ,取 1ml ,置 25m l容量瓶中 ,加入 0.2mo l/
LHCl定容至刻度 , 摇匀 , 以试剂空白为对照 , 在
324nm处测定吸光度。以绿原酸为标准品 ,其回归
方程为 y =66.064x+0.0134 , R2 =0.9995 。
1.3.3　总生物碱的抽提与测定[ 5] 　取上述绵毛鹿
茸草提取液样品 0.2ml ,挥去溶剂后用 90%乙醇定
容至25ml。取提取液 1.4ml置于精密加入 4ml氯仿
的分液漏斗中 ,加入 7.2×10-4mo l/L 溴甲酚绿 pH
=4.42缓冲溶液 0.6ml ,振摇 1min ,静置 1h ,取澄清
的氯仿液 ,以试剂空白作对照 ,于 417nm 处测定吸收
度 。以小檗碱为标准品 ,其回归方程为 y =6.6x -
0.0102 ,R2 =0.9999。
1.3.4　总皂甙的提取与测定[ 6] 　取上述绵毛鹿茸
草提取液样品 0.2ml , 挥去溶剂后用甲醇定容至
25ml ,取 1m l置 25ml 容量瓶中 ,挥去溶剂后 ,加入
0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液 , 再加入 0.8ml 高氯
酸 ,于 70℃水浴加热 20min ,取出 ,冷却 ,加 5ml冰醋
酸 ,以试剂空白作对照 ,于 560nm 波长处测其吸光
度。以人参皂甙 Rb 为标准品 ,其回归方程为 y =
27.763x +0.0901 ,R2 =0.9716。
1.3.5　游离蒽醌的提取与测定[ 7] 　取上述绵毛鹿
茸草提取液样品 0.2m l ,放入 10ml离心管中 ,水浴蒸
干溶剂 ,加入 5%醋酸镁乙醇溶液 5m l ,以试剂空白
为对照 ,在 498nm 处测定吸光度。以 1 , 8二羟基蒽
醌为标准品 ,其回归方程为 y=47.464x +0.0012 ,R2
=0.9996 。
1.4　抑菌活性的研究　以滤纸琼脂扩散法测定绵
毛鹿茸草三种溶剂提取物对肺炎双球菌 、金黄色葡
萄球菌 、大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌的抑菌效果。将经
过记数的菌液稀释后 , 控制 100μL 含 104cfu , 涂平
板。将灭菌后滤纸片(直径为 6mm)浸泡在棉毛鹿茸
草提取液中 。在已涂菌的平板上放置上述滤纸片 ,
并以蒸馏水为阴性 ,链霉素为阳性对照 ,每一样品重
复3次 。处理后的平板放在30℃培养24h ,观察并记
录抑菌圈的直径大小[ 8] 。
1.5　数据的处理　试验处理及数据测定均重复 3
次 ,将所得数据输入 SPSS11.5fo r Window s 数据分
析系统进行统计 ,并对次生代谢产物的含量与抑菌
圈的大小进行相关分析 。
2　结果与分析
绵毛鹿茸草不同提取液次生代谢产物含量以及
它们对四种细菌的抑菌圈大小如表 1所示。其中次
生代谢产物的含量为百分含量 ,抑菌活性以抑菌圈
的大小(mm)表示 ,阴性对照抑菌圈直径 6mm ,阳性
对照(链霉素)抑菌圈 26mm;抑菌圈直径在 6 ～ 8mm
为微弱抑菌 ,8 ～ 12mm 为弱抑菌 , 12 ～ 20mm 为中等
抑菌 ,20 ～ 24mm 为强抑菌 。绵毛鹿茸草的的次生代
谢产物和抑菌圈直径的相关性如表 2所示。
表 1　绵毛鹿茸草提取液次生代谢产物的含量(g/kg)及其抑菌圈直径(mm)
提取液 总黄酮 总绿原酸 总皂甙 总生物碱 游离蒽醌 肺炎双球菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
蒸馏水 0.168 19.744 4.314 1.092 0.001 9.70 12.00 9.70 9.30
60%丙酮 1.245 56.963 5.418 1.677 0.036 15.47 17.40 15.87 13.80
70%乙醇 1.403 72.752 5.381 1.415 0.043 13.73 15.67 19.03 14.83
2.1　绵毛鹿茸草提取液次生代谢产物含量和抑菌
活性分析 　从表 1 中可以看出:总黄酮 、总绿原酸 、
游离蒽醌三种次生代谢产物的含量均为 70%乙醇提
取液>60%丙酮提取液>水提取液 ,最高含量分别
为 1.403g/kg 、72.752g/kg 、0.043g/kg;生物碱和皂
甙的含量为 60%丙酮提取液>70%乙醇提取液>水
提取液 ,最高含量为 1.677g/kg 和 5.418g/kg 。
对进肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用
均是 60%丙酮提取液>70乙醇提取液>水提取液 ,
最大抑菌圈直径为 15.47mm 和17.40mm ,为中等抑
菌作用;对大肠杆菌和枯草杆菌的抑制作用是 70乙
醇提取液 >60%丙酮提取液>水提取液 ,最大抑菌
圈直径为 19.03mm 和 14.83mm ,为中等抑菌作用。
水提取液对肺炎双球菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠杆
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浙江中医药大学学报 2009年 3月第 33卷第 2期　
　杨蓓芬,等:　绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析
菌 、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径均在 9 ～ 12mm 之
间 ,具有弱抑菌作用 。可以看出绵毛鹿茸草的 70%
乙醇提取液和 60%丙酮提取液是良好的抑菌剂。
2.2　不同提取液的次生代谢产物含量与抑菌活性
的相关性分析　从表 2可以看出:黄酮与蒽醌之间
存在显著的正相关 ,推测绵毛鹿茸草中这两种次生
代谢产物可能具有相同的合成底物或具有相同代谢
途径;大肠杆菌的抑菌活性与绿原酸的含量具有显
著的正性关 ,推测绵毛鹿茸草对大肠杆菌的抑制作
用可能是提取液中的绿原酸起的作用;蒽醌与枯草
芽孢杆菌之间存在极显著的相关性 ,说明绵毛鹿茸
草对枯草芽孢杆菌的抑制作用主要是蒽醌作用的结
果;肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌之间具有显著的
相关性 ,而与所测的 5种次生代谢产物之间都没有
显著相关性 ,因此推测绵毛鹿茸草中其它某些物质
对肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌均有一定抑制作
用。
表 2　绵毛鹿茸草不同提取液的次生代谢产物含量与抑菌活性的相关性
总黄酮 总绿原酸 总皂甙 总生物碱 游离蒽醌 肺炎双球菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
黄酮 1
绿原酸 0.984 1
皂甙 0.989 0.948 1
生物碱 0.836 0.726 0.907 1
蒽醌 　0.999 ＊ 0.992 0.981 0.809 1
肺炎双球菌 0.915 0.829 0.946 0.986 0.895 1
金黄色葡萄球菌 0.906 0.818 0.958 0.990 0.885 　1.000＊ 1
大肠杆菌 0.976 　0.999 ＊ 0.933 0.695 0.985 0.803 0.781 1
枯草芽孢杆菌 0.998 0.993 0.979 0.802 　1.000＊＊ 0.890 0.880 0.987 1
　　水平显著差异:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01
3　讨论
次生代谢是植物的重要特征 ,其产物既具有重
要的生态学意义又可决定各类植物在进化过程中的
兴衰成败 、生死存亡等问题[ 9] ,植物中的次生代谢产
物还具有抗过敏 、降血压 、抗炎 、抗菌 、抗突变 、抗肿
瘤 、抗病毒 、抗氧化等多种活性。
绵毛鹿茸草对 70%乙醇提取液 、60%丙酮提取
液 、水提取液对肺炎双球菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠
杆菌 、枯草芽孢杆菌均有抑制作用 ,前两者为中等抑
制作用 ,后者为弱抑制作用;70%乙醇提取液是肺炎
双球菌 、金黄色葡萄球菌的良好抑制剂 ,60%丙酮提
取液是大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌的良好抑制剂。推
测对大肠杆菌和枯草杆菌的抑制作用主要由提取液
中的绿原酸和蒽醌引起的。
文献查阅得知:金银花中绿原酸的平均含量为
56.92g ·kg-1 [ 10] ,巴戟天样品的游离蒽醌含量为的
范围为 0.013 ～ 0.049g ·kg-1 [ 7] 。绵毛鹿茸草 70%
乙醇提取液中总绿原酸 、游离蒽醌的含量 72.752g ·
kg-1 、0.043g ·kg-1 。从中不难看出:70%乙醇提取
液是绵毛鹿茸草的良好提取剂。至于绵毛鹿茸草中
这些次生代谢产物的分子组成 、分子结构等方面内
容有待进一步的研究。
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(收稿日期　2008-09-22)
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