全 文 ：西北农业学报　2006 , 15(2):78 ～ 80
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
甘肃瑞香根际真菌与内生真菌多样性的研究
＊ 杨航宇 ,芦维忠 ,袁君辉
(甘肃林业职业技术学院森管系 ,甘肃天水　741020)
摘　要:为了进一步研究根际真菌和内生真菌与植物之间的关系 ,笔者对生长在甘肃的甘肃瑞香根茎和根际
土壤进行真菌的分离 ,结果获得真菌 66 株。经显微形态观察鉴定 ,它们均属于半知菌亚门的 9 个属 , 其中青
霉属 30 株 ,约占总数的 45.5% ,属于绝对优势类群。试验结果充分表明甘肃瑞香的根际真菌和内生真菌有
着丰富的多样性。
关键词:甘肃瑞香;根际真菌;内生真菌;多样性
中图分类号:Q949.32　　文献标识码:A　　文章编号:1004-1389(2006)02-0078-03
A Study on the Variety of the Rhizo-epiphyte and Endo-epiphyte of
Daphne odora thunb
YANG Hang-yu , LU Wei-zhong and YUAN Jun-hui
(Departm en t of Fores t ry Management , Gansu Fores t ry T echnology C ollege , Tianshui Gansu　741020 , Chin a)
Abstract:To explo re the relationship among the rhizo-epiphy te , the endo-epiphy te and the plant , the
present autho r takes as a sample the Daphne odora thunb g rowing in Gansu province and dissociate s
the rhizo-epiphyte f rom the endo-epiphyte in it.As a result , 66 epiphy tes are obtained.Under the m i-
croscope , they are proved that they all fall into 9 genera o f the same subo rdinate phylum , and of
w hich , there are 30 penicillia , 45.5%o f the total.T he result show ed the variety in the rhizo-epiphy te
and endo-epiphyte of Daphne odora thunb.
Key words:Daphne odora thunb;Rhizo-epiphy te;Endo-epiphyte;Variety
　　瑞香属瑞香科常绿灌木。在我国的大部分地
区都有分布。瑞香既有观赏价值 ,又有药用价值。
经研究 ,瑞香具有活血化瘀 ,消炎止痛 ,祛风除湿 ,
镇静安神等作用[ 1] ,可见瑞香是一种具有重要经
济价值的药用植物。真菌是生态环境中重要的生
命物质之一 , 植物的根际是微生物生存的特殊环
境 ,根际真菌与植物的根之间存在着复杂的共栖
关系 ,根际真菌的旺盛活动给植物的生长带来很
大的益处[ 2] 。在植物体内还存在一些与植物互惠
互利共生的内生真菌 。当前对药用植物内生和根
际真菌的研究有过一些报道[ 3 ～ 5] ,但对甘肃瑞香
植物内生和根际真菌的研究还未见报道 。笔者对
甘肃徽县 、成县甘肃瑞香的根际真菌和内生真菌
进行分离鉴定 ,以探索其多样性。旨在为甘肃瑞
香的栽培 、推广 、组织培养及其有害微生物的防
治 ,提供一定的理论依据 ,为进一步研究开发甘肃
瑞香打下坚实的基础 。
1　材料与方法
1.1　供试材料
2004 ～ 2005年从甘肃徽县 、成县采集新鲜的
甘肃瑞香根茎和根际土壤 。
1.2　培养基
用 PDA 培养基和查氏培养基进行研究。
1.3　分离方法
1.3.1　根际真菌的分离　采用土壤平板法[ 4] ,按
＊ 收稿日期:2005-09-08　　修回日期:2005-12-06
基金项目:2004年度甘肃省林业科学技术推广项目“甘肃瑞香驯化推广项目” 。
作者简介:杨航宇(1978-),男 ,汉族 ,甘肃陇南人,助讲 ,主要从事植物病理学的教学和研究。联系电话:13830836266。
照 “棋盘式”取样 ,将采集的根部土样混匀 ,称取
1 g土样滴入少量的无菌水 , 充分震荡 ,然后将菌
液加入到已灭菌融化并冷却到 40℃左右的 PDA
培养基中 ,并充分摇匀后 ,倾入已灭菌的培养皿
中 ,然后放入 28℃的恒温箱中培养 , 3 d 后 ,挑取
边缘菌丝纯化并对菌落形态 、颜色进行描述。
1.3.2　内生真菌的分离[ 6 , 7] 　取新鲜的甘肃瑞
香去叶及根系 ,用自来水冲洗干净 ,切成 1 cm 小
段在超净工作台上进行表面消毒 ,先用 75%的酒
精漂洗 5 m in ,再用无菌水冲洗 5 ～ 6 次 ,其次用
0.1%升汞溶液浸泡 2 ～ 3 min ,再用无菌水冲洗 5
～ 6次 ,然后用无菌的解剖刀剥取韧皮部 ,剪去周
边 ,切成(0.5×0.5)cm2 大小的小片段 ,接种于
PDA 培养基上置于 28℃恒温箱中培养 5 d ,可看
见样品边缘有菌丝的长出并挑取纯化 ,然后用直
径为 0.4 cm 打孔器打成菌饼 ,转接于查氏培养基
上 ,测其生长速率。
1.4　菌种鉴定
结合菌落形态 、颜色 、生长速率及显微镜下分
生孢子的结构及大小 ,分生孢子梗的形态等 ,将所
有分离到的菌鉴定到属[ 8 ～ 11] 。
2　结果与分析
2.1　根际真菌
2.1.1　菌种纯化　挑取菌落边缘生长力旺盛菌
丝转接于 PDA 培养基上 ,待菌落生长 5 d 后 ,对
所有的分离菌进行单孢分离 ,以获得纯菌株 。
2.1.2　菌种鉴定　用查氏培养基鉴定到属 ,结果
得到 27 株霉菌 ,其中青霉属 15株 ,木霉属 3株 ,
曲霉属 6株 ,轮枝孢属 、拟青霉属 、头孢属各一株 ,
其中优势种群为:青霉属 , 木霉属和曲霉属(表
1)。
2.2　内生真菌
从甘肃瑞香植株的根茎部上分离到 39株菌
种 ,经鉴定它们均属于半知菌亚门的 7个属 ,其中
青霉属 15株 ,镰刀菌属 7株 ,丛梗孢属 8株 ,曲霉
4株 ,木霉 3 株 ,链格孢属 1 株 ,青霉属属于绝对
优势属(表 2)。
表 1　27株根际真菌鉴定结果
Table 1　The identify result of 27 rhizo-epiphyte
菌号 No. 鉴定结果 Genus 菌号 No. 鉴定结果 Genus 菌号 No. 鉴定结果Genus
No01 曲霉属 Asperg i l lus No10 青霉属 Penici l li ium No19 青霉属 Penici l li ium
No02 青霉属 P enici l li ium No11 青霉属 Penici l li ium No20 轮枝孢属 Vert ici l l ium
No03 青霉属 P enici l li ium No12 青霉属 Penici l li ium No21 曲霉属 Asp ergi l lus
No04 曲霉属 Asperg i l lus No13 曲霉属 Asp ergi l lus No22 青霉属 Penici l li ium
No05 青霉属 P enici l li ium No14 木霉属 Tr ichotderma No23 木霉属 Tr ichotderma
No06 青霉属 P enici l li ium No15 青霉属 Penici l li ium No24 拟青霉 Paeci lom yces
No07 青霉属 P enici l li ium No16 青霉属 Penici l li ium No25 绿木霉 T.viride
No08 青霉属 P enici l li ium No17 青霉属 Penici l li ium No26 头孢属 Cephalospor ium
No09 青霉属 P enici l li ium No18 曲霉属 Asp ergi l lus No27 黑曲霉 Asp ergi l lus niger
表 2　39株内生真菌鉴定结果
Table 2　The identify result of 39 endo-epiphyte
菌号 No. 鉴定结果 Genus 菌号 No. 鉴定结果 Genus 菌号 No. 鉴定结果Genus
No01 镰刀菌属 F usa rium No14 青霉属 Penici l lium No27 青霉属 Penici l lium
No02 镰刀菌属 F usa rium No15 丛梗孢属 Moni lia No28 交链孢属 Ater lar ria
No03 镰刀菌属 F usa rium No16 青霉属 Penici l lium No29 丛梗孢属 Moni l ia
No04 曲霉属 Asperg i l lus No17 青霉属 Penici l lium No30 青霉属 Penici l lium
No05 丛梗孢属 Moni lia No18 木霉属 Tr ichotderma No31 青霉属 Penici l lium
No06 丛梗孢属 Moni lia No19 青霉属 Penici l lium No32 青霉属 Penici l lium
No07 曲霉属 Asperg i l lus No20 镰刀菌属 F usnrium No33 丛梗孢属 Moni l ia
No08 青霉属 P enici l lium No21 青霉属 Penici l lium No34 木霉属 Tr ichotderma
No09 丛梗孢属 Moni lia No22 镰刀菌属 F usnrium No35 镰刀菌属 F usnrium
No10 霉属 Trichotderma No23 曲霉属 Asp ergi l lus No36 青霉属 Penici l lium
No11 曲霉属 Asperg i l lus No24 青霉属 Penici l lium No37 丛梗孢属 Moni l ia
No12 镰刀菌属 F usn rium No25 青霉属 Penici l lium No38 青霉属 Penici l lium
No13 丛梗孢属 Moni lia No26 青霉属 Penici l lium No39 青霉属 Penici l lium
·79·2 期　　　　　　　　　　　　　杨航宇等:甘肃瑞香根际真菌与内生真菌多样性的研究
3　讨论
3.1　从甘肃瑞香的根际土壤和植株根茎部共分
离得到 66株真菌 ,分属 9属 ,其中青霉属 30株 ,
占总数的 45.5%,属于绝对优势种群。试验充分
说明了甘肃瑞香根际和内部真菌有着比较丰富的
多样性。青霉是世界上广泛存在的一个属 ,对恶
劣的环境条件有极强的耐受力 、适应力 ,只要在适
宜的条件下 ,能随时大量繁殖而成为主要的优势
类群 。青霉属种群十分丰富 ,其基因型和表现型
多种多样 ,不同的种群之间 ,菌落的颜色 、质地 、形
态等方面各不相同。青霉的代谢活动非常复杂 ,
能分泌多种有机物 ,如纤维素 、果胶酸 、木质素 、蛋
白质 、淀粉等[ 12 , 13] 。
3.2　从表 1可以看出 ,如此丰富的根际真菌类群
生活在植物的根际周围 ,形成一个相对稳定的微
生态环境 。一方面 ,它能抵御外来微生物的侵入 ,
保护植物不受伤害 ,同时分解土壤中的有机物质
供给植物生长。另一方面 ,植物在生长发育过程
中也能释放一些对菌物生长发育有利的物质 ,因
此 ,这种互惠互利的关系 ,促使生态系统更加稳
定 ,即使有的真菌是病原真菌 ,但由于真菌与真菌
之间 、真菌与植物之间 、真菌与环境之间存在相互
依靠 、相互制约的关系 ,其中病原真菌对植物一般
不会造成很大的威胁[ 14] 。
3.3　从表 3可以看出 ,在植物体内的微生物环境
中不同的菌物相互作用并建立了一个平衡的体
系 ,在植株体内形成一种相对稳定的真菌类群 ,如
镰刀菌 、从梗孢属 、青霉属分离率较高 ,数量较大 ,
均属于优势种群。通过分离还得到交链孢菌 ,这
些真菌一方面表现出能与植物相互协调 、形成共
生关系:一是植物为内生真菌提供营养物质 ,二是
内生真菌的代谢产物能刺激植物生长发育。通过
大量试验证明 ,内生真菌能够参与植物有机质的
合成 、或者转化植物的次生代谢物质。另一方面 ,
内生真菌对植物仍然存在着一定的威胁 ,在无病
的健康植株 ,内生休眠病原菌若偶然遇到外界环
境的变化 ,例如:旱 、涝 、渍以及其他微生物侵袭
时 ,内生病原菌也能引起寄主发生病害 。
3.4　根际真菌与内生真菌相比 ,我们可以看出 ,
从植物体内分离到的真菌菌株 ,同样的在根际环
境中也能分离到 ,只不过是数量的多少以及少数
种类上的不同而已。这也充分说明 ,植物与土壤
之间密切相关 。我们可以假设有两种途径 ,一种
途径是 ,土壤根际真菌在与植物长期适应过程中
有选择地进入到植物体内的。另一条途径可能
是 ,对于寄生性的病原菌来说 ,它们主要以活体营
养为生 ,因而活寄主是他们生存的最适生境 ,也是
和腐生菌避免竞争营养最理想的避风港。一般来
说 ,腐生菌不进入活体组织内 ,因而 ,寄生性真菌
以菌丝长期生存于寄主体内是寄生性病原菌避免
竞争的最有效手段 。
4　结论
这次试验共获得真菌 66 株 ,经分离培养 、形
态观察 、显微鉴定 ,它们均属于半知菌亚门 9 个
属 ,其中青霉属 30株 ,占总数的 45.5%,属于绝对
优势类群。通过本次研究充分说明了根际真菌和
内生真菌有着丰富的多样性 ,并且显示了根际真
菌与内生真菌及植物之间存在着密切的关系。
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·80· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　15 卷