全 文 ：2016·23
王霞，刘晓丹，于晓明
（吉林农业科技学院，吉林吉林132101）
随 机 扩 增 多 态 性 DNA （Random amplifie dpolymorphic
DNA，简称 RAPD）是建立在 PCR 基础之上的检测 DNA 多态
性的分子标记技术 [1]，其利用 PCR 随机合成多态性 DNA 片段，
检测被扩增区域内遗传特性变化，该技术的实施不依赖于种属
的特异性和基因组的结构， 无需制备探针，DNA 用量少， 分子
识别率高，对环境污染小，成本低，已在分类学研究 、品种鉴定、
遗传作图等方面得到了广泛的应用 [2-3]。 目前，运用 RAPD 技术
已经成功的发现了众多的突变型 [4，5]。 试验对 NaN3 诱变的凤尾
鸡冠花耐盐突变体进行 RAPD 分析，进一步鉴定耐盐突变体的
遗传稳定性，为凤尾鸡冠花耐盐新品系的诱变育种奠定基础。
1材料与方法
1.1材料及试剂
材料： 凤尾鸡冠花组培苗经 NaN3 诱变初筛获得的耐盐突
变体。
主要试剂：随机引物购自生工生物工程 （上海）股份有限公
司 ；2×CTAB 提取缓冲液 、Tris -HCl、0.5 moloL -1 EDTA （pH
8.0）、氯仿-异戊醇（24︰1）、TE 溶液、3 moloL-1 NaAC、异丙醇、
乙醇、DNA 分子量标准等，所有试剂均为分析纯。
1.2方法
1.2.1基因组DNA提取及检测参照赵曦 [6]等的 CTAB 法，以未
经处理的凤尾鸡冠花组培苗为对照，分别提取对照和初筛耐盐
突变体的基因组 DNA，并采用紫外风光光度计法和琼脂糖凝胶
电泳法对所提基因组进行鉴定。
1.2.2凤尾鸡冠耐盐突变体的RAPD检测
1.2.2.1引物筛选及RAPD反应从上海生工生物工程技术有限
公司购进 98 个随机引物 （10 个碱基 ），以对照和耐盐突变体基
因组 DNA 为模板，进行 RAPD 扩增，筛选出突变体与对照间具
多态性的特异引物。
采用 20μL 的 RAPD 反应体系 ， 分别为 ：20ngoμL-1 模板
DNA 2.0 μL，10pm 随机引物 1.0 μL，2.5 mmooL -1MgCl2 2.0
μL，2.5 mmooL-1 dNTP 0.3 μL，Taq 酶 1μL，10×PCR Buffer 2.0
μL，其余由 ddH2O 补充。 反应程序为： 94 ℃预变性 5 分钟；94
℃变性 1 分钟 ，35℃退火 45 秒 ，72 ℃延伸 1 分钟 ，42 个循环 ；
72 ℃再延伸 10 分钟；4 ℃保温。扩增产物用 2.0%琼脂糖凝胶进
行电泳分离和分析。
1.2 2.2RAPD标记分析通过筛选引物，检测凤尾鸡冠花耐盐突
变体相对于对照在 DNA 分子水平上的变化， 获得突变体与对
照间的多态性基因位点， 以稳定而清晰的条带作为统计数据，
对试验数据进行统计分析，计算变异率 [7]。
2 结果与分析
2.1基因组 DNA 的纯
度和浓度检测
采 用 CTAB 法 提
取得到的 DNA 颜色呈
无色透明状 ， 较粘稠 ，
易溶于 TE 溶液 。 对照
和 突 变 体 DNA 样 品
OD260/OD280 都在 1.80-
1.92 之 间 ，OD260/OD230
都在 1.98 ~2.10 之间 ，
表明所提 DNA 样品中
蛋 白 和 RNA 污 染 较
少 ，DNA 纯度较高 ，凝
胶电泳结果如图 1 所
示，基因组条带清晰 、整齐 、明亮 ，无弥散现象 ，点样孔清晰 ，可
进行下一步实验。
2.2引物的筛选及RAPD分析
用 98 个随机引物对凤尾鸡冠花耐盐突变体及其对照进行
RAPD 分析，结果发现有 12 条引物可扩增出清晰、明亮、多态性
较好的条带 （表 1），对凤尾鸡冠花对照和初筛获得的耐盐突变
体进行了 RAPD 分析 ， 发现 12 个随机引物中 ，9 个引物 （S87，
S88、S89、S97、S113、S424、S432，S435） 出现差异条带 ，3 个引物
（S98、S117、S440）未出现差异性条带，其余引物均没有扩增出条
带，图 2 为多态性最好的 3 个随机引物（S87、S432、S435）的扩增
图。 12 个可扩增引物共扩增出 104 条带，其中对照和突变体分
别扩增的总条带数为 49 和 55，扩增片段大小在 100-2000bp 之
间。 RAPD 扩增结果中出现了新增或缺失条带，与对照相比，突
变体新增条带 11 条，缺失条带 12 条，凤尾鸡冠花耐盐突变体与
对照差异较大，变异率为 31.73%，充分说明了 NaN3 结合组织培
养技术能有效地诱导凤尾鸡冠花基因变异。
摘要：采用RAPD技术对叠氮化钠（NaN3）诱变的凤尾鸡冠花耐盐突变体进行遗传特性分析。结果表明：从98个随机引物中筛选出
12条适于凤尾鸡冠花的引物，共扩增出104条带，对照和突变体扩增的总条带数分别为49和55，其中9个引物出现差异条带，3个引物
未出现差异性条带，凤尾鸡冠花耐盐突变体与对照差异较大，变异率为31.73%，说明了NaN3能有效诱导凤尾鸡冠花的基因变异。
关键词：凤尾鸡冠花；耐盐突变体；RAPD鉴定
基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究（吉教科合字〔2013〕第471号）
中图分类号：S681.3文献标识码：A DOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2016.23.048
凤尾鸡冠花耐盐突变体的RAPD鉴定
图 1凤尾鸡冠花基因组 DNA 电泳图
注：1、2 为 CK 基因组，3、4 为耐盐
突变体基因组
表 1 12 个随机引物及其序列
验
究研
实
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3 讨论
RAPD 是一种有效的检测基因差异的技术， 该技术已经应
用于体外诱变育种引起的 DNA 多态性分析， 凤尾鸡冠花组培
苗经 NaN3 处理后， 结合植物组织培养技术， 在半致死剂量的
NaCl 胁迫下诱变耐盐突变体，RAPD 扩增结果差异显著。 与对
照相比 ，扩增带型出现了差异 ，这些差异带型主要有扩增条带
的消失、增加以及扩增条带的强弱变化 。 引起扩增带消失或新
增的原因肯是引物互补位点发生碱基突变 ， 或互补位点间的
DNA 发生插入或缺失，或插入片段过大，这些都能导致差异片
段的出现。 引起扩增条带强度变化的原因可能是多拷贝引物结
合位点上某些碱基发生突变，使引物结合量减少，造成 DNA 量
减少，或是新增片段与原有某片段的分子量相近，使谱带加深，
即反映出谱带深浅的变化。 这些差异充分说明 NaN3 诱变结合
体细胞无性系变异能引起遗传物质发生丰富的变异。
参考文献
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及 RAPD 检测[J].广西植物 ,2011,31(06):836-843.
作者简介：王霞 ，硕士 ，吉林农业科技学院 ，讲师 ，研究方
向：植物分子生物学及天然产物分离。
图 2凤尾鸡冠花突变体随机引物 S87、S432、S435 的 RAPD
扩增结果
注：M为100bp DNA Marker
张苗 1，曹培基 2
（1.山西省农科院植物保护研究所；2.山西林业职业技术学院实验林场，山西太原030001）
玉米粘虫 （Mythimna separata walker）是一种玉米作物虫害
中常见的主要害虫之一 。 属鳞翅目 ，夜蛾科 。 玉米粘虫以幼
虫暴食玉米叶片 ，严重发生时 ，短期内吃光叶片 ，造成减产甚
至绝收 。为害症状主要以幼虫咬食叶片 。 1~2 龄幼虫取食叶片
造成孔洞 ，3 龄以上幼虫危害叶片后呈现不规则的缺刻 ，暴食
时 ，可吃光叶片 。 大发生时将玉米叶片吃光 ，只剩叶脉 ，造成
严重减产 ，甚至绝收 。 当一块玉米田被吃光 ，幼虫常成群列纵
队迁到另一块田 ，故又名 “行军虫 ”。 成虫喜在潮湿 、作物生长
茂密的地块产卵 ，成虫产卵于叶尖或嫩叶 、心叶皱缝间 ，常使
叶片成纵卷 ，田间杂草丛生地块产卵也多 ，因此 ，在密植 、多
肥、灌溉条件好 、生长繁茂的小麦 、谷子 、水稻田或玉米 、高粱
地里粘虫发生较多 。 天敌主要有步行甲 、蛙类 、鸟类 、寄生蜂 、
寄生蝇等 。 因玉米粘虫群聚性 、迁飞性 、杂食性 、暴食性 ，成为
全国性重要农业害虫 。
玉米粘虫属迁飞性害虫 ， 其越冬分界线在北纬 33 度一
带 。 在 33 度以北地区任何虫态均不能越冬 ；在湖南 、江西 、浙
江一带 ，以幼虫和蛹在稻桩 、田埂杂草 、绿肥田 、麦田表土下
等处越冬 ；在广东 、福建南部终年繁殖 ，无越冬现象 。 北方春
季出现的大量成虫系由南方迁飞所至 。 在全国出现大规模爆
发，2012 年 8 月上中旬 ， 气候极端异常 ， 三代粘虫偏重发生 ，
特别是粘虫在河北 、内蒙古 、吉林 、黑龙江 、辽宁 、天津等地暴
发危害 。 据不完全统计 ，北京 、天津 、河北 、内蒙古 、辽宁 、吉
林、黑龙江和山西等 8 个省 （区 、市 ），发生粘虫已超过 5000 万
亩 ，严重发生面积 650 万亩 ，对农业影响巨大 ，2013 年部分省
摘要：本试验比较了5%高效氯氟氰菊酯水乳剂、5%氰戊菊酯乳油、30%乙酰甲胺磷乳油、48%毒死蜱乳油对玉米粘虫的防治效果。研
究表明：试验药剂5%高效氯氟氰菊酯水乳剂防治玉米粘虫有较好的速效性和持效性，药后1~7天防效均大于87%，可以用来防治玉米粘
虫。5%氰戊菊酯乳油、30%乙酰甲胺磷乳油有较好的持效性，施药7天后防治效果接近90%，可以与其他药剂的轮换施用。
关键词：玉米粘虫；田间防治；高效氯氟氰菊酯；氰戊菊酯；乙酰甲胺磷；48%毒死蜱
中图分类号：S435.131.4文献标识码：A DOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2016.23.049
不同药剂对玉米粘虫的田间防治效果研究
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