全 文 ：　文章编号:0559-7234(2000)04-0469-04
银杏叶和柘树提取物的抗氧化作用
张可炜　徐誉泰　张举仁　张德良　任玉珍
(山东大学 生物系 ,山东　济南 250100)
摘要:采用 Fe2+诱发卵黄多不饱和脂肪酸氧化 ,紫外线和 H2O2 、Fe2+诱导细胞
膜脂质过氧化模型.评价银杏叶提取物(EGb)和柘木提取物(ECt)的清除自由
基作用.结果表明 ,EGb 、ECt具有良好的清除自由基作用 ,其活性随浓度增大而
增强.
关键词:银杏叶提取物(EGb);柘木提取物(EC t);脂质过氧化;羟自由基
中图分类号:Q943　　　文献标识码:A
银杏叶提取物具有广泛的药理作用 ,拮抗血小板活化因子 、改善血液流变特性
等 ,[ 1 ,2]在临床上用于治疗冠心病 、老年性脑功能障碍 、脑损伤后遗症等.柘木(Cudrania
tricupidata),《本草纲目》记载主治妇人崩中 、主风虚补劳损 、通肾气.民间用其治癌.80
年代国内用柘木水提液治疗癌症.[ 3]柘木总黄酮对S 180、U27等瘤株抑制率达 30-40%.[ 4]
本文以新鲜鸡蛋蛋黄 、大鼠红细胞膜为实验对象 ,以外源性氧自由基作用 ,对银杏叶提取
物和柘木提取物的抗氧化作用作了比较研究.
1材料和方法
1.1　材料
药品　银杏叶提取物 ,由本研究室制备 ,黄酮 26.9%,总内酯 6.0%.柘木提取物.柘
树根水煎液 ,经 3250树脂吸附 ,30%乙醇洗脱 、浓缩 、冻干 ,黄酮含量约 30%.硫代巴比妥
酸(TBA),上海试剂二厂;牛血清白蛋白 ,Serva 公司产品;Coomassic 亮蓝 ,Sigma 公司产
品.其它药品均为国产 AR级.
Wistar 大鼠　体重 200 —300g ,山东省实验动物中心提供.新鲜鸡蛋 ,购自农贸市场.
1.2　方法
(1)依赖鸡卵黄脂蛋白的脂质过氧化模型采用 Клебанов的方法.[ 5]以样品抗氧化活
收稿日期:1998-12-23
基金项目:山东省科委资助项目(971164601)
作者简介:张可炜(1969-),男 ,硕士 ,讲师 ,现从事植物分子生物子研究.
第 35 卷　第 4 期
Vol.35　No.4 　　　　　
山　东　大　学　学　报(自然科学版)
JOURNA L OF SHANDONG UNIV ERSITY
　　　 　2000 年 12 月
Dec.2000
性(AOA)表示对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制率:
AOA(%)=[(对照管 A532-样品管 A532)/对照管A532] ×100%
(2)H 2O2 所致细胞膜损伤模型.断头法取大鼠血 ,每 30 mL 血液加 5 mL 500 U/mL
肝素制成抗凝血 ,按文献[ 6]提取细胞膜.用Coomassic亮蓝法测定细胞膜膜蛋白含量.[ 7]
调整膜蛋白含量 1.25 g/mL .取膜悬液 0.5 mL ,加药物适量(0-100μL),补充反应体积
至 0.6 mL , 37 ℃水浴 15 min ,加入0.2 mL 0.2 mmol/L 的H 2O2 溶液 ,加 PBS 至总体积
1 mL .37 ℃水浴 60 min ,加入20%HAc 配制的 0.6%TBA ,沸水浴 30 min 显色 ,冷却至
室温 , 2000 ×g 离心 10 min ,于 532 nm 比色.样品抗氧化活性(AOA)按公式:AOA(%)
=[(对照管 A532-样品管 A532)/(对照管 A532-阴性对照管 A532)] ×100%
(3)紫外线(UV)诱导的自由基损伤模型 ,条件参照[ 7]稍加改动 ,膜的制备同(2).取
膜悬液 0.5 mL ,加药物适量(10-100 μL),补充反应体积至 2.0 m L ,混匀后置于 30 W
的紫外灯下 ,距液面 12 cm ,照射 20 min 后 ,加入 2.0 mL ,20%HAc配制的 0.67%T BA ,
加塞 ,沸水浴 30 m in显色 ,其它同(2).
2　结果与讨论
2.1　EGb 、ECt对依赖卵黄脂蛋白的脂质过氧化作用
　　脂质过氧化作用主要是指在多不饱和脂肪酸中发生的一种自由基链式反应·OH 是
脂质过氧化作用的主要引发剂.新鲜卵黄中的极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白
(LDL)中的磷脂 C-2位上含有多不饱和脂肪酸 ,能在 Fe2+的诱发下 ,产生过氧化 ,从而
可用于考察药物的抗氧化活性.
实验结果如图 1所示.三者都有相似的抗氧化活性.抗氧化活性随浓度的升高而增
加.其中V c的 IC50为 0.3 g/ L , EGb 的 IC50为22 mg/ L ,EC t的 IC50为 5 mg/L.结果提示
EGb 、ECt均有较强的抗氧化活性 ,以 EC t的最强 ,两者抗氧化活性均优于 Vc.
图 1　V c、EGb and Ect 对 Fe2+诱发的脂质过氧化的抑制作用
Fig.1　Th e inhibit ing ef fect of Vc 、EGb and Ecton lipid peroxidat ion induced by Fe2+
2.2　EGb 、ECt对 H2O2所致细胞膜损伤的作用
H2O2在金属离子如Fe2+的存在下发生 Fenton 反应产生·OH ,它极易与多不饱和脂
肪酸发生反应 ,生成 LPO.由于大鼠红细胞膜富含有多不饱和脂肪酸 ,并且膜中所含有的
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微量血红蛋白中含有的 Fe2+ ,足以诱发 Fenton 反应产生·OH ,损伤细胞膜 ,使之产生
LPO .LPO 在酸性加热条件下 ,分解产生丙二醛(MDA).
实验结果如图 2所示 ,EGb 和 ECt有相似的抗氧化活性变化曲线.在一定范围内 ,随
浓度的升高 ,抗氧化活性迅速升高.EGb 的 IC50为 18 mg/L , ECt 的 IC 50为 5 mg/L .EC t
的抗氧化活性优于 EGb.(由于 H2O2-Cu2+-V c能产生大量的·OH 自由基 ,构成损伤模
型 ,故 Vc 不能用于此实验).[ 9]
2.3　EGb 、ECt对 UV诱导的自由基损伤的作用
紫外线可引起细胞膜质过氧化 ,SOD 不能抑制由 UV 引起的脂质过氧化 ,推测 O·-2
和·OH 不是引起脂质过氧化反应的原初自由基.对生物机体 , UV 是一种非电离辐射 ,不
能直接使分子电离.生物膜脂质过氧化可能是膜脂中不饱和键吸收一定剂量的紫外线后
发生光化反应的结果.这种反应的过程有脂类分子自由基的产生 ,继而引发自由基连锁反
应 ,导致脂质过氧化.结果如图 3所示.结果表明 EGb 、EC t 、V c对该体系的脂质过氧化反
应有很好的抑制作用 ,作用强度随药物浓度的增加而加强.EGb 的 Ic50为 20mg/L , Vc
的 Ic50为 30 mg/L ,ECt的 Ic50为 8 mg/L ,EGb 、ECb 均优于 Vc.
图 2　EGb 、ECt 对 H2O 2 诱导的膜损伤的保护作用
Fig.2　The p rotect ing ef fect of EGb and ECt on m em brane damage induced
by H2O 2
图 3　EGb 、ECt 、Vc 对紫外诱导的膜损伤的保护作用
Fig.3　T he p rotect ing ef fect of EGb EC t and Vc on m em brane damage indu ced by UV
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参考文献:
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[ 6] 张龙翔.生化实验方法和技术[ M] .北京:高等教育出版社 , 1981 , 21～ 23.
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[ 9] 陈季武 ,胡天喜.测定·OH 产生与清除的化学发光体系[ J] .生物化学与生物物理进展 , 1992 , 2:136.
ANT IOXIDAN T ACT ION OF EXT RACT OF
GINKGO BILOBA(EGb)AND EXTRACT OF CUDRANI A
TRICUSPIDATA(ECt)
ZHANG Ke-wei ,XU Yu-tai ,ZHANG Ju-ren ,ZHANG De-liang , REN Yu-zhen
(Department of Biology , Shandong University , Jinan 250100 , Shangdong , China)
Abstract:Three peroxidation models , which of yolk polyunsaturated fatty acid induced
by Fe2+ , and of erythrocy te membrane lipid induced by ult raviolet i rradiation and Fe2+ as
w ell as H2O 2 , were established for studying the ef fect of EGb and ECt on free radical
scavenging .T he result indicated that EGb and EC t had st rong free radical scavenging ac-
t ivity w hich increased w i th increasing o f their concentra tion.
Key words:Egb;Ect;lipid peroxidation;hydroxy radical
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