全 文 ：蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤的保护作用
周卫华 石慧娟 杨梅松竹 钟 飞 米长忠 (吉首大学医学院，湖南 吉首 416000)
〔摘 要〕 目的 研究蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤的保护作用，并初步探讨其可能的作用机制。方法 健康雄性 SD大鼠 40 只，随机分为
对照组、模型组和蛇菰水提物低、高剂量组;模型组和处理组组以酒精灌胃建立大鼠酒精性肝损伤模型，蛇菰水提物低、高剂量组分别给予蛇菰水提
物 1. 5，3. 0 g·kg －1·d －1进行预防治疗，10 d后处死全部大鼠，取血测血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT) ，肝匀浆测定超氧化物歧化酶
(SOD) ，谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量，肝脏常规切片染色，观察组织学改变。结果 蛇菰水提物低、高剂量组组大鼠血
清 ALT和 AST活性明显低于模型组，SOD和 GSH-Px活性较模型组升高，MDA含量下降，镜下病理显示蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤具有保护作
用。结论 蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤有显著保护作用。
〔关键词〕 蛇菰水提物;大鼠;酒精性肝损伤
〔中图分类号〕 R285. 5 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2012)20-4438-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2012. 20. 038
Protective effect of extract from Balanophora spicata Hayata on liver injury induced by alcohol in rat
ZHOU Wei-Hua，SHI Hui-Juan，YANG Mei-Song-Zhu，et al.
Medical College of Jishou University，Jishou 416000，Hunan，China
【Abstract】 Objective To investigate the protective effect of extract from Balanophora spicata Hayata on alcoholic fatty liver disease
in rat，and elucidate the possible mechanism. Methods 40 adult SD rats were randomly divided into normal group fed with physiological sa-
line，model group fed with alcohol，low and high dose of extract from Balanophora spicata Hayata groups fed with alcohol and extract from
Balanophora spicata Hayata (1. 5，3. 0 g·kg －1·d －1). After 10 days，the serum alanine aminotransferase (ALT) ，aspartate aminotrans-
ferase (AST)and the contents of malondialdehyde (MDA) ，glutathione perloxldase (GSH-Px) ，superoxide dismutase (SOD)in liver ho-
mogenate were detected，and the histological changes in liver were evaluated. Results Compared with the model group，extract from Balano-
phora spicata Hayata significantly decreased the serum transaminase levels and the content of MDA，enhanced SOD and GSH-Px levels in liv-
er homogenate. Histopathological observations were consistent with biochemical changes，suggesting marked protective effect of extract from
Balanophora spicata Hayata on acute liver injury in rat. Conclusions Extract from Balanophora spicata Hayata has an obviously protective
effect against liver injury induced by alcohol in rat.
【Key words】 Extract from Balanophora spicata Hayata;Rats;Alcoholic liver injury
基金项目:湖南省科技厅基金项目(2011FJ3202)
通讯作者:米长忠(1964-) ，男，高级实验师，主要从事中药资源的开发
与利用研究。
第一作者:周卫华(1978-) ，男，讲师，硕士，主要从事中药资源开发与利
用研究。
酒精滥用和由此导致的酒精依赖已成为现代社会严重的
公共卫生问题〔1〕，蛇菰科为双子叶多年生寄生肉质草本植物，
具有补肝益肾，止血生肌，调经活血，清热醒酒之功效〔2〕，广西
瑶族和黔南布依族民间有饭酒前服用蛇菰解酒的习俗。蛇菰
的解酒毒作用已经得到证实〔3〕，临床试用于肝炎和肝硬化有一
定疗效〔4〕。但蛇菰提取物对酒精性肝损伤的保护作用还未见
报道，本实验利用大鼠酒精性肝损伤模型，研究蛇菰提取物对
酒精诱导的肝损伤模型大鼠的保肝作用及其可能机制，为其开
发提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 雄性 Wistar 大鼠 40 只，体重 200 ～ 250 g，由湖南
斯莱克景达实验动物有限公司提供。蛇菰:购自吉首市益丰药
店，经吉首大学医学院药理学教研室鉴定。无水乙醇(国药集
团化学试剂公司) ;谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(20100827) ;谷草
转氨酶(AST)试剂盒(20100828) ;丙二醛(MDA)试剂盒(批号
20110616) ;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号 20110616) ;谷
胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒(20110615) ;BCA 蛋白浓
度测定试剂盒(20110905) ，均购自南京建成生物工程研究所。
1. 2 方法
1. 2. 1 蛇菰水提物的制备 蛇菰全草 50℃过夜干燥，粉碎过
60 目筛子，量取 50 g用蒸馏水 500 ml溶解，煎煮 1 h，过滤得浓
缩液，经旋转蒸发得其浸膏 12. 76 g，将其配置成 50 ml，相当于
每毫升含生药 1 g，实验时稀释至所需浓度。
1. 2. 2 实验分组与给药 40 只大鼠购回后适应性喂养 5 d，
将 40 只大鼠随机分为正常组、模型组、蛇菰水提物低剂量组和
高剂量组各 10 只。造模〔5〕共需 10 d，正常组:6. 0 ml /kg 生理
盐水灌胃，1 h后 50%葡萄糖 14 ml /kg灌胃;模型组:每天定时
以 6. 0 ml /kg生理盐水灌胃，1 h后二锅头 14 ml /kg灌胃;蛇菰
水提物组:蛇菰水提物低剂量组和高剂量组定时分别给予
1. 5 g /kg和 3 g /kg蛇菰水提物灌胃，1 h 后以二锅头 14 ml /kg
灌胃。
1. 2. 3 血清 ALT和 AST的活性测定 第 11 天，用 20%的乌
拉坦麻醉大鼠，摘眼球取血，3 500 r /min 离心 10 min，取上清，
按试剂盒说明书，测定血清 AST和 ALT活性。
·8344· 中国老年学杂志 2012 年 10 月第 32 卷
1. 2. 4 肝组织蛋白质、MDA、SOD、GSH-Px 含量及活性的测定
用 20%的乌拉坦麻醉大鼠，解剖取相同部位的肝组织冰浴研
磨 10 min，然后用玻璃匀浆器研磨 10 min，用冷生理盐水配制
成 10%肝匀浆液，4 000 r /min离心 10 min，取上清液，按试剂盒
说明书，测定肝组织蛋白质、MDA 含量和 SOD、GSH-Px 活性。
1. 2. 5 肝组织病理学检查 用 20%的乌拉坦麻醉大鼠，解剖
取其肝右中叶，10%的甲醛固定 24 h，常规脱水透明，石蜡包
埋，切片，片厚 5 μm，HE染色，光学显微镜观察结果并照相。
1. 3 实验数据分析 数据用 x ± s 表示，采用 SPSS16. 0 统计
软件进行方差分析和两两比较。
2 结 果
2. 1 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠血清 ALT 和 AST 的影
响 模型组大鼠血清 AST 和 ALT 活性显著高于正常组(P ＜
0. 01) ，而蛇菰水提物不同剂量组血清 AST和 ALT明显低于模
型组(P ＜ 0. 01) ，见表 1。
表 1 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠
血清 ALT和 AST的影响(x ± s，n =10)
组别 AST(U /L) ALT(IU /L)
正常组 65. 54 ± 12. 041) 58. 55 ± 11. 751)
模型组 164. 82 ± 31. 09 170. 59 ± 30. 75
蛇菰低剂量组 110. 76 ± 15. 221) 115. 32 ± 16. 781)
蛇菰高剂量组 90. 98 ± 26. 781) 85. 02 ± 27. 581)
与模型组比较:1)P ＜ 0. 01
2. 2 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠肝组织 SOD，GSH-Px活
性和 MDA含量的影响 与正常组相比，模型组的 SOD和 GSH-
Px活性显著降低(P ＜ 0. 01) ，MDA 含量显著升高(P ＜ 0. 01) ;
蛇菰水提物各剂量组的 SOD和 GSH-Px活性升高，与模型组差
异显著(P ＜ 0. 01) ，MDA 的含量降低与模型组差异显著(P ＜
0. 01) ，见表 2。
表 2 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠肝组织 SOD，
GSH-Px活性和MDA含量的影响(x ± s，n =10)
组别 SOD(U /mg) SH-Px(U /mg) MDA(nmol /mg)
正常组 27. 60 ± 4. 981) 44. 76 ± 7. 391) 9. 38 ± 1. 581)
模型组 12. 79 ± 1. 94 24. 56 ± 4. 76 19. 34 ± 3. 26
蛇菰低剂量组 17. 48 ± 3. 781) 32. 08 ± 4. 952) 15. 82 ± 2. 432)
蛇菰高剂量组 21. 38 ± 3. 581) 36. 12 ± 5. 641) 14. 83 ± 2. 722)
与模型组比较:1)P ＜ 0. 01，2)P ＜ 0. 05
2. 3 肝组织的病理学检查 大体解剖肉眼观察可见，正常组
大鼠肝脏呈红褐色，质地柔软，富有弹性。酒精性肝损伤组大
鼠肝脏体积增大，淤血明显，肝脏表面有少量点状出血。蛇菰
水提物组肝脏轻度肿大，比较接近正常组。显微镜观察如图 1
所示，正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞以中央静脉为中心
呈放射状排列，大小均匀，无变性、坏死等病理改变，肝索排列
整齐，无炎症细胞浸润;模型组大鼠肝小叶结构被破坏，肝索排
列紊乱，肝细胞呈大面积水肿变性，胞浆疏松透亮，部分肝细胞
脂肪变，汇管区有炎细胞浸润;蛇菰水提物处理组较模型组肝
细胞水肿和脂肪变程度明显减轻，炎细胞浸润程度也有所
减轻。
图 1 蛇菰水提物酒精性肝损伤大鼠
肝组织的影响(HE，×400)
3 讨 论
本研究证实大鼠酒精性肝损伤模型是成功的。经蛇菰水
体物干预后，大鼠肝组织脂肪变性和炎症浸润明显减轻，大鼠
血清 ALT、AST活性下降，表明蛇菰对酒精性肝损伤有显著的
保护作用。
乙醇经胃肠道吸收，约 90%在肝细胞内氧化代谢。乙醇代
谢产生大量有害自由基，包括 O －2 、H2O2、OH
－ 及 C2H5O
－ 和
C2H5OH
－〔6〕;机体抗氧化能力不足以应付自由基的积累，氧化
应激便发生在肝脏中，氧化应激在肝功能损害中发挥重要作
用〔7〕。由此产生的自由基氧化生物膜脂质，破坏肝细胞膜及线
粒体膜的正常结构，最终导致细胞结构和功能的改变〔8〕。MDA
是脂质过氧化的产物，可作为反映机体组织或细胞受自由基攻
击和损伤的指标;GSH-Px和 SOD是体内主要的抗氧化的酶，其
活力的高低反映了机体清除自由基和抗氧化能力的高低。本
研究中模型组大鼠 MDA 含量显著升高，而 SOD 和 GSH-Px 活
性显著降低。而灌胃给予蛇菰可增强肝脏的 SOD 和 GSH-Px
活性，并降低其 MDA含量，其护肝作用可能是通过增强肝细胞
内清除自由基的酶的活性实现的。王慧等〔9，10〕研究表明，蛇菰
提取物具有较强的抗氧化活性;而蛇菰中含有三萜类、苯丙素
类、甾醇类、鞣质类、黄酮类及其苷类等多种化学成分，其中三
萜类、苯丙素类及黄酮类均具有抗氧化活性，但具体是哪一种
成分具有保肝作用，需要进一步研究。
4 参考文献
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〔2011-10-10 收稿 2011-12-31 修回〕
(编辑 曹梦园)
Apollon siRNA抑制肺癌细胞生长并提高放疗敏感性
李 立 陈建发1 (广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室，广东 湛江 524023)
〔摘 要〕 目的 调查与 Apollon小干扰 RNA(siRNA)并用是否可以提高人肺癌细胞放疗敏感性。方法 采用转染野生型及突变型 p53 基因
的两种非小细胞肺癌细胞株 H1299 /wtp53 及 H1299 /mp53，通过 siRNA 技术沉默癌细胞 Apollon 表达，并以实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测
Apollon基因表达。采用细胞克隆生成分析确定 Apollon沉默的抗癌效果及放疗增敏作用。结果 以 Apollon 为靶点的 siRNA转染细胞后，可观察到
Apollon基因表达抑制。Apollon siRNA可抑制癌细胞增殖并提高 H1299 细胞放疗敏感性。结论 在肺癌放疗中，Apollon siRNA可能是一个潜在的放
疗增敏剂候选者。
〔关键词〕 Apollon;小干扰 RNA;放疗敏感性;肺癌
〔中图分类号〕 R73-3 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2012)20-4440-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2012. 20. 039
1 解放军 422 医院普外科
第一作者:李 立(1969-) ，男，博士，副研究员，主要从事肿瘤分子病理
及天然药物研究。
有关肺癌发生发展分子机制的研究虽然已取得显著进展，
但肺癌的治疗效果仍不令人满意〔1〕。如非小细胞肺癌
(NSCLC) ，其对放疗的反应率低下，5 年生存率仅 7% ～
10%〔1〕。有两个原因限制了 NSCLC 放疗效果:肿瘤的放疗抗
性及放疗对正常组织的毒性。NSCLC 产生放疗抗性的机制仍
不明了，虽然一些研究显示可能与 p53 突变、survivin 过表达有
关〔2〕。目前，在肺癌的治疗中还未出现与放疗并用的分子靶向
治疗，因此，有必要鉴定与放疗抗性有关的基因，以便寻找新药
并提高放疗敏感性。本研究采用 siRNA技术，体外沉默 NSCLC
细胞内细胞凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员 Apollon的基因表达，
检测 NSCLC细胞对放疗敏感性的变化，并探讨 Apollon 作为癌
症治疗靶点的可能性。
1 材料与方法
1. 1 细胞培养 NSCLC细胞株为转染野生型及突变型 p53 基
因的 H1299 /wtp53 及 H1299 /mp53，由日本东北大学加龄医学
研究所医用细胞资源中心提供，于含 10%新生牛血清(FBS，
HyClone)的 RMPI 1640 培养液(Sigma)内，在 37℃、含 5% CO2
的饱和湿度空气中培养。
1. 2 siRNA 转染 播种 H1299 /wtp53 或 H1299 /mp53 细胞
5 × 105个于直径 10 cm 的培养皿内，将培养液调至 8 ml，培养
24 h。712 μl 的 Opti-MEMI medium (GIBCO)与 8 μl
100 μmol /L的 Apollon siRNA (正义链 5 -CAG ACC AGU GCA
AGA UCA G -3，反义链 5 -CUG AUC UUG CAC UGG UCU G-
3;Thermo)混匀，设为 A 液;64 μl 的 Opti-MEMI medium 与
16 μl的 Oligofectamine (Invitrogen)混匀，设为 B 液;A、B 液混
匀，室温孵育 15 ～ 20 min。弃除培养液，将 3. 2 ml的 Opti-MEMI
medium及 A、B 液的混合液加入培养皿，Apollon siRNA 的最终
浓度则为 200 nmol /L。4 h培养后，添加 1 ml 的新生牛血清于
培养皿内，37℃、5 %CO2 的条件下培养 24 h，取部分细胞抽提
RNA用于 RT-PCR分析，剩余细胞则用于后续实验。对照 siR-
NA (Thermo)转染方法同上。
1. 3 RNA 提取及 RT-PCR 总 RNA 提取采用 TRIZOL (In-
vitrogen)试剂，并按试剂所付操作指南操作。每 1 × 106 ～ 3 ×
106 个细胞加 TRIZOL 1 ml，裂解细胞、室温孵化;以每 1 ml TR-
IZOL 加 0. 2 ml 的 比 例 添 加 CIAA (Chloroform:Isoamyl
alcohol = 24∶ 1) (Wako) ，混匀、室温孵化;离心，将水层部分移
入新的微离心管内，以 1 ml TRIZOL 加 0. 5 ml IP (2-Propanol)
(Wako)的比例添加 IP(Isopropyl alcohol，Wako) ，混匀、室温孵
化;离心，除去上清;以 1 ml TRIZOL加 1 ml 75% 乙醇的比例添
加 75%乙醇，离心，除去上清、干燥;加适当 diethylpyrocarbonate
(DEPC)水溶解。取总 RNA 500 ng，用于 cDNA的合成。Dnase
Ⅰ处理后，应用逆转录试剂(Invitrogen)在 20 μl的反应体系中，
按试剂所附操作指南进行逆转录反应。反应后，添加 30 μl 蒸
馏水，使被合成的 cDNA总体积为 50 μl，用于确定 Apollon基因
表达的 RT-PCR分析。
取蒸馏水将 7. 5 μl的 2 × Quantitect SYBR Green PCR Mas-
ter Mix (QIAGEN)、各 1 μl 的 Apollon 正反引物(正义链 5 -
CGT TGT GAT TAA TGC CGA ACT TG -3及反义链 5 - GGT
CTA GCC CTT GCA ATT TCT CA -3) (10 μmol /L)及 1 μl cD-
NA调整到 15 μl，采用 iCycler (Bio-Rad)进行 PCR 反应，并以
β-actin引物(正义链 5 -GCC AAC CGC GAG AAG ATG A -3
·0444· 中国老年学杂志 2012 年 10 月第 32 卷