全 文 ：华南农业大学学报 0 2 () 4 1望刀 : 15 2一 16 2
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不同温度对毛鱼藤和西非灰毛豆愈伤组织生长的影响 `
谷文祥` 曾鑫年 2谢建军 2
( 1华南农业 大学理学院 ,广州 , 51 仅抖2 ; 2 华南农业大学资源环境学院 )
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关键词 温度 ; 毛鱼藤 ; 西非灰毛豆 ; 愈伤组织
K e y wo 心 et l n ep ar uetr ; eD二 el itP ic a ( R汕 . ) eB n ht . ; 孙入阳 s记 优诊e il Ho k . f . ; c ial中图分类号 Q34 3 . 6
鱼藤酮是著名的选择性植物源杀虫剂 , 对防治果树 、 蔬菜 、茶叶 、花卉及粮食作物上的数百种害虫具有良
好的效果 , 特别是近年来在防治抗性害虫【如小菜蛾 月以 e肠 勺么血山 ( L )] 上发挥了重要作用 (莫美华 , 1卯 1 ;
赵善欢 , 1988) . 研究表明 , 鱼藤酮具有触杀 、 胃毒 、拒食和熏蒸作用 , 其杀虫谱广 , 作用方式多样 ,对哺乳动物低
毒 , 对害虫天敌和农作物安全 , 是综合治理上较为理想的杀虫剂之一 (赵善欢 , 195 ;2 张业光 , 19以) ) . 然而由于
其分子结构复杂 , 难以人工合成 , 目前主要从天然植物资源中提取 , 受到资源 、 地区和成本的限制 , 难以满足 日
益增长的需要和获得推广应用 . 应用植物细胞大量培养技术获得人们所需要 的活性物质国内外已有许多成
功的先例 (倪德祥 , 198 ;8 王 蜀秀等 , 1卯 5 ) . 本文研究了不 同温度对 2 种植物体— 毛鱼藤 〔石坛斤众 成神如
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. 」和西非灰毛豆 (孙户如`她 1柳鹦之“ Hok . f . )离体培养细胞生长的影响 , 以期找出最佳生长所需的
培养温度 ,探讨含鱼藤酮植物细胞培养的优 良条件 , 为进一步开展大量培养 , 获得高产量的次生代谢物— 鱼藤酮 ,提供可靠的参考数据 .
1 材料与方法
1
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1 愈伤组织和培养基
毛鱼藤和西非灰毛豆叶片均采 自华南农业大学昆虫毒理实验室杀虫植物标本园 . 经叶片诱导获得愈伤
组织 ,选择转接代数相同 , 生长整齐一致的愈伤组织作为转接材料 . 培养基为 MS 基本培养基 ( M~ hi ge et 己
,
196 2 )
, 添加 夕 = 30 岁L 蔗糖 , 尸二 8 岁 L 琼脂 , 尸= 2 1玛犷L Z , -4 D , 尸 = 0 . 5 n l留L -6 B A ,声 值为 5 . 8 .
1
.
2 培养条件
在装有培养基 25 mL 的 50 吐 三角瓶中 , 每瓶接人叶片大小 0 . 5 C甘 进行诱导试验 . 放人 20 、 25 、 so 、 35 ℃
的光照培养箱中培养 , 每个温度处理每种 25 瓶 . 另每瓶接人鲜质量 0 . 3 9 的愈伤组织 , 每个温度处理每种 25
瓶进行培养 . 其它条件一致 : 光 / 暗 二 12 / 1 ;2 光强约 2 《XX) h ;相对湿度 80 % .
1
.
3 取样
叶片诱导试验 so d 后观察愈伤组织的诱导情况 ,统计诱导率 . 愈伤组织的生长试验接种后每隔 s d 取 1
次样 ,每次取 5 瓶 , 称取鲜质量 ,然后放人干燥箱内控温 45 ℃以下烘干 , 称量干质量 ;减去最初接人量 ,计算出
19更) 一 以 一 13 收稿 谷文祥 , 男 , 45 岁 , 副教授 , 硕士
* 国家自然科学基金 ( 2肠 720 11) 和广东省 自然科学塞金 ( 97 仪 )2 7 )资助项 目
1 2 6华 南 农 业 大 学 学 报 第 2 0卷
增长的鲜质量和干质量 以及生长指数 .生长指数为 :(最后干质量 一 最初接人质量 ) /最初接人质量 .
2结果分析
2
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1不同温度对毛鱼藤和西非灰毛豆叶片诱导愈伤组织的影响
0 3 d后统计这 2种植物叶片外植体愈伤组织的诱导率 , 30 ℃的温度诱导率最高为 10 % ,诱导整齐一致 ;
25 ℃的较高 ,其中毛鱼藤为 84 % , 西非灰毛豆 为 92 % , 没有诱导 出愈伤组织 的外植体也为绿色 , 卷曲变大 ;
35 ℃时诱导率低 , 毛鱼藤为 16 % , 西非灰毛豆为 28 % ,而其余的外植体都变黄 、 死亡 ; 20 ℃时外植体都未诱导
出愈伤组织 , 但保持绿色 , 叶片稍微卷曲 .
2
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2 不同温度对毛鱼藤愈伤组织生长的影响
取样测定方法 同 1 . 3 , 第 25 d 后结果显示 : 30 ℃时 , 毛鱼藤愈伤组织生长最快 , 生物量积累最多 , 净增长干
质量为每瓶 1肠 . 3 gm ;其次为 35 ℃ ,净增长干质量为每瓶 94 . 4 ngr ;而 20 ℃时生长最慢 , 净增长干质量为每瓶
68
.
4 mg
. 同时观察各种温度下的生长曲线可 以发现 : 每种温度下 的生长基本符合 “ s ” 曲线 , 在第 or d 时进人
对数生长期 . 但在实验中发现 , 35 ℃温度培养下 , 愈伤组织从第 10 d 起有个别出现褐变死亡现象 .
2
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3 不同温度对西非灰毛豆愈伤组织生长的影响
第 25 d 后 的测定结果显示 :西非灰毛豆愈伤组织在 so ℃ 时生长最快 , 生物量积累最多 , 净增长干质量为
每瓶 153 . l ngz ; 25 ℃时生长相对较慢 ,净增长干质量为每瓶 110 . 5 gm ;而 20 ℃时生长最慢 , 生物量积累最少 ,
净增长干质量为每瓶 70 . 8 m g . 同时观察发现 :在 35 ℃温度培养条件下 , 从第 10 d 起愈伤组织 开始出现褐变
死亡现象 . 25 d 后 , 所有的愈伤组织死亡 ;各种温度下的生长曲线也基本符合 “ S’ 曲线 , 在第 s d 时进人对数生
长期 .
3 讨论
前人的研究表明 , 不同的植物离体培养所需要的最适温度不尽相同 , 番茄离体培养所需最适温度是 28
℃ , 烟草离体振荡培养中 31 ℃ 生长量最大 , 石刁柏离体培养所需最适温度为 26 ℃ ,而文竹离体培养所需最适
温度为 17 ℃ (裘文达 , 1 986) . 本文结果表明 , 在其它培养条件相同的情况下 , 毛鱼藤和西非灰毛豆的外植体和
愈伤组织均在 so ℃时 , 可获得较好的诱导效果和较多的累积生物量 . 这可能与这 2 种植物的地理分布有关 ,
毛鱼藤和西非灰毛豆均生 长在热带和 亚热带 (中国科学院中国植物志编辑委员会 , 1性珍4 ) , 生长环境中外界气
温较高 , 因而可能与培养时细胞生长的适宜温度有一定的相关性 . 不同温度下生物量与次生代谢物的含量的
关系 ,将做更进一步的研究 . 本文的结论是 :在 ( so 士 l) ℃ 的温度条件下 , 这 2 种植物离体培养可获得较高的
愈伤组织诱导率和较多的生物积累量 .
参 考 文 献
王 蜀秀 ,温远影 , 胡昌序 . 19 5 . 我国利用植物细胞和组织培养产生药用成分的研究概况 . 植物学通报 , 12
( 1 )
:
33
一
37
中国科学院中国植物志编辑委员会 . 19 4 . 中国植物志 (第四十卷 ) . 北京 :科学出版社 , 191 一 225
赵善欢 . 19 52 .华南鱼藤的分析及毒力试验 . 昆虫学报 , 2( 1 ) : 1 一 18
赵善欢 198 .安全高效的鱼藤杀虫剂 .植物保护 , 14( l ) : 4 一 45
张业光 . 19叭) .非洲 山毛豆提取物对菜青虫生物活性及其有效成分的研究 : [学位论文〕 .广州 : 华南农业大
学资源环境学院
莫美华 . 19 1 .鱼藤混剂对果蔬害虫的应用及机理的研究 : 【学位论文」. 广州 :华南农业大学资源环境学院
倪德祥译 . 198 .植物次生代谢物的工业生产 . 国外作物组织培养 , ( 21 ) : 37 一 47
裘文达 . 1986 . 园艺植物组织培养 .上海 :上海科学技术出版社 , 24 一 26
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【责任编辑 张 砺 ]
第 20 卷卷终