全 文 ：参 考 文 献
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(2003-10-08收稿)
Effects of Hops on Ovariectomized Obese Rats
Wang Jiangbi1 , Luo Rong 1 , Tian Xuesong1 , Ding Yonghui2 , Qu Songyi1 , Li Wei1 , Zheng Tianzhen1
(1.Lanzhou Medical College , Lanzhou 730000;2.Gansu Province D rug Administration , Lanzhou 730030)
Abstract　Objective:To investiga te the effects of hops on obesity in ovariectomy rats.Mehtods:After ablating bilateral ovari-
an , adult Sprague-Dawley rats were drinken water ex tracts of hops and its effects on body weight were observed.On the seventh
w eekend , blood w as collected to assay serum free fa t acid(FFA), total anti-oxidative capacity(T-AOC), malondialdehyde(MDA), e-
strogen , testosterone and insulin.Results:Compared with SHAM group , ra ts in OVX group displayed the higher weight , serum
FFA , MDA and levels of insulin , lower serum levels of estrogen and testosterone and T-AOC.After drinken water ex tracts of hops ,
compared w ith OVX group , ra ts in OVX+hops g roup had lower weight , serum FFA , MDA , levels of insulin and higher serum T-
AOC.Conclusion:Hops could promo te weight loss in OVX rats.Hops maybe have estrog en activity.I t can increase sensibitity of in-
sulin and elevate anti-oxidative capacity.
Key words　 Hops;Ovariectomized;Obesity;Estrogen;Insulin;Total anti-oxidative capacity
千金藤素抗单纯疱疹病毒 Ⅰ型(HSV-1)初探
刘新建　王一飞＊　张美英　李贵生　岑颖洲
(暨南大学 ,广州 510632)
　　摘要　目的:体外测定千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用 ,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法:用
不同稀释度的千金藤素抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型对 Vero 细胞的感染作用 , 48 h 后观察细胞病变(CPE)效应。结果:
千金藤素能明显抑制 HSV-1对 Vero细胞的致病变作用 ,使细胞存活率升高。结论:千金藤素有较显著的抗 HSV-1
的作用 ,且抗病毒作用是多方面的 , 是一种具有潜在开发前景的药物。
关键词　千金藤素　HSV-1　细胞病变
　　治疗病毒病的药物现在主要有磺苷 、三氟胸腺
嘧啶 、环胞苷 、无环鸟苷等 ,均能取得一定的疗效 ,但
是这些药物经过多年的临床使用 ,部分病例已产生
耐药性 。寻找有效 、耐药的药物是治疗病毒病的一
项迫在眉睫的任务。我国中草药资源广泛 ,中草药
抗病毒筛选是一项很有意义的工作 。
千金藤素(cepharanthine)系双苄基异喹啉类生
物碱 , 从 防 己 科 千 金 藤 S tephania japonica
(Thunb.)Miers中提取而得。近年来 ,我国发现一
些双苄基异喹啉类生物碱对大鼠实验性肺矽具有明
显的疗效〔1〕 。国外研究发现该类生物碱中有许多
具有较强的抗炎〔2、3〕、抗病毒〔4〕、抗溶血〔5 、6〕 、抗肿
瘤〔7〕作用 ,能刺激网状内皮系统 ,活化造血组织 ,促
进骨髓增生 ,预防大鼠因放射性损伤而引起的白细
胞减少症〔8 、9〕 。本文研究了千金藤素体外抗单纯疱
疹病毒 1型的效果 。
·107·中药材第 27 卷第 2 期 2004 年 2 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.02.018
1 　材料
病毒和细胞株:HSV-1(单纯疱疹病毒 1型)毒
株和 Vero 细胞均由本室保存。细胞用含 10%小牛
血清(杭州四季青)的 DMEM(Hyclone)培养基连续
传代 3 次保持对数生长期供实验用。维持液为含
2%小牛血清的 DMEM 培养基 。药物:千金藤素 ,
用少量盐酸溶解 ,配成盐溶液 。阳性对照药无环鸟
苷(ACV)为湖北科益药业股份有限公司产品 。临
用前用 DMEM 维持液稀释。
2 　方法
2.1 　病毒滴度测定　将病毒悬液作连续 10 倍稀
释 ,常规方法感染单层 Vero细胞 , 37℃、5%/CO2 培
养 3 天 , 观察细胞病变(CPE)情况 , 按 Reed-
Muench〔10〕方法计算 TCID50 。
2.2 　细胞毒性测定　长成单层的 Vero 细胞用含
不同浓度药物的培养液孵育 48 h 后 ,采用 MTT
法〔11〕测定细胞活性。LC50综合计算法〔12〕确定药物
的半毒性致死剂量(CC50)。
2.3 　千金藤素抗病毒作用
2.3.1 　对细胞的保护作用:以不同浓度千金藤素
加到单层 Vero 细胞孔中 ,培养 2 h 后弃药液 ,接种
100 TCID50HSV-1病毒液 , 37℃吸附 1 h ,弃病毒液
换维持液 0.1 ml/孔 ,继续培养 48 h ,观察药物处理
后的细胞对HSV-1感染的影响 。同时做 ACV 阳性
对照 、单用病毒感染时的病毒对照 、正常细胞对照 ,
实验重复 3次。下同 。
2.3.2 　对 HSV-1的直接杀伤作用:含不同浓度千
金藤素的维持液与等量病毒液混合后 ,置 37℃作用
2 h 后 ,将孵育液加入单层 Vero 细胞孔中 ,0.1 ml/
孔 ,37℃吸附1 h ,换上含相应浓度药物的维持液 ,继
续培养 48 h ,观察药物对 HSV-1的直接杀伤作用。
　表 1　　　不同浓度千金藤素作用 48 h的细胞活性
药物浓度(μg/ ml) 细胞活性( x±s)
细胞对照 0.598±0.027
0.13 0.568±0.020
0.25 0.518±0.025
0.50 0.525±0.008
1.00 0.513±0.017
2.00 0.528±0.018
4.00 0.477±0.034
8.00 0.429±0.019
16.00 0.156±0.009
2.3.3 　对 HSV-1增殖的影响:接种 100 TCID50的
HSV-1于单层 Vero 细胞上 , 37℃吸附 2 h ,换上含
相应浓度药物的维持液 ,继续培养48 h ,观察药物对
HSV-1增殖的影响。
2.3.4 　对 HSV-1感染细胞的综合作用:药物和病
毒等量混合后直接加到单层 Vero 细胞上 , 37℃吸附
2 h ,弃混合液加维持液 ,继续培养 48 h ,观察药物对
HSV-1感染细胞的综合作用。
3 　结果
3.1 　病毒滴度　本室保存的 HSV-1接种在 Vero
细胞上的滴度为 105.4/ml。实验用病毒浓度为 100
TCID50 。
3.2 　细胞毒性测定　不同浓度千金藤素对 Vero
细胞作用 48 h后 ,用 MTT 法测定细胞活性 。结果
显示如表 1。LC50综合计算法求得 CC50为 7.52 μg/
ml。
3.3 　药物抗病毒作用(见表 2)
3.3.1 　药物对病毒感染细胞的预防作用:不同浓
度药物事先与细胞作用 2 h后 ,接种病毒 ,药物对预
防 HSV-1感染的半数有效剂量为 1.56 μg/ml ,较现
有治疗 HSV-1药物无环鸟苷(200 μg/ml)作用强 。
3.3.2 　药物对病毒的直接杀伤作用:不同浓度药
物与病毒等量混合 2 h 后 , 在 3.13 μg/ml 时对
HSV-感染细胞有 75%以上的直接杀伤作用 ,较现
有治疗 HSV-1药物无环鸟苷(100 μg/ml)作用强 。
3.3.3 　药物对病毒感染细胞的治疗作用:药物在
3.13μg/ml可减轻HSV-1引起的CPE ,阳性对照组
效果好 。
3.3.4 　药物对病毒感染的综合作用:不同浓度药
物与病毒等量混合后直接加到单层细胞上 ,药物和
ACV在 3.13 μg/ml和 100 μg/ml时均能减轻感染
细胞的 CPE 程度 , 即降低 HSV-1 对 Vero 的感染
性 。
4 　讨论
　　千金藤素是从防己科千金藤属药用植物中提取
分离出来的 ,具有抗炎 、抑菌 、调节免疫功能等作用。
但作为一种抗病毒药研究较少 ,国外发现它有抗
HIV 的作用 , 30 μg/ml 时对 HIV 的抑制率为
95.8%,细胞存活率 85.8%〔13〕。本研究表明千金
藤素毒性较大 , 8 μg/ml以上对 Vero 细胞毒性明
显 。不过动物实验和临床用药表明〔14 ～ 16〕 ,药物在
动物体内毒性较低 ,且大剂量没有明显副作用。其
抗 HSV-1作用较无环鸟苷强 ,用药量少且作用是多
方面的 ,对病毒灭活 、感染预防 、治疗等都有明显作
用 。另外 ,千金藤素稳定〔17〕、耐药性强 ,是一种极具
前景的 、广谱的抗病毒药 ,值得深入研究。
·108· 中药材第 27 卷第 2期 2004 年 2 月
　　表 2 不同浓度千金藤素的抗病毒作用
浓度(μg/ ml)
直接杀伤作用
千金藤素 ACV
预防作用
千金藤素 ACV
综合作用
千金藤素 ACV
治疗作用
千金藤素 ACV
200 ND + ND ++ ND + ND ---
100 ND ++ ND +++ ND ++ ND ---
50 ND +++ ND ++++ ND +++ ND ---
25 ND ++++ ND ++++ ND ++++ ND +
12.5 ND ++++ ND ++++ ND ++++ ND +
6.25 ---- ++++ + ++++ ---- ++++ ++ ++
3.13 + ++++ + ++++ + ++++ ++ +++
1.56 +++ ND ++ ND +++ ND +++ ND
0.78 +++ ND +++ ND ++++ ND ++++ ND
0.39 ++++ ND ++++ ND ++++ ND ++++ ND
0.20 ++++ ND ++++ ND ++++ ND ++++ ND
　　HSV-1对照组:++++,细胞对照组:-
注:“ND”为没设的浓度;CPE等级:0～ 25%为+, 26%～ 50%为++, 51%～ 75%为+++, 76%～ 100%为++++
注:本文为广东省基金资助项目(编号 013203)
　　＊通信联系人
参 考 文 献
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(2003-09-08收稿)
Study on the Inhibitory Effect of Cepharanthine on Herpes Simplex
Type-1 Virus(HSV-1)in Vitro
Liu Xinjian , Wang Yifei , Zhang Meiying , Li Guisheng , Cen Ying zhou
(Jinan University , Guangzhou 510632)
Abstract　Objective:To assay the inhibitory effects of cepharanthine on HSV-1 in vitro.Mehtods:Vero cells were infected by
HSV-1 and cultured with serial dilutions of cepharanthine.The inhibitory effects of cepharanthine were evaluated with cy topathogenic
·109·中药材第 27 卷第 2 期 2004 年 2 月
effects(CPE).Results:The CPE of cells infected by HSV-1 were inhibited significantly , resulting in higher cell survival rates.Con-
clusion:The results show ed that cepharanthine had obvious HSV-1 inhibito ry efficacy.Therefo re, it may become a potential candi-
date in drug development and deserves further research on animal experiment and antiviral mechanisms.
Key words　Cepharanthine;HSV-1;CPE
不同分子链段的魔芋葡甘露聚糖对实验性
糖尿病小鼠血糖含量的影响
李春美　王元元　何　玮　谢笔钧
(华中农业大学食品科学技术学院 ,武汉 430070)
　　摘要　以四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠为实验模型 , 研究了不同分子链段的魔芋葡甘露聚糖 KGM-Ⅰ , KGM-Ⅱ ,
KGM-Ⅲ和魔芋精粉的降血糖效果。结果显示 , 当灌胃剂量为 1.5 g/ kg 时 , 小鼠血糖下降率分别为 55.37%,
80.60%, 33.44%和 40.9%,以 KGM-Ⅱ的降糖效果最好。研究还显示 KGM-Ⅰ 、KGM-Ⅱ和魔芋精粉均可增强正
常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和由 DNFB 所致的迟发性变态反应 , 且 KGM-Ⅱ的效果显著强于 KGM-Ⅰ和魔芋
精粉。
关键词　魔芋葡甘露聚糖　不同分子链段　降血糖
　　魔芋葡甘露聚糖(KGM)是从魔芋块茎中提取
的多糖 ,研究表明它具有提高机体免疫能力 , 降血
脂 ,降血糖 ,减肥 ,抗衰老等多种生理功效〔1 、2〕 。但
由于魔芋葡甘露聚糖具有很高的分子量(200 , 000
Da～ 2 ,000 ,000 Da)和粘度 ,对它的生物活性会有一
些负面影响 ,如吸收率低 ,影响其它营养素的吸收
等。此外 ,还发现人食用魔芋后会有一些不适反应 ,
如腹胀 、腹泻和腹痛等。据报道 ,多糖的生物活性与
其分子量有重要联系 。目前 ,国内外对魔芋葡甘露
聚糖和寡糖生物活性的研究有不少的文献报道 ,但
对分子量在这两者之间的多糖片段的研究却鲜见文
献报道 。本文通过酶解制得相对分子量 30000 ～
100000 Da的魔芋葡甘露聚糖 ,并对其降血糖和免
疫调节作用进行了初步研究。
1 　材料
1.1 　实验动物　昆明种雄性小鼠 ,清洁级动物 ,体
重 18 ～ 22 g ,由湖北省医学动物试验中心提供 。
1.2 　药物与试剂　魔芋精粉:武汉清城公司一级
品 ,葡甘露聚糖含量>90%;万达酶:武汉万达生物
工程有限公司产品;四氧嘧啶(Alloxan), Sigma公司
产品;2 ,4-二硝基氟苯(DNFB),上海试剂一厂产品;
吉氏染色剂(Giemsa Stain),上海试剂三厂产品;血
糖液体试剂盒 ,北京中生生物工程高技术公司产品 。
2 　方法
2.1 　不同分子链段的葡甘露聚糖的制备　取一定
量的魔芋精粉溶胀 ,加 0.03%的酶在 50℃水浴中酶
解 45 min , 100℃灭酶活 10 min;然后离心 ,取上清
液超滤分级 ,得到分子量为小于 3万 、3万～ 8万 、大
于 8万的三部分粗品分别记为 KGM-Ⅲ , KGM-Ⅱ和
KGM-Ⅰ ;然后将 KGM-Ⅰ和 KGM-Ⅱ粗品经如下工
艺分别纯化:KGM-Ⅰ和 KGM-Ⅱ粗品※脱糖 ※脱
脂※Sevag 法脱蛋白 ※透析—浓缩※40%, 60%和
80%乙醇分步沉淀※真空冷冻干燥得 KGM-Ⅰ和
KGM-Ⅱ 。
2.2 　魔芋葡甘露聚糖对四氧嘧啶诱导型糖尿病小
鼠的治疗作用　昆明种小鼠 100只 ,随机选择 8只
作为正常对照组 ,其余 92只禁食 24 h(不禁水 ,其余
同)后 ,经腹腔注射(ip)Alloxan 200 mg/kg 。72 h后
测定空腹血糖浓度 ,选择血糖浓度大于 18 mmol/L
的小鼠用于试验〔3〕。将已造模并经筛选的小鼠随
机分为 7 组:魔芋精粉组 , KGM-Ⅰ组 , KGM-Ⅱ高 、
低剂量组 ,KGM-Ⅲ组 ,模型组和消渴丸组 。糖尿病
模型组和正常对照组分别灌胃给予等量生理盐水 ,
其余组按表 1剂量灌胃给予相应药液 ,每日灌胃一
次 ,连续给药 6 d。末次给药后禁食 12 h ,摘眼球取
血 ,用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度 。并在实验过
程中观察动物的进食 、饮水 、活动 、皮毛光泽等的变
化情况 。
2.3 　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
2.3.1 　鸡红细胞(CRBC)悬液制备:无菌注射器自
·110· 中药材第 27 卷第 2期 2004 年 2 月