全 文 ：朱砂莲提取物(A1015)对 D-氨基半乳糖胺
肝损伤模型小鼠 DNA合成作用的影响
刘碧崇　强文安1　王浴生1
(四川抗菌素工业研究所生物技术室 , 成都　610051)
中国图书分类号　R-332;R 282.71;R 322.47;R 342.3;R
575.053
文献标识码　A　文章编号　1001-1978(2002)04-0441-03
摘要　目的　研究朱砂莲提取物(A1015)对 D-氨基半乳糖胺
(D-Gl)肝损伤模型小鼠 DNA 合成作用的影响。方法　采
用 D-Gl造模 , 3H-TdR参入法测定小鼠肝细胞 DNA 合成 ,
并与肝细胞再生因子进行比较。观察了 A1015的剂量曲线和
时间曲线。结果和结论　朱砂莲提取物(A1015)抵抗 D-Gl
造成的肝组织坏死和促进肝脏细胞 DNA合成作用的最适剂
量为 2.5 mg·kg-1体重。 试验还提示 A1015的抗肝中毒作用
2001-12-26收稿 , 2002-03-06修回
1 华西医科大学基础部药理学教研室 ,成都　610041
作者简介:刘碧崇 ,女 , 37岁 , 副研究员 ,博士。 研究方向:微生物药
物与中药研究。 Tel:028-4378040 , Fax:028-4333218 , E-
mail:huanggen@mail.sc.cninfo.net;
王浴生 ,男 , 81岁 ,教授 ,博士生导师。 研究方向:抗生素
与中药药理
不强于肝细胞再生因子。
关键词　朱砂莲提取物(A 1015);D-氨基半乳糖胺(D-Gl);
HGF;DNA , 3H-TdR参入;CPM;DPM
　　中药朱砂莲(aristolochia tuberosa CF liang et
SM huang)为马兜铃科植物 ,民间用于治疗喉痛 、肚
痛 、蛇伤 、肺痨[ 1] 。但有关朱砂莲的保肝作用尚未
见报道 。众所周知 ,四氯化碳(CCl4)肝中毒模型和
D-半乳糖胺(D-Gl)肝中毒模型均为研究筛选天然
保肝药物的两大经典动物模型。前文研究了朱砂莲
提取物(A1015)对小鼠四氯化碳肝中毒后血清转氨
酶(SGPT)升高的降低作用[ 2] ,本文研究朱砂莲提
取物(A1015)对 D-Gl肝中毒后小鼠肝细胞 DNA 合
成的作用情况 , 以期能进一步分析朱砂莲提取物
(A1015)保肝作用的机制 。
Effect of glycyrrhizin on CCl4-induced liver cirrhosis and bone loss in mice
ZOU Li-Yi , WU Tie ,CUI Liao
(Dept of Pharmacology , Guangdong Medical Col lege , Zhanj iang　524023)
ABSTRACT　AIM　To study the relationship be-
tween hepat ic fibrosis and osteoporosis and to deter-
mine the preventive effects of Glycy rrhizin on bone
loss in mice.METHOD　Forty PCR Mice w ere ran-
domly divided into 4 groups.Group A mice w ere con-
trols;G roup B mice w ere given sc injection of 40%
CCl4 10 ml·kg-1 once per 5 days as fibrosis model
g roup;Group C w ere given orally colchicine of 0.01
mg·kg-1 plus CCl4 sc , Group D were given Gly-
cy rrhizin(GL)of 100 mg·kg-1 orally plus CCl4 sc.
The four g roups w ere t reated for 42 days.The liver
injury indexes w ere measured and the mineral ele-
ments and Hydroxyproline of the femur were deter-
mined.RESULT 　Compared wi th group A , the
serum enzymes of alanine aminot ransferase (ALT),
aspartic acid aminotransferase (AST)were markedly
increased and serum albumin (Alb)and A/G(Alb/
(total protein-Alb)were decreased significant ly in
g roup B whose liver slides also showed typical liver
cirrhosis.The dried weight of femur in the cirrhosis
mice was markedly reduced and the bone Calcium
content and bone Hydroxyproline content w ere also
significantly decreased in group B.Bone copper and
bone magnesium were increased in g roup B.In g roup
D , GL inhibited markedly the decrease of the serum
enzymes and increased Calcium content and Hydrox-
yproline content of the bone compared w ith g roup B.
The bone mass loss w as prevented ef fectively by Gly-
cy rrhizin.CONCLUSION　The bone mass w as lost
in mice with chronic hepatic injury induced by CCl4
and Glycy rrhizin can prevent bone loss w hich w as ac-
companied by chronic hepatic injury in mice.
KEY WORDS　cirrhosis;osteoporosis;Glycyrrhizin;
mice
　
·441·中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin 　2002 Aug;18(4):441～ 3
1　材料与方法
1.1　药品和试剂　朱砂莲由四川省中药材公司购
得 ,朱砂莲提取物(A1015)由本实验室自制 , A1015的
组成成分为朱砂莲素 、朱砂莲苷及其衍生物。批号:
920517 ,临用前用蒸馏水配制 。
D-氨基半乳糖胺(D-GL):购自重庆医科大学 ,
批号:880922 , 临用前用无菌生理盐水配成 20 g·
L-1 ,用 1 ml·L -1的 NaOH 调 pH 至 6.8;肝细胞生
长因子(HGF):针剂 ,每 2 m l 60 mg ,由四川生物工
程研究所提供 ,批号:920428;HClO4:分析纯 , 天津
市东方化工厂产品 ,批号:920411;H2O2:分析纯 ,上
海桃浦化工厂产品 ,批号 910308;正辛醇(AR),上
海化学化剂厂产品 ,批号 910519;二甲苯(AR),西
安化学试剂厂产品 ,批号 910922;PPO:Puriss , Call-
Roth进口分装 ,上海化学试剂分装厂 ,批号 851107;
POPOP:上海化学试剂一厂产品 ,批号:890801;Tri-
ton X-100:分析纯 ,Rohm-Maas进口分装 ,上海化学
试剂厂产品 ,批号:880713。闪烁液配方:PPO 5 g ,
POPOP 0.5 g ,溶于 700 mg 二甲苯中 ,加入 300 ml
Tri ton-100;3H-TdR:放射经纬度 1498.5 TBq·
mol-1 ,上海原子能所产品 ,批号:920328。
1.2　动物　NIH 小鼠 ,18 ～ 22 g , ♀♂各半 ,购自四
川抗菌素工业研究所动物房 ,川试动管第 66号。
1.3　实验方法　参照李仪奎主编中药药理实验方
法学———中药抗肝损伤作用的实验方法[ 3] 及张银
娣等[ 4 ,5]的方法 ,略作改进。下述所有的实验均重
复 3次。
1.3.1　不同剂量 A1015对 D-Gl肝损伤模型小鼠
DNA合成作用的影响　取健康 N IH 小鼠 60只 , ♀
♂各半 ,体重 18 ～ 22 g ,随机分正常对照组(10只)
和肝损伤组(50只),肝损伤模型以 D-Gl 400 mg·
kg
-1体重腹腔(ip)一次注射 , 4 h 后将肝损伤模型动
物随机分为 3 个 A1015治疗组(0.25 、2.5 、25 mg·
kg-1 ip), 1个肝细胞再生因子治疗组(30 mg·kg-1
ip)及 D-氨基半乳糖胺肝损伤模型对照组 ,各组均
每日治疗 1次连续给药5 d ,于试验结束前2 h ,给每
只小鼠腹腔注射3H-TdR 148 kBq/(10 mg)-1 ,试验
结束后处死小鼠 ,摘取肝组织并精确称取100 mg 肝
组织 2份 ,加入体积分数为 60%的 HClO4 0.2 ml ,
H2O2 0.4 ml , 正丁醇 1 滴于 75℃水浴中消化 45
min ,待冷却后取出 0.2 ml消化液加闪烁液 5 ml ,摇
匀后放置过夜 ,在 FS-2105液体闪烁测定仪上测定
其放射性。CPM 记数并以道比法校正为 DPM(1
DPM=1
60
Bq ,即 1·s-1)。
1.3.2　不同给药次数 A1015对 D-Gl肝损伤模型小
鼠 DNA 合成作用的影响 　取健康 NIH 小鼠 144
只 , ♀♂各半 ,随机分为正常对照组(36只)和肝损
伤组(108只),肝损伤模型组按 D-Gl 400 ml·kg-1
体重 ip 1次注射 , 4 h后将肝损伤组随机分为 A1015
治疗组(2.5 mg·kg-1 ip),肝细胞再生因子(HGF)
治疗组(30 mg·kg-1 ip)和生理盐水(NS)对照组。
每天给药 1 次 ,于首次给药后 12 、24 、48 、72 、120 h
和 168 h分批处死小鼠 ,处死小鼠前 2 h ,每鼠腹腔
注射3H-TdR 148 kBq/(10 mg)-1 ,实验结束后取出
小鼠肝脏 ,同前去消化并测定放射性 。
1.3.3　数据处理　采用配对 t 检验法进行显著性
检验[ 6] 。
2　结果与讨论
2.1　不同剂量 A1015对 D-GL肝损伤模型小鼠DNA
合成作用的影响　实验结果见 Tab 1 。
Tab 1　The effect of different dose of A1015 on
DNA synthesis of D-GL induced mice hepatotoxicity
Group
Animals
(No)
Dose
/mg·kg -1
DPM
/100 mg liver
NS cont rol 10 23060±2173　
D-GL cont rol 10 400 18211±1892＊＊
A 1015 10 0.25 20357±2205
A 1015 10 2.5 27492±1763◎◎＊＊
A 1015 10 25 20066±2137
HGF cont rol 10 30 22456±1996◎◎
　　NB:PNS/ group:◎◎P<0.01;＊＊P<0.01 vs NS cont rol
　　可见 ,与正常对照组相比 , D-GL 肝损伤组降低
了细胞3H-TdR的参入量(P <0.01)加入有关药物
(A1015和 HGF)后 , 3H-TdR的参入量开始回升 ,各治
疗组的 DPM 值都高于 D-Gl组的 DPM(P<0.01),
其中 A1015 2.5 mg·kg-1组的 DPM 值最高 ,它不仅
高于 D-Gl的 DPM 值 ,还高于正常对照组的 DPM
值(P<0.01),这说明朱砂莲提取物(A1015)在 2.5
mg·kg-1的情况下不仅使 D-GL 造成的肝损伤得到
修复 ,而且还促进了肝细胞的 DNA 合成 ,HGF 组的
DPM 与 NS 组 DPM 值相比差异无显著性。说明在
给药 5 d后 ,HGF 的肝保护作用低于 A1015 2.5 mg·
kg-1体重的肝保护作用。
2.2　不同给药时间朱砂莲提取物(A1015)对 D-GL
实验性肝损伤模型小鼠 DNA合成的影响　实验结
果见 Tab 2。
　　从 Tab 2可以看到 , D-Gl肝损伤组的 DPM 值
显著低于正常对照组 ,说明造模成功 。朱砂莲提取
物(A1015)在给药的 12 、48 、72 、120 、168 h ,其肝脏参
·442· 中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin 　2002 Aug;18(4)
Tab 2　The time course of A1015 on DNA synthesi s of D-GL induced mice hepatotoxicity
Group n
Dose
/mg·kg -1
DPM/ 100 mg liver tissue
12 h 24 h 48 h 72 h 120 h 168 h
NS 6 29179±3225　 29695±3225　 27506±3291　 25869±2040　 24703±2120　 26489±3739　
D-GL 6 400 26922±1659 21542±1994＊ 21460±2281＊ 21171±1643＊ 21863±2548＊ 22918±1821
A 1015 6 2.5 2706±1492 26133±1916◎ 28446±3484◎ 29052±2252＊◎ 27675±2851◎◎ 24949±2972
HGF 6 30 29189±1631＊◎ 30988±2367◎◎ 36520±1608◎◎ 27518±1014◎ 26381±2550◎ 25880±2165
　　NB:PNS/ group:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 vs NS;PD-GL/ group:◎P<0.05 , ◎◎P<0.01 vs NS
入3H-TdR量表现出时间效应 ,给药后 ,随着时间延
长和给药次数的增加 ,各组的 3H-TdR参入量亦逐
渐恢复正常 ,其 DPM 与正常组无统计学差异 ,但给
药时间达到 72 h 时 , 3H-TdR参入量远高于正常组
的DPM 值 ,说明在 72 ～ 120 h 之内 , A1015有促肝再
生作用。HGF 组亦有时间效应 ,但 HGF 组的 DPM
值在 48 h 即达到高峰 ,其 DPM 值与正常对照组
DPM 相比差异有显著性(P<0.01),HGF 亦不但能
抵抗 D-G L 造成的肝衰竭和肝坏死 ,使其3H-TdR
参入量升高 ,且还有明显的促肝细胞 DNA 合成的
作用 ,其最高峰的3H-TdR参入量大于朱砂莲提取
物(A1015)72 h时的参入量 。
总之 ,HGF 与 A1015都能抵抗 D-Gl损伤 , 且有
促肝再生作用 。但 A1015的使用浓度远低于 HGF ,
仅为HGF 的 1/12 ,且制作成本较低。考虑到 A1015
还有抵抗四氯化碳所致的肝损伤作用 ,A1015又有镇
痛作用[ 7] ,故可以推测 ,A1015如能用于治疗肝病 ,应
该有效 。至于A1015抗肝损伤作用的详细机制 ,还有
待于深入研究[ 8] 。
参考文献
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药理实验方法学 , 上海:上海科技出版社 , 1993:60
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药学学报 , 1992;27(6):401～ 6
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肝 DNA合成的影响.药学学报 , 1984;19(8):619～ 21
6　刘昌孝 ,孙瑞元.药物评价实验设计与统计学基础.北京:科学
出版社 , 1995:15
7　刘碧崇 ,曲　光.朱砂莲提取物(A1015)的镇痛作用观察.中药药
理与临床 , 2002;18(3):13～ 4
8　赵冬梅 ,刘耕陶.肝细胞损伤机制进展的研究及其对研究治肝病
新药的启示.中国药理学通报 , 2001;17(6):605～ 9
The effect of A1015 on DNA synthesis of
D-galactosamine damaged mice hepatotoxicity
LIU Bi-Chong , QIANG Wen-An1 , WANG Yu-Seng1
(Sichuan Ind Ist of Antibiotics , 9 Shaban Qiao Rd , Chengdu　610051;1Dept of
Pharmacology , The Medical University of Western China , Chengdu 　610041)
ABSTRACT　AIM　To study the ef fect of A1015 on
D-galactosamine induced mice hepatotoxicity.
METHODS　The effect of three doses of A1015 on
DNA biosynthesis of D-galactosamine-induced mice
hepatotoxicity were tested.The time curve of A1015
on DNA synthesis of D-GL induced mice hepatotoxi-
ci ty was also observed.RESULTS　The experiments
demonstrated that 2.5 mg·kg -1 is the optimum dose
for A1015 to show liver-pro tective act ivity.The results
suggested that HGF can not only offset the hepato-
toxicity induced by D-GL , but also promote the DNA
synthesis of mice liver cells.And the highest DPM
value for HGF group is higher than that of A1015
g roup.Thus bo th HGF and A1015 showed ant i-hepa-
to toxic activity and promo ting activity on mice liver
cell DNA synthesis.CONCLUSION　A1015 may re-
duce liver necrosis induced by D-galactosamine and
promote the DNA synthesis of mice liver cells.
KEY WORDS　aristolochia tuberosa CF Liang et SM
huang;A1015;D-galactosamine (D-Gl);HGF;
DNA;3H-TdR uptakes;CPM ,DPM
　
·443·中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin 　2002 Aug;18(4)