全 文 ：木犀草素含量 ,结果以 18∶7配比的甲醇 -25%盐酸
水解测得总木犀草素的含量最高 ,见表 2。
表 2　酸浓度考查结果
甲醇 -25%盐酸比 测得总木犀草素含量(mg/g)
24∶1 0.241 7
22∶3 0.252 4
20∶5 0.281 3
18∶7 0.305 9
2.2.3　水解时间考查 　按 “ 2.2.1”项下方法制备
70%乙醇提取物 ,加入甲醇 -25%盐酸(18∶7)25 ml,
分别经 0.5、1、2、3、3.5、4和 4.5 h的 90 ℃水浴回流 ,
放冷 , 2mol/LNaOH调至 pH3 ～ 4,转移至 50ml量瓶
定容 ,按 “2.1.1”项下色谱条件测定木犀草素含量 ,结
果经 3.5 h水解测得总木犀草素的含量最高 。见表 3。
表 3　水解时间考查
水解时间(h) 测得总木犀草素含量(mg/g)
0.5 0.249 6
1.0 0.276 4
2.0 0.305 1
3.0 0.329 5
3.5 0.346 5
4.0 0.338 6
4.5 0.342 0
3　讨论
3.1　据文献[ 5]报道 ,蒲公英的黄酮类化合物多以苷的
形式存在 , 因此本实验采用酸水解法对蒲公英提取液
进行水解 ,测定并比较其水解前后木犀草素的含量。
3.2　通过全波长扫描 ,木犀草素的最大吸收波长为
280 nm和 350nm,本实验选取 350nm作为检测波长;
流动相中加入酸以抑制色谱峰拖尾 ,比较发现 ,磷酸和
醋酸均能得到较好的峰形 ,为延长色谱柱使用寿命 ,选
择了有机酸醋酸 ,并调整配比 ,最终选定甲醇 -水 -醋
酸(50∶50∶1)为流动相 ,保证了木犀草素保留时间在
20 min内 ,且能与其他峰达到基线分离。
3.3　游离木犀草素提取方法 ,考查了 70%乙醇回流 、
甲醇超声和 50%甲醇超声 3种方法 ,以甲醇超声提取
率最高 ,超声 30 min可提取完全 。
参考文献
1　中国药典.一部.2005.244
2　KatrinSch¨utz, ReinholdCarle, AndreasSchieber.Taraxacum-Areview
onitsphytochemicalandpharmacologicalprofile.JourmalofEthnophar-
macology, 2006, 107:313
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出版社 , 1998.357-358
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学报 , 2004, 35(2):178
5　凌云 , 郑俊华.中药蒲公英的研究进展.中国现代应用药学杂志 ,
1998, 15(3):10
HPLC法测定阿尔泰银莲花中齐墩果酸和熊果酸的含量＊
杨晓津 1 ,陈鸿英 2
(1.天津市急救中心 ,天津　300011;　2.天津市医药科学研究所 , 天津　300020)
摘　要　目的:建立阿尔泰银莲花中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法:采用 C18柱 , 流动相
为甲醇 -水 -冰醋酸(89∶11∶0.05 ), 检测波长 210 nm。结果:齐墩果酸在 0.414 ～ 2.07 μg范围内线性关系良好 , 熊果
酸在 0.462 ～ 2.31 μg范围内线性关系良好;平均回收率齐墩果酸为 98.3%, 熊果酸为 97.6%;RSD均为 0.24%。结论:为
阿尔泰银莲花的含量测定提供了一种快速 、准确的方法 , 同时 ,为阿尔泰银莲花药用植物资源的进一步开发提供了依据。
关键词　阿尔泰银莲花 ,齐墩果酸 , 熊果酸 ,含量测定 , 高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-5687(2008)06-0003-03
　　阿尔泰银莲花(AnemonealtaicaFisch)又名菊形双
瓶梅 ,属毛茛科银莲花属植物 ,其干燥根状茎为九节菖
蒲 。其味辛 ,性温 ,归心 、肝 、脾经 ,具有开窍除痰 、安神
健脾作用[ 1] 。有文献 [ 2]报道 ,用薄层扫描法测定其齐
墩果酸含量为 1.196%。研究表明 ,齐墩果酸具有保
肝 、降酶 、抗炎 、增强肌体免疫功能及降血脂等作用 [ 3] ,
熊果酸有抗突变 、抗癌 、诱导细胞凋亡等作用 [ 4] 。因齐
墩果酸与熊果酸为同分异构体 ,用薄层扫描法测定其
含量难以区分 ,目前尚未见同时测定阿尔泰银莲花中
齐墩果酸与熊果酸含量的报道。故本实验建立了采用
HPLC法同时测定其中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。
该方法快速 、稳定 、重现性好 。
3天津药学　Tianjin　Pharmacy　2008年　第 20卷第 6期
＊ 收稿日期:2008-07-21
1　仪器与试药
1.1　仪器　美国 Agilent1200高效液相色谱仪 ,二极
管阵列检测器;瑞士 METTLERXS105型电子天平;
KQ-300B型超声波清洗器 ,昆山超声仪器有限公司;
pHS-3C精密级数字酸度计 ,上海虹益仪器仪表有限
公司。
1.2　试药 　熊果酸对照品(批号 110742-200415)、
齐墩果酸对照品(批号 110709-200304),均购自中国
药品生物制品检定所;本实验所用阿尔泰银莲花根茎 ,
采自陕西眉县 、宝鸡 、太白 ,并经天津市医药科学研究
所天然药物化学室鉴定;甲醇为色谱纯 、其他试剂为分
析纯 ,水为纯化水 。
2　色谱条件
色谱柱:WatersSymmetryShieldC18(150 mm×4.6
mm, 3.5μm);流动相:甲醇 -水 -冰醋酸(89 ∶11∶
0.05);检测波长:210 nm;流速:0.8 ml/min;柱温:室
温;进样量:10μl。在上述色谱条件下 ,理论板数按齐
墩果酸 、熊果酸计均不低于 5 000 ,两峰分离良好 ,分离
度大于 1.5。
3　方法与结果
3.1　对照品溶液的配制　分别精密称取减压干燥至
恒重的齐墩果酸对照品 2.07mg和熊果酸对照品 2.31
mg,共置 10 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,作为对照品混合溶液。
3.2　样品溶液的制备　取阿尔泰银莲花生药 ,经粉碎
过 20目筛 ,精密称取 1.0 g, 加入含 1%盐酸的乙醇溶
液 25 ml,超声 15min,过滤 ,重复提取 3次 ,合并滤液 ,
将乙醇滤液浓缩至干 ,加甲醇溶解 ,转移至 10 ml量瓶
中 ,加甲醇定容 ,溶液用 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续
滤液作为样品溶液。
3.3　线性关系的考查 　精密吸取对照品混合溶液
2.0、4.0、6.0、8.0和 10.0 μl,照上述色谱条件进样分
析 ,测定峰面积。以峰面积值为横坐标 ,以进样量为纵
坐标作图 ,得回归曲线 。回归方程分别为:Y(齐墩果酸) =
2.706×10-5 X+0.051 9, r=0.999 3(n=5);
Y(熊果酸)=3.204×10-5 X-1.378×10-3 , r=0.999 1(n
=5)。结果表明 ,齐墩果酸和熊果酸的进样量分别在
0.414 ～ 2.070 μg和 0.462 ～ 2.310 μg范围内 ,线性关
系良好 ,见图 1。
3.4　精密度试验　精密吸取对照品混合溶液 10 μl,
照上述色谱条件 ,连续进样 6次 ,分别测定峰面积值 ,
结果齐墩果酸平均峰面积的 RSD为 0.92%,熊果酸平
均峰面积的 RSD为 1.08%。表明仪器性能良好 。
3.5　重复性试验　取同一批样品 6份 ,按 “ 3.2”项下
方法制备样品溶液 ,照上述色谱条件 ,精密吸取 10 μl,
重复进样 6次 ,结果齐墩果酸平均峰面积的 RSD为
1.72%,熊果酸平均峰面积的 RSD为 1.64%。表明该
方法重现性良好。
1.齐墩果酸　2.熊果酸
图 1　对照品(A)样品(B)HPLC色谱图
3.6　加样回收率试验　精密称取已知含量的干燥至
恒重并过 20目筛的阿尔泰银莲花粉末 6份 , 每份约
1g,分别加入已精密称定的齐墩果酸 、熊果酸对照品
各约 0.5mg,照 “ 3.2”项下方法制备溶液 ,按上述色谱
条件进样测定 。结果齐墩果酸 、熊果酸的平均回收率
分别为 98.3%和 97.6%, RSD均为 0.24%(n=6),见
表 1。
表 1　回收率测定结果
成分 样品含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%)
齐墩果酸 0.872 0.592 1.452 98.0
0.878 0.524 1.393 98.3
0.811 0.563 1.365 98.4
0.804 0.590 1.385 98.5
0.837 0.571 1.400 98.6
0.860 0.543 1.393 98.1
熊果酸 0.929 1.431 0.432 97.6
0.918 0.534 1.438 97.4
0.953 0.531 1.471 97.5
0.941 0.552 1.481 97.8
0.903 0.503 1.395 97.8
0.930 0.500 1.416 97.2
3.7　样品测定　分别精密吸取对照品混合溶液与样
4 天津药学　Tianjin　Pharmacy　2008年　第 20卷第 6期
品溶液各 10 μl,注入液相色谱仪中 ,按上述色谱条件
测定 ,用外标法计算样品中齐墩果酸和熊果酸的含量 。
结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果(n=3)
样品产地 齐墩果酸含量(mg/g生药)
RSD
(%)
熊果酸含量
(mg/g生药)
RSD
(%)
陕西眉县 0.87 1.15 0.93 1.65
陕西宝鸡 0.75 1.33 0.89 1.72
陕西太白 0.81 1.89 0.90 1.70
4　讨论
4.1　在 HPLC检测时 ,若以甲醇 -水为流动相 ,齐墩
果酸和熊果酸两峰分离度约为 1.2,分离效果不理想;
本方法选用甲醇 -水 -冰醋酸(89∶11∶0.05)为流动
相 ,所得图谱基线平稳 ,且分离度为 1.5,两成分基本
能达到基线分离;加入少量冰醋酸可以创造弱酸性环
境 ,利于齐墩果酸与熊果酸的分离。
4.2　对样品溶液超声提取时间(10、15和 20 min)进
行考查 ,结果超声 15 min和 20 min的提取率相同 ,超
声 10 min的提取率较低 ,故选择 15 min为样品的超声
提取时间 。
4.3　测定结果显示 ,产自我国陕西省不同地区的阿尔
泰银莲花中齐墩果酸 、熊果酸的含量差别不大。且本
实验为筛选齐墩果酸与熊果酸含量高的植物和开发阿
尔泰银莲花药用植物资源及控制与评价药材质量 ,提
供了一种有效方法 。
参考文献
1　宋立人 ,洪恂.现代中药学大辞典(上册).北京:人民卫生出版社 ,
2001.57-58
2　吴乃居 ,王延明 ,陈鸿英 ,等.中草药中齐墩果酸含量的测定.中草药 ,
1992, 23(9):467
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杂志, 1998, 4(1):26
4　黄镜 ,孙燕.熊果酸的抗肿瘤活性.中国新药杂志 , 1997, 6(2):101
高效液相色谱法测定醋酸泼尼松的有关物质＊
贾艺琦 1 ,高立勤 1 ,赵陆华 2
(1.天津市药品检验所 , 天津　300070;　2.中国药科大学分析测试中心 ,南京　210009)
摘　要　目的:建立高效液相色谱法测定醋酸泼尼松有关物质的方法。方法:采用 DikmaDiamonsilTM C18(4.6 mm×
250mm, 5 μm)色谱柱 ,乙腈 -水(33∶67)为流动相 ,流速 1.2ml/min, 检测波长 240 nm, 柱温为 45 ℃,已知杂质加自身对
照外标法。结果:醋酸泼尼松在 0.559 ～ 27.95 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.999 95, n=6),泼尼松在 0.516 ～ 25.8
μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.999 98, n=6), 醋酸可的松在 0.525 ～ 26.25 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=
0.999 95, n=6),醋酸 B杂质在 0.475 ～ 23.75μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.999 95, n=6)。精密度试验 RSD醋酸
泼尼松为 0.3%、泼尼松为 0.4%、醋酸可的松为 0.7%,醋酸 B杂质为 0.8%。最低检出量醋酸泼尼松 0.11 μg,泼尼松 0.
1 μg,醋酸可的松 0.105μg, 醋酸 B杂质 0.095 μg。结论:该方法简便 , 快速 ,准确 , 能满足制剂质量标准的要求。
关键词　醋酸泼尼松 ,高效液相色谱 , 有关物质
中图分类号:R927.11　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-5687(2008)06-0005-03
DeterminationofrelatedsubstancesinprednisoneacetatebyHPLC
JiaYiqi1 , GaoLiqin1 , ZhaoLuhua2
(1.TianjinMunicipalInstituteforDrugControl, Tianjin30007;2.ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210009)
ABSTRACTOBJECTIVEToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofrelatedsubstancesinprednisoneacetate.METH-
ODSThechromatographicsystemisconsistedofDikmaDiamonsilTMC18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)columnandmobilephaseof
acetone-water(33∶67), attherateof1.2 ml/min, atdetectionwavelength240 nmandthecolumntemperaturewas45 ℃.RE-
SULTSThecalibrationcurveofprednisoneacetatewaslinearwithintherangeof0.559 ～ 27.95μg/ml(r=0.999 95, n=6), the
calibrationcurveofprednisonewaslinearwithintherangeof0.516 ～ 25.8μg/ml(r=0.999 98, n=6).Thecalibrationcurveof
cortisoneacetatewaslinearwithintherangeof0.525 ～ 26.25μg/ml(r=0.999 95, n=6).thecalibrationcurveofimpurityBac-
etatewaslinearwithintherangeof0.475 ～ 23.75 μg/ml, r=0.999 95, n=6.TheLOQwas0.11 μg, 0.1μg, 0.105 μgand
5天津药学　Tianjin　Pharmacy　2008年　第 20卷第 6期
＊ 收稿日期:2008-07-28