全 文 ：基金项目 国家自然科学基金资助项目（30772635）；天津市科委应
用基础研究重点基金资助项目（07JCZDJC05100）
作者简介 黄颖瑜（1983-），女，硕士在读，研究方向：天然产物有效成
分分离、分析及药动学研究；通讯作者：段宏泉，E-mail：hqduan@hot－
mail.com。
［摘要］目的：建立委陵菜中委陵菜黄酮的 HPLC含量测定方法，并测定不同生长期和不同部位药材中的含量。方法：
采用 Kromasil-C18色谱柱，流动相为甲醇-3‰冰醋酸水溶液（49∶51），流速：1 ml·min-1，检测波长：254 nm。结果：委陵菜
黄酮在 5~150 μg.ml-1浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数为 0.999 9，平均加样回收率为 101.21%。委陵菜黄酮在
7月份委陵菜全草和叶中含量最高，分别为 1.018‰和 1.477‰。结论：该方法操作简单，可作为委陵菜中委陵菜黄酮
的含量分析方法。
［关键词］委陵菜；委陵菜黄酮；HPLC
［中图分类号］R927.2 ［文献标识码］A ［文章编号］1006－8147（2010）03-0375-03
The determination of potentilla flavone from Potentilla chinesis
in different growth periods and parts by HPLC
HUANG Ying-yu, TANG Sheng-an, HU Wei, DUAN Hong-quan
（School of Pharmaceutical Sciences, Research Center of Basic Medical Sciences，
Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China）
ABSTRACT Objective: To develop an HPLC method for determination of potentilla flavone from
Potentilla chinesis in different growth periods and growth sites. Methods： Kromasil -C18 was used as
analysis column with methanol-3‰ acetic acid water(49∶51) as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min-1
and the determination wavelength was 254 nm. Results: The calibration curve of potentilla flavone was
linear within the range of 5~150 μg·ml-1, the r value was 0.999 9; and its average recovery was 101.21%.
The highest content of potentilla flavone are in July and leaves of P. chinesis, with the contents are 1.018‰
and 1.477‰ , respectively. Conclusion: This method is simple, can be used for the content analysis of
potentilla flavone in Potentilla chinesis.
KEYWORDS Potentilla chinesis; Potentilla flavone; HPLC
黄颖瑜，唐生安，胡 玮，段宏泉
（天津医科大学药学院，基础医学研究中心，天津 300070）
HPLC 测定不同生长期及不同部位委陵菜中
委陵菜黄酮的含量
中药委陵菜（Potentilla chinesis Ser.）又名白头
翁，蛤蟆草，为蔷薇科植物委陵菜属委陵菜的干燥
全草。委陵菜性寒，味苦，具有清热解毒，凉血止痢
的作用[1]。研究证明其提取物具有抗糖尿病[2]，抗菌
抗病毒[3-4]，保肝[5]及镇痛[6]的作用。经临床应用调查，
在天津蓟县中医医院和天津中医药大学附属医院应
用于治疗糖尿病，取得了较好的疗效。本实验室在研
究委陵菜抗糖尿病活性成分中得到一黄酮类主要有
效成分-委陵菜黄酮，药效学考察表明委陵菜黄酮抗
糖尿病作用与二甲双胍相当，是中药委陵菜抗糖尿
病作用的主要有效成分[7-8]。本试验采集天津蓟县地
区不同生长时期的委陵菜，建立高效液相色谱法测
定药材中委陵菜黄酮的含量，同时研究有效成分委
天 津 医 科 大 学 学 报
JOURNAL OF TIANJIN MEDICAL UNIVERSITY
第 16卷 3期
2010年 9月
Vol． 16, No． 3
Sep． 2010 375
表 2 不同部位生长的委陵菜药材中委陵菜黄酮的含量（‰）
陵菜黄酮在不同生长期和不同部位药材中的含量变
化，为委陵菜质量标准的进一步提高提供依据。
1 材料与方法
1.1 仪器、试剂与药材 岛津 LC-6A高效液相色谱
仪（日本岛津），分析之星色谱工作站；十万分之一电
子分析天平（赛多利斯科仪器北京有限公司），电热
恒温水浴锅（北京科伟永鑫实验设备厂），KQ-500B
型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；委陵
菜黄酮对照品：为本实验室自制，经 1H-NMR 及
13C-NMR和 MS鉴定结构，HPLC峰面积归一化法测
定其纯度为 99.713%，甲醇（色谱纯，天津基准化学
试剂有限公司），水（超纯水），其他试剂均为分析纯。
委陵菜，2008年采自天津蓟县，经天津医科大
学药学院生药学教研室鉴定。
1.2 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm,
5μm, TIANHE)，甲醇-3‰冰醋酸水溶液（49:51）为流动
相，流速：1 ml·min-1，检测波长：254 nm，柱温：30 ℃，
进样量：20 μl。
1.3 溶液制备
1.3.1 对照品溶液的制备 精密称取委陵菜黄酮对
照品 2.500 mg，置于 25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并
稀释至刻度，使其浓度为 100 μg·ml-1，摇匀，作为委
陵菜黄酮对照品的储备液。
1.3.2 供试品溶液的制备 精密称取药材粉末
3.00 g，置于索氏提取器中，加甲醇 100 ml，回流提取
4 h，回收甲醇提取液，浓缩，过滤，定容至 50 ml，备
用。
1.4 方法学考察
1.4.1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0.5、
1.5、3、6、8至 10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇
匀得 5、15、30、60、80 μg·ml-1对照品溶液，备用。以
上各对照品溶液进样 20 μl，按照“1.2”项下色谱条
件测定峰面积，以浓度（μg/ml）为横坐标，以峰面积
为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y = 58 560X +
14 239, r=0.999 9，表明委陵菜黄酮在 5~150 μg·ml-1
浓度范围内呈现良好的线性关系。
1.4.2 精密度考察 对照品溶液连续进样 6次，测
定峰面积，计算 RSD为 0.78%。
1.4.3 重复性试验 按照“1.3.2”项下方法制备供试
品溶液 5份，对照品和供试品溶液各进样 20 μl，测
得峰面积，计算得药材中委陵菜黄酮的含量平均值
为 1.007‰，RSD为 2.25%。
1.4.4 稳定性试验 取供试品溶液分别在 0、2、4、
8、12、24 h 进样，测定峰面积，计算 RSD 为 2.88%。
结果表明，供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
1.4.5 加样回收率试验 精密称取委陵菜药材粉末
3.0 g共 9份，按照药材中委陵菜黄酮含量的 80%、
100%、120%加入委陵菜黄酮对照品，每个浓度各分
别按照“1.3.2”项下方法制备 3份供试品溶液，进样
测定，结果显示，80%、100%、120%委陵菜黄酮加入
量 的 回 收 率 为 99.23%（RSD =1.92%）、101.48%
（RSD=0.34%）、102.92%（RSD=0.74%），平均加样回
收率为 101.21%，RSD为 1.76%, 符合含量测定方法
学要求。
2 样品测定结果
2.1 精密称取不同月份生长的委陵菜药材粉末，按
“1.3.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定色谱峰
面积，以外标法计算含量，结果见表 1。
2.2 精密称取 7月份采集的不同部位委陵菜药材
粉末 3.0 g，按“1.3.2”项下方法制备供试品溶液，
进样，测定色谱峰面积，以外标法计算含量，结果
见表 2。
3 讨论
3.1 供试品提取方法的选择 经查阅相关文献以
及对委陵菜黄酮理化性质的考察，选择甲醇作为提
取溶剂，并取 10月份委陵菜分别考察了索氏回流提
取、超声提取对委陵菜药材中委陵菜黄酮的提取率，
结果显示索式提取测得含量为 0.51%，超声提取测
得含量为 0.32%，表明索氏提取法委陵菜黄酮的提
取率更高。
3.2 色谱条件的选择与优化 为了尽可能获得较
好的分离效果，对色谱条件进行了优化，考察了不同
表 1 不同生长期委陵菜药材中委陵菜黄酮的含量（‰）
RSD（%）
0.58
0.35
0.05
委陵菜黄酮含量
0.159
0.219
1.477
部位
根
茎
叶
（下转第 380页）
天 津 医 科 大 学 学 报 第 16卷
委陵菜黄酮含量
0.774
0.895
1.018
0.863
0.680
0.555
0.190
RSD（%）
0.18
1.54
0.10
0.07
0.10
0.10
0.37
月份
5
6
7
8
9
10
11
376
组成的流动相，如甲醇-水，甲醇-冰醋酸水溶液系
统。结果表明冰醋酸可以减少色谱峰的拖尾，使色谱
峰达到较高的对称性，改善分离度，最终确定甲醇-
3‰冰醋酸水溶液（49:51）为流动相，峰形对称性较
好，无拖尾，委陵菜黄酮保留时间为 25 min左右。
实验结果表明，不同月份以及不同生长部位的
委陵菜中委陵菜黄酮的含量存在较大差异，委陵菜
黄酮的含量随着生长时间的增加而增加，到 7月份
含量最高，8月份以后含量逐渐降低，而同一植株中
委陵菜黄酮在叶部位含量最高，根含量最低，两者含
量差异达 9倍多。国家药典 2005年版规定委陵菜于
春季末抽茎时采挖，较有效成分委陵菜黄酮含量最
高的 7月份提前 1~2个月，本文的实验结果为用于
糖尿病治疗的委陵菜药材采集和质量控制标准制定
提供了依据。
参考文献：
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（2009-11-12收稿）
闭部位和范围的选择。球囊堵闭的位置不易过高，既
往研究表明当心肌梗死面积超过 40%时，将导致心
功能的严重损害[10]，死亡率大大增加。本实验堵闭
LAD的第二对角支稍远处，心肌梗死面积相对较小
（9.54％～16.52％），既保证了动物模型的质量，又降
低了堵闭过程中及再灌注后恶性心律失常的发生
率。（4）球囊持续性堵闭（90 min）之前进行适当的缺
血预适应，这样可以减少室颤的发生率，提高实验
动物存活率。（5）球囊堵闭之前预防性应用利多卡
因和/或胺碘酮等药物可降低心肌细胞应激性，减
少术中及术后恶性心律失常的发生。本实验初期
（前 3只）采用利多卡因，有 2 只发生室颤并死亡；
后期（后 8只）在整个手术过程滴注胺碘酮，室颤发
生率降低（3只），且复律成功率升高（2只），提示胺
碘酮的效果可能更好。（6）术中准备电击除颤设备，
在堵闭冠状动脉时和撤除球囊再灌注时，实验动物
最容易发生室颤，一旦出现室颤，应及时电击除颤。
该模型有一定的局限性，球囊扩张过程中在一
定程度上损伤了血管内皮，因此尚不能完全模拟临
床情况。可以选用尽量小的球囊，以便最大程度减少
血管内皮损伤。
介入球囊堵闭冠状动脉的方法可成功建立猪的
心肌梗死再灌注模型，创伤较小，成功率较高，有较
好的稳定性与实用性，可为相关研究提供实验动物
模型基础。
参考文献：
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（2009-11-23收稿）
（上接第 376页）
天 津 医 科 大 学 学 报 第 16卷380