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长柄扁桃继代培养方法研究



全 文 :西北农业学报 2008 , 17(2):161-164
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
长柄扁桃继代培养方法研究*
孙占育1 ,2 ,郭春会1* ,梅立新1 ,罗 梦3 ,张利彩1
(1.西北农林科技大学园艺学院 ,陕西杨凌 712100;2.渭南职业技术学院 ,陕西渭南 715501;
3.延安大学西安创新学院 ,陕西西安 710100)
摘 要:采用均匀正交设计 UL9(34)分析了 6-BA , IBA , 蔗糖不同浓度及其组合对长柄扁桃继代培养的影响。
结果表明 , 3 种因素的作用大小依次为:6-BA>蔗糖>IBA , 适于继代增殖的培养基为 G+6-BA 1.0 mg/ L+
IBA 0 mg/ L+蔗糖 30 g/ L , 适于继代成苗的培养基为 G+6-BA 0.2 mg/ L+IBA 0.4 mg/ L+蔗糖 30 g/ L 。
关键词:均匀正交设计;长柄扁桃;继代培养
中图分类号:S662.1    文献标识码:A     文章编号:1004-1389(2008)02-0161-04
Study on Subculture of Amygdalus Pedunculata
SUN Zhan-yu1 ,2 ,GUO Chun-hui1* ,M EI Li-xin1 ,
LUO Meng3 and ZHANG Li-cai1
(1.Hort icul tu re College , Northw est A&F Universi ty , Yangling Shaanxi 712100 , C hina;2.Vocat ional and T ech nology C ol lege ,
Weinan Shaan xi 715501 , C hina;3.C huangxin College of Yan an University ,Xi an Shaanxi 710100 , China)
Abstract:The ef fects o f 6-BA , IBA and sucrose in different concentrations and combinat ions on sub-
culture o f Amygdalus pedunculata were analy zed by using unifo rm or thogonal design U L9(34).The
results show ed that the ef fective o rder of three facto rs w as 6-BA>Sucrose>IBA.The G supplemen-
ted wi th 6-BA 1.0 mg/ L + IBA 0 mg/L +S ucrose 30 g/L w as suitable for mul tiplication of subcul-
ture and G supplemented wi th 6-BA 0.2 mg/ L + IBA 0.4 mg/ L +Sucrose 30 g/L w as suitable fo r
grow into seedlings of subcul ture.
Key words:Uniform or thogonal design;Amygdalus pedunculata;Subculture
  长柄扁桃(Amygdalus pedunculata Pall.),
又称柄扁桃 、野樱桃 、毛樱桃 ,属于蔷薇科李亚科
扁桃属落叶灌木[ 1] ,具有抗旱 、抗风 、固沙能力强
等特性 ,有很好的生态效益。长柄扁桃的果仁含
油量高达 45.19%~ 52%,其油既可食用又可用
于工业[ 2] 。目前 ,长柄扁桃作为一种新兴的生物
能源有广阔的发展前景。
长柄扁桃作为适应我国西北干旱 、半干旱地
区山地和沙地生态而自然分布的一种落叶灌木 ,
由于沙漠淹没和人为破坏 , 已成为濒危植物种
类[ 3] 。为了迅速扩大长柄扁桃繁殖速度 ,满足生
产发展的大量需求 ,本试验采用均匀正交设计方
法[ 4-5] ,选用 G培养基[ 6] ,通过对 6-BA 、IBA 、蔗糖
3个因素 3种不同浓度配比的设计 ,对长柄扁桃
快速繁殖中的重要环节—继代培养进行了研究 ,
探索适于长柄扁桃继代培养的配方组合 。
1 材料与方法
1.1 材料
试验采用西北农林科技大学园艺学院果树研
究所组培室的长柄扁桃无菌瓶栽苗 。在组培室挑
选生长相对整齐的健壮新梢 ,切取 0.5 ~ 1.0 cm
*收稿日期:2007-09-12  修回日期:2007-10-16
基金项目:陕西省科技攻关项目(2005K01-G12-02)。
作者简介:孙占育(1971-),男 , 陕西蒲城人 , 讲师 , 在读硕士 , 主要从事园艺植物的组织培养和繁育研究。 Tel:13227898327 , E-
mail:szy-70@163.com
*通讯作者:郭春会(1960-),女 ,教授 ,主要从事扁桃引种 、鉴定与快繁研究。
左右 ,接种在含不同浓度的 6-BA 、IBA 、蔗糖的 G
培养基上继代培养 。培养基的 pH5.8 ,琼脂粉
6.5 g ·L-1 。每瓶接种 3 个嫩茎 ,每处理至少 6
瓶 ,重复 3次。
1.2 培养条件
于温度 26 ~ 28℃, 光照强度 2 000 lx ,光照
时间 14 h ·d-1条件下培养 30 d。
1.3 试验设计
采用 UL9(34)均匀正交设计表 。考察 6-BA 、
IBA 、蔗糖 3个因素对长柄扁桃继代培养产生的
影响 。每个因素取 3 个水平(表 1)共 9 个处理 ,
每处理重复 3次 ,继代培养的试验方案见表 2。
表 1 UL9(34)因素水平
Table 1 UL9(34)factors and levels
水平
Levels
A
6-BA/(mg· L -1)
B
IBA/(m g· L -1)
C蔗糖 Su crose/(g· L-1)
1 0.2 0 20
2 0.6 0.4 30
3 1 0.8 40
1.4 试验数据的纪录与处理
继代培养 30 d后统计嫩茎的增殖倍数 、有效
新梢率及平均苗高(表 2)。
增殖倍数=增殖苗数/接种苗数;有效新梢率
=(有效新梢数/新梢总数)×100%;有效新梢数
为长度大于1.0 cm 的健壮新梢;继代增殖的测试
指标为增殖倍数;继代成苗的主要测试指标为有
效新梢率 ,参考指标为平均苗高;数据处理采用
Excel软件分析 。
2 结果与分析
2.1 直观分析
2.1.1 继代增殖分析 由表 3中的极差 R值大
小可看出 ,影响增殖的因素的主次顺序为:6-BA
>蔗糖>IBA 。各因素的最优水平为 A 列 3 水
平 ,B列 1水平 , C列 2水平 ,即 6-BA1 mg ·L-1 ,
IBA0 mg ·L -1 ,蔗糖 30 g ·L-1 。
2.1.2 继代成苗分析 由表 3的极差 R值大小
可看出 ,影响有效新梢率和平均苗高的因素的主
次顺序均为:6-BA>蔗糖>IBA 。影响有效新梢
率的各因素的最优水平为 A 列 1水平 ,B 列 2水
平 ,C 列 2 水平 ,即 6-BA0.2 mg · L-1 , IBA0.4
mg ·L -1 ,蔗糖 30 g · L-1 。影响平均苗高的各
因素的最优水平为 A 列 1水平 , B列 3水平 ,C列
3水平 ,即 6-BA0.2 mg ·L-1 , IBA0.8 mg ·L-1 ,
蔗糖 40 g ·L-1 。
2.2 方差分析及多重比较
2.2.1 继代增殖分析 由表 4 中的 F 值可看
出 ,6-BA和蔗糖均为极显著水平 , IBA 未达到显
著 ,3 种因素的作用大小依次为:6-BA >蔗糖>
IBA ,6-BA 和蔗糖为影响增殖的主要因素 。由表
4多重比较可看出 , 6-BA 的 3 个水平差异显著 ,
其中 6-BA 的 3水平最优。 IBA 的 1水平显著高
于 3水平 , 2 、3水平差异不显著 , 1水平最优 。蔗
糖的 2 、3水平显著高于 1水平 。由此可见 , IBA
对继代增殖影响不大 ,继代增殖主要受 6-BA 和
蔗糖的影响 ,并且较高浓度的 6-BA 和蔗糖利于
增殖。因此 ,各因素的最优水平分别是 6-BA 为 3
水平 , IBA 为 1水平 ,蔗糖为 2水平 ,即6-BA1 mg
·L-1 、IBA0 mg ·L -1 、蔗糖 30 g · L-1 ,与直观
分析相同 。因此 , 适于继代增殖的培养基为:G
+6-BA 1 mg ·L-1 + IBA 0 mg · L-1 +蔗糖 30
g ·L-1 。
表 2 UL9(34)均匀正交试验方案与试验结果
Table 2 UL9(34)uniformly orthogonal design test plan and result
试验号
No. A6-BA BIBA C(蔗糖)Sucrose
增殖倍数
Mul tiplication coeff icient
Ⅰ Ⅱ Ⅲ ∑
有效新梢率/ %
Rate of ef fect ive
Ⅰ Ⅱ Ⅲ ∑
平均苗高/ cm
Average seedling s height
Ⅰ Ⅱ Ⅲ ∑
1 0.2 0 20 3.30 3.33 4.00 10.63 9.1 10.0 5.0 24.1 0.7 0.6 0.5 1.8
2 0.2 0.4 40 3.46 3.67 3.67 10.79 73.3 72.7 78.8 224.8 1.4 1.2 1.2 3.8
3 0.2 0.8 30 3.19 4.00 3.92 11.11 74.6 67.3 62.7 204.7 1.6 1.5 1.5 4.6
4 0.6 0 40 4.55 5.00 4.33 13.88 30.0 35.7 25.6 91.4 1 0.9 0.8 2.7
5 0.6 0.4 30 4.55 5.00 5.00 14.55 40.0 45.0 50.0 135.0 0.8 0.8 0.8 2.4
6 0.6 0.8 20 2.82 2.46 4.44 9.72 6.5 6.3 0.0 12.7 0.7 0.7 0.7 2.1
7 1 0 30 5.71 5.42 5.60 16.73 0.0 1.5 0.0 1.5 0.6 0.7 0.5 1.8
8 1 0.4 20 3.64 3.75 4.17 11.55 0.0 0.0 0.0 0.0 0.6 0.6 0.6 1.8
9 1 0.8 40 4.77 5.11 5.56 15.44 4.8 6.5 0.0 11.4 0.8 0.8 0.8 2.4
注:Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ分别为各处理的 3个重复 , ∑为Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ的和。
Note:Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ indicate the repeat of di sposals respectvely , ∑ in dicate the sum of Ⅰ , Ⅱ and Ⅲ.
·162· 西 北 农 业 学 报                17 卷
表 3 直观分析
Table 3 The visual analysis
A
6-BA BIBA C(蔗糖)Sucrose
增殖 K1 32.54 41.24 31.91
倍数 K2 38.15 36.89 42.39
Mult iplication K3 43.72 36.27 40.11
coeff icient k1 3.62 4.58 3.55
k2 4.24 4.10 4.71
k3 4.86 4.03 4.46
R 1.24 0.55 1.16
有效新 K1 453.6 117.0 36.8
梢率/ % K2 239.1 359.8 341.2
Rate of K3 12.9 228.7 327.6
effective/ % k1 50.4 13.0 4.1
k2 26.6 40.0 37.9
k3 1.4 25.4 36.4
R 49.0 27.0 32.3
平均 K1 10.2 6.3 5.7
苗高 K2 7.2 8.0 8.8
Average K3 6.0 9.1 8.9
seedling s k1 1.13 0.70 0.63
heigh t k2 0.80 0.89 0.98
k3 0.67 1.01 0.99
R 0.47 0.31 0.36
注:K1 , K2 , K3分别为各因素三水平的和;k1 , k2 , k3 分别为各因
素三水平的均值;R为极差。
Note:K1 , K2 , K3 indicate the sum of three level s respect ively;
k1 , k2 , k3 indicate the average of th ree level s respect ively;R indi-
cate range.
表 4 增殖倍数方差分析及多重比较
Table 4 Variance analysis and multiple comparisont
of multiplication coef ficient
因素
Factor
F 值
F valu e
水平
Level
平均值
Average
ê =0.05
6-BA 14.1480** 3 4.86 A
2 4.24 B
1 3.62 C
IBA 3.3213 1 4.58 A
2 4.10 AB
3 4.03 B
蔗糖 13.7567** 2 4.71 A
Su crose 3 4.46 A
1 3.55 B
2.2.2 继代成苗分析 由表 5的 F 值可看出 ,6-
BA 、IBA和蔗糖均为极显著水平 , 3 种因素的作
用大小依次为:6-BA>蔗糖>IBA ,三者均为影响
有效新梢率的主要因素。由表 5可看出 ,6-BA 和
IBA 的 3个水平均差异显著 ,其中 6-BA 的 1水
平最优 , IBA 的 2水平最优。蔗糖的 2 、3水平显
著高于 1水平。由此可见 , 6-BA 浓度愈大越不
利于新梢的发生 ,较高浓度的 IBA 和蔗糖有利于
新梢的发生。因此 ,影响有效新梢率各因素的最
优水平分别是 6-BA 为 1水平 , IBA 为 2水平 ,蔗
糖为 2水平 ,即 6-BA0.2 mg ·L-1 、IBA0.4 mg ·
L-1 、蔗糖 30 g ·L-1 , 同直观分析相同。
表 5 有效新梢率方差分析和多重比较
Table 5 Variances analysis and multiple
comparison of rate of ef fective
因素
Factor
F值
F value
水平
Level
平均值
Average
Duncanê =0.05
6-BA 94.7202** 1 50.39 A
2 26.57 B
3 1.42 C
IBA 28.8178** 2 39.98 A
3 25.41 B
1 12.99 C
蔗糖 57.6637** 2 37.90 A
Sucrose 3 36.40 A
1 4.10 B
  由表 6的 F 值可看出 , 6-BA 、IBA 和蔗糖均
为极显著水平 , 3种因素的作用大小依次为:6-BA
>蔗糖>IBA ,三者均为影响平均苗高的主要因
素。由表 6可看出 , 6-BA 的 1水平显著高于 2 、3
水平 。IBA 的 3 、2水平显著高于 1水平 。蔗糖的
3 、2水平显著高于 1水平。由此可见 ,6-BA 浓度
愈大平均苗高越低 ,而较高浓度的 IBA 和蔗糖有
利于苗的增高 。因此 ,影响平均苗高各因素的最
优水平分别是 6-BA 为 1水平 , IBA 为 3水平 ,蔗
糖为 3水平 ,即 6-BA0.2 mg ·L-1 、IBA0.8 mg ·
L
-1 、蔗糖 40 g ·L-1 ,与直观分析相同 。
表 6 平均苗高方差分析和多重比较
Table 6 Variance analysis and multiple comparison
of average seedling s height
因素
Factor
F值
F value
水平
Level
平均值
Average
Duncanê =0.05
6-BA 23.5150** 1 1.13 A
2 0.80 B
3 0.67 B
IBA 9.6131** 3 1.01 A
2 0.89 A
1 0.70 B
蔗糖 17.0507** 3 0.99 A
Sucrose 2 0.98 A
1 0.63 B
  由以上分析可知 ,低浓度的 6-BA 、较高浓度
的 IBA 和蔗糖有利于有效新梢的发生和苗的增
高 ,因此 ,适于长柄扁桃继代成苗的培养基为 G
+6-BA 0.2 mg ·L -1 + IBA 0.4 mg ·L-1 +蔗
糖 30 g ·L-1 。
2.3 验证试验
按照均匀正交设计得出的继代增殖培养基 G
+6-BA 1 mg ·L -1 +IBA 0 mg ·L -1 +蔗糖30
g ·L-1进行了 3次试验 ,增殖倍数达 5.7。采用
继代成苗的培养基 G + 6-BA 0.2 mg · L-1 +
IBA 0.4 mg · L-1 +蔗糖 30 g · L-1也进行了 3
次试验 ,有效新梢率达 75.1%, 平均苗高达 1.5
cm 。试验证明 ,用均匀正交设计得出的继代培养
基的配方效果较好。
·163·2 期               孙占育等:长柄扁桃继代培养方法研究
3 讨论
3.1 激素
利用细胞分裂素 6-BA 可抑制顶端优势 ,促
进细胞分裂和茎芽的分化[ 7] , 6-BA 对促进腋芽
增殖最为有效 [ 8] 。本试验的结果表明 , 0.2 ~
1.0 mg ·L-1 6-BA 范围内 ,随着 6-BA 浓度的增
大 ,增殖倍数也随之增加。同刘进平等[ 9] 的 5个
美国扁桃品种增殖的结论是相符合的。高浓度的
6-BA 虽然促进了芽的诱导和增殖 ,但对其伸长具
有明显抑制作用 ,不利于成苗。利用生长素 IBA
可促使茎和节间的伸长。从试验结果还表明 ,较
高浓度的 IBA 有利于成苗;当 6-BA 浓度高时 ,诱
导出的不定芽数多 ,有利于增殖而抑制成苗;当
6-BA 浓度低 , IBA 浓度较高时 ,成苗率高但不利
增殖 。
3.2 蔗糖
培养基中蔗糖浓度可调节试管苗内源激素的
水平和比例 ,从而影响器官的分化和生长[ 10] 。蔗
糖浓度为 3%~ 4%时对新梢数量和嫩梢长都有
利[ 11] 。本试验结果也说明了蔗糖浓度为 3%~
4%时 ,有利于继代增殖和成苗 。
3.3 其他因素
在长柄扁桃的继代培养中 ,增殖和成苗受许
多因素的影响 。除了生长素的种类及浓度 、蔗糖
含量外 ,还受培养基的种类 、光照强度 、继代次数
等因素的影响 ,还有待进一步观察研究 。
3.4 均匀正交设计
均匀正交设计是具有最好均匀性的正交设
计 ,用较少的试验次数 ,便确定了主要影响因素 ,
并对试验的效应做出了准确的综合评价 。本试验
仅通过 9次试验便选出最优继代增殖和成苗的培
养基 。说明了均匀正交设计不仅减少了试验量降
低了成本 ,而且提高了试验的准确性。
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