全 文 ：供试品溶液。另取川芎对照药材 1 g, 加乙醚 20 ml,超声处理 30
min,滤过 , 滤液挥干 , 残渣加醋酸乙酯 2 ml使溶解 , 作为对照药
材溶液。照薄层色谱法 [ 1]实验 , 吸取上述两种溶液各 5 μl, 分别
点于同一硅胶 G薄层板上 ,以正己烷 -醋酸乙酯(9∶1)为展开
剂 , 展开 ,取出 , 晾干 ,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱
中 , 在与对照药材色谱相应的位置上 , 显相同颜色的荧光斑点。
3　检查
3.1　乌头碱限量检查 取本品 1贴 , 除去盖衬 , 加浓氨试液 10
ml使浸润 ,放置 2 h, 加乙醚 50 ml,时时振摇 , 放置 24 h,摇匀 ,滤
过 , 滤渣用乙醚 20 ml分次洗涤 , 洗液与滤液合并 ,用稀盐酸溶液
振摇提取 3次 , 30ml/次 ,合并提取液 ,加浓氨试液调 pH值至 9,
加乙醚振摇提取 3次 , 30 ml/次 ,合并乙醚提取液 , 用无水硫酸钠
脱水 , 滤过 ,滤液挥干 , 残渣加无水乙醇使成 1 ml, 作为供试品溶
液。另取乌头碱对照品 , 精密称定 ,加无水乙醇制成每毫升含 1.5
mg的溶液 ,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验 ,吸
取供试品溶液 10μl,对照品溶液 5 μl, 分别点于同一以羧甲基纤
维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上 , 以苯 -醋酸乙酯 -二乙胺
(14∶4∶1)为展开剂 , 展开 , 取出 ,晾干 , 喷以稀碘化铋钾试液。
供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上 , 出现的斑点应小
于对照品斑点或不出现斑点。
3.2　士的宁限量检查 取乌头碱限量检查项下供试品溶液作为
供试品溶液。另取士的宁对照品 , 加三氯甲烷制成每毫升含 1
mg的溶液 ,作为对照品溶液。照薄层色谱法 [ 1]试验 , 吸取供试品
溶液 5 μl和对照品溶液 4μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,以
甲苯 -丙酮 -乙醇 -浓氨试液(4∶5∶0.6∶ 0.4)为展开剂 , 展
开 , 取出 ,晾干 , 喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中 , 在与对照
药材色谱相应的位置上 ,出现的斑点应小于对照品斑点或不出现
斑点。
3.3　含膏量 照贴膏剂含膏量第一法检查 [ 1] , 用醋酸乙酯作溶
剂。每 100 cm2应不少于 0.8g。
3.4　其他 应符合贴膏剂项下有关的各项规定(《中国药典》
2005年版Ⅰ部附录Ⅱ)。
4　临床运用
运用止痛活络膏治疗 105例患者 , 全部病例均来自我院门
诊 、住院部 ,依从性较好 , 各类软组织损伤中后期 82例 , 骨折后期
23例;男 57例 , 女 48例;年龄 3 ～ 82岁。病史均在 7 d以上 , 临
床表现为疼痛 、活动受限。治疗后 , 痊愈 42例 , 有效 58例 ,无效 5
例 , 有效率 95.2%。
5　讨论
止痛活络膏为外用贴膏剂 , 因含有毒性中药 , 毒性成分乌头
碱 、士的宁含量采用薄层色谱法对比斑点不大于限量斑点进行
控制。
各类软组织损伤和骨折中后期 ,由于外力损伤气血 、经络 、肌
肉 、筋骨而致气滞血淤 , 筋脉壅阻 ,不通则痛。止痛活络膏配伍行
气 、活血 、通经 、止痛的中药 , 经提取制成贴膏剂 , 疗效确切 , 病人
使用方便 , 经申报注册为医院制剂临床使用 9年 , 每年使用 1.5
万张 , 偶见皮肤过敏 , 停药即止 , 是一种值得推广的外用中药
制剂。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录 VⅠ B,附录Ⅱ.
收稿日期:2007-04-05;　修订日期:2007-09-10
作者简介:梁亦龙(1972-),男(苗族),湖南保清人 ,现任重庆邮电大学生
物信息学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事天然药物分离纯化研究工作.
荠菜总黄酮多囊脂质体的制备和体外释放行为研究
梁亦龙1 , 戴传云 2 , 刘火安 2 , 舒坤贤1
(1.重庆邮电大学生物信息学院 ,重庆　400065;　2.重庆科技学院 ,重庆　400050)
摘要:目的 研究了荠菜总黄酮多囊脂质体的制备和体外释放行为的研究。 方法 采用单因素实验 , 以芦丁为对照品 , 用
吸光光度法测定荠菜总黄酮的含量 ,复乳法制备多囊脂质体 , 并对多囊脂质体的处方进行了筛选 ,同时 ,对荠菜总黄酮在
不同释放介质中体外释放行为进行研究。结果 药材比为 1∶100, EPC∶TO∶Chol的质量比为 7∶2∶1和初乳与 4.0 %
的葡萄糖溶液的体积比为 1∶2.5时 , MVLs的包封率最优 , 对其体外释放行为研究发现 , 荠菜总黄酮在多囊脂质体中具
有一定的缓释效应 , 并受释放介质 pH的影响。结论 荠菜总黄酮多囊脂质体具有一定的缓释效果。
关键词:荠菜总黄酮;　多囊脂质体;　释放性能
中图分类号:R283　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0720-02
PreparationofTotalFlavoneinShepherds-purseMultivesicularLiposomesandReleasefromtheLiposomesinvitro
LIANGYi-long1 , DAIChuan-yun2 , LIUHuo-an2 , SHUKun-xian1(1.ColegeofBioinformation, ChongqingUniversityofPostandTelecommunication, Chongqing400065 , Chi-
na;2.ColegeofBiology, ChongqingUniversityofScienceandTechnology, Chongqing400050, China)Abstract:ObjectiveTopreparemultivescularliposomes(MVLs)oftotalflavoneinshepherds-purse(TFS)withhighencap-sulationeficiencyandsustained-release.MethodsSinglefactorwasutilizedtooptimizeextractingprocess.Concentrationofto-
talflavonewasmeasuredbythespectrophotometer, withrutinasstandardsample, MVLswaspreparedbymultipleemulsionmeth-
odsunderdifferentcondition.ReleaseoftheTFSfromtheliposomeswasstudiedinvitro.ResultsRatioofdrugandmaterialusedaffectedencapsulationefficiencyofMVLs, thesameasEPC∶TO∶Cholandfirstsolution:4% glucose.Highencapsulationefi-
ciencywasgained, whentheratiowas1∶100, 7∶2∶1 and1∶2.5, respectively.ConclusionThetotalflavoneinshepherds
-pursemultivescularliposomesshowshighencapsulationeficiencyandsustained-releasecharacter.
Keywords:Totalflavoneshepherds-purse;　Multivescularliposomes;　Sustained-release
　　荠菜 Capselabrusa-pastonsL.属十字花科 , 也称春菜 , 一年
生或三年生草本植物。荠菜总黄酮(TotalFlavoneinShepherds-
purse, TFS)用来治疗高血压病 , 其功效比同为黄酮类的芦丁要
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好 , 且无毒性 [ 1 , 2] 。为了更好地利用荠菜的价值 , 将 TFS长效制
剂不失为一个极好的方法。脂质体作为一种靶向药物载体 ,具有
类似细胞的结构 , 在体内可以改变被包封药物的体内分布 , 并具
有缓释效果 , 从而减少药物的剂量和降低药物的毒性 ,提高药物
的治疗指数。
多囊脂质体为脂质体多囊颗粒(MultivesicularLiposomes,
MVLs),这些囊泡被连续的非同心的类脂双分子磷脂膜所分离 ,
具有更多的包封容积和较大的粒径 , 尤其当某个囊泡破裂时 ,药
物只能从破裂的囊泡释出 ,完整的囊泡仍然可以保持原状 , 因而
有很好的缓释效应 [ 3] 。
本文研究了 TFS的非同心多囊脂质体制备方法 , 测定了包
封率 、粒径分布及体外释放性能等 , 以使其在体内服用后缓释作
用 , 提高药物疗效 ,国内外尚未见 TFS多囊脂质体的报道。
1　器材
UV-2100型分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司);长风
牌恒温水浴器(北京长风仪器仪表有限公司);JA1003A电子天
平(上海精天电子仪器有限公司);5810R冷冻离心机(德国 Ep-
pendorf公司);WH-2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);
Waters-600型 HPLC系统(美国 Waters公司);CJJ-1磁力搅拌
器(常州国华电器有限公司)。
荠菜(采自重庆中药研究院苗圃);芦丁标准品(中国医药集
团上海化学试剂公司);95%乙醇为分析纯 , 其他试剂均为化学
纯;卵磷脂(EPC)(四川英格尔生物工程限公司);三油酸甘油酯
(TO)(北京金龙化学试剂有限公司);(美国 Sigma试剂公司);
胆固醇(Chol)(上海化学试剂公司);其他试剂均为化学纯。
2　方法
2.1　TFS的提取 [ 4 , 5] 称取刚摘取的荠菜样品 10 g份于锥形瓶
中 , 然后向瓶中各加入 75%乙醇 100 ml,再加入 4%的 NaOH醇
溶液 , 于 80℃恒温水浴中提取 3次 , 将提取液合并浓缩 , 过预处
理的 AB-8大孔树脂 , 70%的乙醇洗脱 , 收集乙醇洗脱液 , 70℃
水浴蒸干 , 得 TFS。
2.2　含量的测定 精密称取于 120℃干燥后的无水芦丁 20 mg,
用 75%乙醇溶解于 100 ml容量瓶中 , 定容得浓度为 0.2 mg/ml
的标准液。分别精确称取上述标准液加水配制成 0.01, 0.02,
0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.08, 0.10 mg/ml芦丁溶液 ,在 222 nm处
分别测定吸收度 , 以吸光度对质量浓度进行线性回归。
2.3　MVLs的制备 [ 6] MVLs的制备采用复乳法(multipleemul-
sionmethod, MEM),按配方将一定质量比的 EPC, TO和 Chol溶
解于 15 ml的有机溶剂(氯仿和乙醚), 搅拌使磷脂完全溶解 ,形
成油相 , 缓慢滴加溶有 TFS(浓度为 1 mg/ml)的葡萄糖 5.0%
(W/V)溶液 ,旋涡振荡形成 W/O型乳剂为 “初乳”, 取一定体积
的 “初乳”用注射器快速注入到含 0.1%(V/V)的吐温 -80乳化
剂的 4.0%(W/V)的葡萄糖溶液 ,旋涡振荡形成复乳 ,迅速将复乳
转移到 250 ml的圆底烧瓶中 ,充入 N2 ,控制温度为 35 ℃,旋转蒸
发除去有机溶剂 , 既得 MVLs悬浮液。
2.4　MVLs包封率的测定 [ 7] 取制备的 MVLs悬浮液 1 ml, 于
Sephadex-50柱用 Tris-HCl缓冲液洗脱 , 收集并测定游离的
TFS含量 ,与标准曲线对应 , 计算 TFS的含量和 MVLs的包封率 ,
包封率(Encapsulationeficiency, EE)的计算公式为:
EE(%)=M-mM ×100%
其中 M:加入 TFS的总质量
　　　m:上清液中的 TFS的质量。
2.5　MVLs处方与实验条件的筛选 按上述 MVLs的制备方法 ,
分别以药材比(TFS与膜材的质量比 , 1∶200, 1∶100和 3∶200)
、EPC∶TO∶Chol(质量比 , 8∶1∶1, 7∶2∶1和 6∶3∶1)和初乳
与 4.0%的葡萄糖溶液的体积比(1∶1, 1∶2.5, 1∶4)为变量 ,以
MVLs包封率为指标进行单因素考察实验。
2.6　释放介质的配制 人工胃液 (SimulatedGastricFluid, SGF,
pH=1.0的 HCl溶液):精确量取 9.0 ml浓盐酸于适量蒸馏水
中 , 转至 1 000 ml容量瓶中 ,加蒸馏水稀释至刻度线。
人工肠液 (SimulatedIntestinalFluid, SIF, pH=7.4的磷酸盐
缓冲溶液):精确称取 NaCl1.600 g和 KH2PO4 6.800g, 用适量蒸
馏水溶解 ,转至 1000 ml容量瓶中 ,加蒸馏水稀释至刻度线。
生理溶液 (SimulatedBodyFluid, SBF, 0.9%的 NaCl溶液):
精确称取 NaCl9.000 g, 于烧杯中用适量蒸馏水溶解 , 转移至
1 000 ml容量瓶中 , 加蒸馏水稀释至刻度线。
3　结果与讨论
3.1　芦丁的标准曲线 质量浓度分别为 0.01, 0.02, 0.03, 0.04,
0.05, 0.06, 0.08, 0.10 mg/ml的芦丁标准液用分光光度计法检
测 , 以吸光度对芦丁的质量浓度进行线性回归 , 结果如图 1所示 ,
相关系数 r=0.999 9,表明在 0.01 ～ 0.10mg/ml有良好的线性关
系。
图 1　芦丁的标准曲线
3.2　各因素对 MVLs包封率的影响
3.2.1　药材比 在 MVLs的制备过程中 , 当其它条件不变时 , 改
变 TFS与膜材的质量比 , 复乳法制备 ,分离出 MVLs并测定 MVLs
的包封率 ,结果如图 2所示 ,由图 2可看出 , 随着包封药物所占比
例的增大 , MVLs的包封率也不断增大 , 当药材比为 1∶100时 ,
MVLs的包封率为 33.06%, 3∶200时 , MVLs的包封率增大为
35.14%, 但总体趋势来看 , 随着包封药物所占比例的增大 , 包封
率变化趋势不明显 ,综合考虑 , TFS与膜材的质量比为 1∶100时
最合适 。
图 2　药材比对 MVLs包封率的影响
3.2.2　磷脂比 在 MVLs的制备过程中 , 当其它条件不变时 , 改
变 EPC∶TO的质量比 , 复乳法制备 , 分离出 MVLs并测定 MVLs
的包封率 ,结果如图 3所示 ,由图 3可看出 ,随着 TO的比例增大 ,
TFS在 MVLs的包封率先增大 , 然后减少 ,当 EPC∶TO∶Chol为 7
∶2∶1时 , TFS在 MVLs的包封率最高 , 为 36.55%, 因此 , EPC∶
TO∶Chol为 7∶2∶1是最佳比例。
3.2.3　初乳与 4.0 %的葡萄糖溶液的体积比 在 MVLs的制备
过程中 ,当其它条件不变时 , 改变初乳与 4.0 %的葡萄糖溶液的
体积比 , 采用复乳法制备 , 分离出 MVLs并测定 MVLs的包封率 ,
结果如图 4所示 , 由图 4可看出 , MVLs的包封率先升后降 , 初乳
与 4.0%的葡萄糖的体积比为 1∶2.5时 , TFS在 MVLs的包封率
最高。因此 , 初乳与 4.0 %的葡萄糖的体积比为 1∶2.5为最佳
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3 时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期
比例。
图 3　磷脂比对 MVLs包封率的影响
图 4　初乳与 4%葡萄糖比对 MVLs包封率的影响
3.3　TFS不同介质中的释放行为 图 5为 TFS在不同的释放介
质中的释放行为 , 结果表明 , TFS在 MVLs中具有一定的缓释效
应 , pH值不同 ,释放速率不同 , TFS在 pH=1.0的 SGF溶液中的
释放速率最慢 , pH分别为 7.0, 7.4的 SBF和 SIF释放介质中速
率次之。说明 TFS在 MVLs中的释放行为受 pH值的影响。
4　结论
实验表明:MVLs的制备采用复乳法 , 质量比为 EPC∶TO∶
Chol=7∶2∶1的膜材 ,溶解于 15ml的有机溶剂中 , 搅拌使磷脂
完全溶解 , 形成油相 , 缓慢滴加溶有 TFS(浓度为 1 mg/ml)的
葡萄糖 5.0%(W/V)溶液 ,旋涡振荡形成W/O型乳剂为 “初乳” ,取
图 5　TFS在不同的释放介质中的体外释放行为
的 “初乳”用注射器快速注入到 2.5倍体积的含 0.1%(V/V)的
吐温 -80乳化剂的 4.0%(W/V)的葡萄糖溶液 , 旋涡振荡形成复
乳 , 迅速将复乳转移到 250ml的平底锥形瓶中 ,置于旋转蒸发仪
上 , 用氮气吹除有机溶剂 , 既得的 MVLs包封率最佳。对其体外
释放行为研究发现 , TFS在 MVLs中具有一定的缓释效应 , 并受
释放介质 pH的影响。
参考文献:
[ 1 ] 　卢　胜 ,苏　浓 ,王桂泽.营养保健型佳蔬———荠菜 [ J] .中国食物
与营养 , 2004(7):53.
[ 2 ] 　程爱芳.荠菜的营养价值及药用价值 [ J] .蔬菜 , 2004(6):36.
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国医国药 , 2006, 17(7):1161.
[ 5 ] 　梁亦龙 ,戴传云 ,李　标 , 等.荠菜总黄酮提取工艺的研究 [ J].食
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[ 6 ] 　KimS, TurkerMS, ChiEY, etal.Preparationofmultivesicularlipo-
somes[ J] .BiochimBiophysActa, 1983, 728(3):339.
[ 7 ] 　张俊红 , 朱家璧, 王　虹.阿米卡星脂质体包封率测定 [ J] .中国
药学杂志 , 1999, 34(12):818.
收稿日期:2007-05-05;　修订日期:2007-10-19
作者简介:杨志雄(1966-),男(苗族),广西桂林人 ,现任广西壮族自治区人民医院主管中药师 ,主要从事中药新药开发与中药处方调配工作.
正交实验法优选蜜炙黄芪的最佳炮制条件
杨志雄1 , 唐永红 1 , 陈锡琨 2 , 杨海宁1
(1.广西壮族自治区人民医院 ,广西南宁　530021;　2.广西南宁市食品药品检验所 ,广西 南宁　530021)
摘要:目的 探讨微波炮制方法对蜜炙黄芪中黄芪甲苷含量的影响 , 优化蜜炙黄芪微波炮制的工艺条件。方法 采用
HPLC– ELSD法检测蜜炙黄芪中黄芪甲苷的含量 , 并按 L9(34)正交实验对蜜炙黄芪的微波火力 、加热时间 、含蜜量 3个
因素进行微波炮制蜜炙黄芪的工艺考察。结果 可用微波法炮制蜜炙黄芪 , 最佳工艺为微波火力 100%,加热时间 4 min,
含蜜量 25%, 即 A3B2C1。结论 微波法炮制蜜炙黄芪中黄芪甲苷含量高于炒法蜜炙黄芪 , 正交实验中的微波火力和加热
时间对蜜炙黄芪的效果具显著差异 ,有统计学意义(P<0.05), 含蜜量对蜜炙黄芪的影响无显著差异 , 无统计学意义(P
>0.05), 微波法炮制蜜炙黄芪是可行的。
关键词:蜜炙黄芪;　微波法;　正交实验;　黄芪甲苷
中图分类号:R283.3　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0722-02
OptimalProcessingSelectionofMikvetchRootFriedwithHoneybyOrthogonalDesign
YANGZhi-xiong1 , TANGYong-hong1 , CHENXi-kun2 , YANGHai-ning1
(1.ThePeoplesHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion, Nanning530021, China;2.NanningInstituteforDrugControl, Nanning530021, China)Abstract:ObjectiveToassessthemicrowaveprocessingefectsonastragoiosideIVofmilkvetchrootfriedwithhoney.MethodsMilkretchrootwasmixedwithhoneyandthenfriedinmicrowaveoven, accordingtoorthogonaldesignL
9
(34)ofmicrowavepower
levels, processingtime, andratioofhoneytomilkvetchroot.AstragoiosideIVoffriedmilkvetchrootwasmeasuredbyHPLC–
ELSD.ResultsAstragoiosideIVconcentrationoffriedmilkvetchrootwassignificantlyassociatedwithmicrowavepowerlevels(P<
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