全 文 ：·1158· 中草黄 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
盐酸青藤碱多囊脂质体的制备及其释放特性研究
姜素芳1，姚瑶2，陶昱斐2，丁燕飞2，向璧好1
(1．湖南师范大学医学院，湖南长沙410006，2．中南大学药学院，湖南长沙410006)
摘 要：目的 制备包封率较高且具有较好缓释性能的盐酸青藤碱多囊脂质体。方法 用复乳法制备盐酸青藤碱
多囊脂质体，以包封率和囊形为考察指标，采用均匀设计优选最佳处方和工艺，并考察其形状、粒径及体外释放性
能。结果制得的盐酸青藤碱多囊脂质体包封率在80％以上，形状圆整，粒径较均匀，多数分布在20～30pm，体外
释放符合Higuchi方程，释药f1／：为52．7h。结论 盐酸青藤碱多囊脂质体处方工艺稳定可行，包封率高且具有良好
的缓释特性。
关键词：盐酸青藤碱}多囊脂质体；缓释；释放特性
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1158—04
Preparationndreleasecharacterofsinomeninehydrochloridemultivesicularliposomes
JIANGSu—fan91，YAOYa02，TA0Yu—fei2，DINGYan—fei2，XIANGBi—yul
(1．MedicalCol ege，HunanNormalU iversity，Changsha410006，ChinaI2．SchoolfPharmaceuticalScience，
CentralSouthUniversity，Changsha410006，China)
Abstract：ObjectiveTopreparethesinomeninehydrochloridemultivesicularliposomeswithhighan—
trapmentefficiencya dsustainedreleasecharacter．MethodsultipleemulsionmethodwasusedtOpre—
parethesinomeninehydrochloridemuh v sicularliposomes．Uniformdes gnwasappliedtOoptimizethe
formulationndpharmaceuticalprocess．Theshap ，theparticlesize，andthereleasecharcterofthelipo—
somewerevaluated．ResultsThesinomeninehydrochloridemultivesicularliposomespr paredw re
sphericalandthesizeofmajorityparticleswaintherangeof20一30Ⅱmandwelldistributed．Theencap—
sulationefficiencywasmorethan80％anditsin—vitroreleaseprofileaccordedwellwiththeHiguchimodel
witht1／2uptO52．7h．ConclusionTheformulationndpharmaceuticalpro essofthesinomenineby-
drochloridemultivesicularliposomesarestableandfeasiblewiththehighencapsulationefficiencya dgood
sustained—releasecharact r．
Keywords：sinomeninehydrochloride；multivesicularliposomes；sustainedrele se；releasecharacter
盐酸青藤碱是从青风藤中提取的青藤碱的盐酸
盐，具有抗炎、镇痛、免疫抑制、降压、抗心律失常等
药理作用，临床用于治疗风湿、类风湿关节炎及心律
失常等[1]。盐酸青藤碱注射剂生物半衰期较短，需频
繁给药，且常见皮肤骚痒等过敏反应。多囊脂质体是
采用贮库泡沫技术于1983年研制成功的一种新型
脂质体，由多个非同心的类脂双分子囊泡组成，比传
统脂质体具有更多的包封容积和较大粒径，主要用
于运载亲水性药物[2]。而当其中某个囊泡破裂时，活
性物质从破裂囊泡释出，完整的囊泡仍然可以保持
原状，因而有很好的缓释效应[3]。多囊脂质体注射途
径广泛，有膜内、硬脑膜内、皮下、肌内、关节内及眼
内等多种给药途径。因为有相对较大的粒径，经体间
隙、体腔和组织注射后，被淋巴和全身循环吸收的药
物量很小。因此，多囊脂质体大部分停留在靶部位，
为药物的缓释提供一个真正的贮库[‘]。本实验研究
了盐酸青藤碱多囊脂质体的制备方法及其释药性
能，以使其注射后能在局部缓慢释药，减少给药次
数，提高疗效并降低不良反应。
1仪器与试药
XSZ—G生物显微镜(SUNNY)，FJ一200高速
分散均质机(上海标本模型厂)，紫外可见分光光度计
(北京莱伯泰科仪器有限公司)，TGl6G台式高速离
心机(湖南凯达科学仪器有限公司)，SHA—C水浴恒
温振荡器(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。
盐酸青藤碱(湖南正清制药有限公司，质量分数
收稿日期：2007—10一28
作者简介：姜紊芳(1972一)。女，湖南邵阳人，湖南师范大学医学院药荆教研室讲师，硕士，1994年获得中国药科大学药物制剂专业本科
学位，2005年获得中南大学药学院药剂专业硕士学位，主要从事药剂学的教学与药物传递系统的研究。
Tel：13975858164E—mail：sufang—jiang@sina．corn
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1159·
为98．7％)，卵磷脂(EPC，德国Lipoid公司)，三油
酸甘油酯(TO，化学纯，上海试剂二厂)，胆固醇
(CH，生物试剂，天津市博迪化工有限公司)，L一赖氨
酸(LY，生物试剂，上海源聚生物科技有限公司)，膜
稳定剂(OA，分析纯，天津市大茂化学试剂厂)，其
余试剂均为分析纯或化学纯。
2方法与结果
2．1青藤碱的HPLC法测定
2．1．1 色谱条件：HypersilGOLDC18(250mm×
4．6mm，5弘m)，流动相为乙腈一0．01mol／L
NaH：P04(15s 85)；柱温为30℃；体积流量为1
mL／min；检测波长为266．0nm；进样量为20pL。
此条件下盐酸青藤碱对照品、盐酸青藤碱多囊脂质
体样品及阴性对照品的色谱行为见图1。结果表明，
阴性对照无干扰，方法可行。
? ： ^ !．^： ：
0 2 4 6
t／nfin
图1盐酸青藤碱(A)、空白(B)和盐酸青藤碱多囊脂
质体(c)的高效液相色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsofsinomenine
hydrochloride(A)，blackgroup(B)，
andslnomeninehydrOchlOride
multivesicularliposomes(C)
2．1．2标准曲线的制备：精密称取盐酸青藤碱适
量，用蒸馏水精密配成质量浓度分别为5．0、10、20、
30、40、60、80弘g／mL溶液，进样测定峰面积。以峰
面积为横坐标，质量浓度为纵坐标进行线性回归，得
回归方程为C=0．06402A一0．3246，r2=0．9996。
2．2包封率的测定：取多囊脂质体混悬液，加等体
积0．9％NaCl溶液混匀，2500r／rain离心5min，分
离上清液和沉淀。取上清液20弘L注入高效液相色
谱仪，测定峰面积，计算未包封盐酸青藤碱的质量。
另取等量脂质体混悬液，加入异丙醇使溶解澄清，适
当稀释后取20pL注入色谱仪，测定峰面积，计算盐
酸青藤碱的总质量，计算包封率[包封率=(盐酸青
藤碱的总质量一未包封盐酸青藤碱的质量)／盐酸青
藤碱的总质量×100％]。
2．3盐酸青藤碱多囊脂质体的制备
2．3．1 制备工艺：按处方称取EPC、CH、TO以及
稳定剂OA，加入氯仿使完全溶解(油相)，另取蔗糖
溶于PBS中，配成质量浓度为4％的蔗糖溶液，加入
盐酸青藤碱使溶解(内水相)。将油相和内水相等体
积[z．5]混合后，于30℃水浴条件下高速剪切10
min，转速9000r／min，至形成W／O型初乳，将此初
乳快速注入含30mmoL／LL一赖氨酸的4％葡萄糖
溶液(外水相)中，用乳匀机剪切10s，使形成w／o／
w型复乳，迅速将此复乳倒至3倍体积的外水相中
稀释后，用氮气吹除氯仿至溶液呈半透明状，即得盐
酸青藤碱多囊脂质体混悬液。
2．3．2均匀设计试验优化处方：根据单因素考察以
及文献报道口]，选择内水相中药物浓度(X，)、膜稳定
剂用量(X。)、内水相的pH值(X。)、TO用量(X。)以
及内水相中PBS质量浓度(X。)为考察因素，每个
因素选取5个水平，其他采用固定条件，平行操作，
应用U。。(105)表进行均匀试验设计。以包封率(满
分100分，占60％)和多囊形态(满分100分，共占
40％。其中囊圆整度30分：圆整光滑30分，少数不
规则20分，大多不规则10分；均匀度30分：大小均
匀30分，比较均匀20分，不均匀10分；成型性40
分：全部成型无碎片40分，大部分成型尚有少量碎
片30分，部分成型但碎片较多20分，极少成型大量
碎片10分)为指标，按综合评分y=包封率×60％+
多囊形态×40％评价，试验安排及结果见表1。
表1 U。．(1旷)均匀设计及结果
Table1 Designa dresultsofUlo(105)uniform
试验号
x1／ x2／
x3
(啦·mL一1)(m聃l·L-1)
‰／Xs／ Y
(mmd·L-1)(mol·L-1)综合评分
l 1(10) 3(30)4(6)5(1S) 9(60) 65．3
2 2(10) 6(35)8(7)lO(30)7(50)64．3
3 3(15) 9(50)1(5．5)4(10)5(40)70．4
4 4(15) 1(20)5(6．5) 9(30) 3(30)72．4
5 5(20)4(30)9(7．5 3(10) 1(抽)81．6
6 6(20) 7(40)2(5．5) 8(20) 10(60)78．5
7 7(25) i0(50)6(6．5) Z(5) 8(50)73．4
8 8(25) 2(Z0)10(7．5)7(20) 6(40)68．3
9 9(30) 5(35)3(6) l(5)4(30)66．3
10 10(30)8(40)7(6．5) 6(15) 2(20)68．9
将数据输入计算机，用DPS数据处理软件分析结
果，用二次多项式逐步回归，得回归方程：y=17．5163+
19．1522X3—0．0167X4～0．6777X5+0．0096
X52—0．0009X1X‘一0．2522X2X3+0．0425
X2X5—0．2551X3X5，R=0．968，s=0．00045，P<
0．01，F检验通过，各因素优化值为Xl=23．02，
Xz=21．76，X3=7．98，XI=10．19，X5=21．50。
万方数据
·1160· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
根据优化条件结合实验具体情况，最终选择处方
为药物质量浓度23mg／mL，稳定剂用量为22retool／
L，pH值为7．5，T0用量为10mmol／L，PBS浓度为
20mmol／L，代入方程，得优化预测值y=89．9。
2．4多囊脂质体的粒径和形态：通过光学显微镜观
察，可见多囊脂质体呈现光滑圆整的球体状，内由很
多小囊泡组成，见图2。计数500个多囊脂质体，测
定粒径，其中最大粒径为38．5bLm，最小粒径为3
弘m，80oA以上分布在20--一30}￡m，呈近似正态分布，
见图3。
2．5验证试验：按优选处方，制备3批盐酸青藤碱
多囊脂质体，观察其形态并测定包封率，结果见表
2，与预测值基本接近，且重现性较好。
图2盐酸青藤碱多囊脂质体的光学显微镜图
Fig．2LightmicrograghofsinomeninehydrochIoride
multivesicularllposomes
50
40
重30
篓20
一I -～
图3盐酸青藤碱多囊脂质体的粒径分布图
Fig·3Sizedistributionofsi omeninehydrochloride
muItivesicuIarliposomes
表2 3批样品的形态和包封率测定结果
Table2 Apperencea dencapsulationeff ciency
ofthreebatchesofsamples
2．6 体外释放行为考察：取制备所得盐酸青藤碱多囊
脂质体悬液，经离心洗涤去除外水相中药物，沉降的盐
酸青藤碱多囊脂质体颗粒以0．9％氯化钠溶液稀释至
20mL，密封，置于37℃恒温水浴中，50r／min振荡，
分别于0、0．5、4、8、12、24、48、72、96、120、168h取
样，微孔滤膜滤过后测滤液中药物质量浓度，计算各
时间点累积释药率，结果见图4。可见释药曲线符合
Higuehi方程Q=7．18t1儿一2．14，，．=0．992，释药
ttl2为52．7h，具有良好的缓释性能。
母＼
需
糯
鞋
匿
磷
t／h
图4盐酸青藤碱多囊脂质体的体外释放曲线
(万=3，；士s)
Fig．4Releaseprofileofsinomeninehydrochlorlde
frommultivesicularliposomes(一=3，；±s)
3讨论
相对传统脂质体，多囊脂质体的脂质成分中除
了磷脂等两性磷脂外，尚需加入至少1种中性磷脂
如三油酸甘油酯，它们无成膜能力但能填充于脂质
双分子层交汇处的疏水空间，稳定交叉处的连接，还
能以小油滴形式分散在水相隔室中，使脂质体包封
药物后具有不连续的药物溶液囊泡，因而具有更多
的包封容积和更大的粒径[78]。
目前国内外用于制备多囊脂质体的方法主要为
复乳法，因而形成稳定的复乳至关重要。处方的筛选
过程中发现，除了需在油相中加入膜稳定剂外，在水
相中也应加入辅助乳化剂稳定复乳，否则形成的复
乳不稳定，除去有机溶剂后易破裂而无法形成多囊
脂质体。制备初乳时油水两相比亦有一定影响，以二
者比例为1时更稳定。其次，内水相的pH值对膜的
稳定性和包封率也有一定影响，pH值较高时所得
多囊脂质体更稳定，包封率更高，这可能与pH值影
响药物的跨膜转运及膜的荷电性有关凹]。另外，在内
水相中加入一定质量浓度的蔗糖，既可作为渗透压
调节剂，避免膜内外渗透压差过大而导致破裂[10。，
又能增加内水相的黏度，提高稳定性。
多囊脂质体的膜是随着有机溶剂的挥发在原油
相部位形成的，制备温度及溶剂挥发速率直接影响
多囊脂质体的形成。制备时温度太高或太低，除有机
溶剂速度过快或过慢，都容易造成复乳在转化成多
囊脂质体之前即已破裂，最终无法形成多囊脂质体。
在制备过程中，最好始终保持相同的温度，避免介质
的表面张力以及表面活性剂的HLB值随着温度的
变化而发生变化，影响复乳的稳定性[1¨。本研究过
程中考察了不同温度条件下的成囊情况，最终选择
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1161·
始终控制温度为30℃，所得复乳较稳定，囊形较好。
多囊脂质体粒径较大，对机械损伤、挤压较为敏
感，采用低速离心即能方便有效地达到分离的目的。
本实验考察了不同离心转速对包封率的影响，最终
确定的条件为2500r／min离心5min。 一
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复合酶法提取丹参中丹参素的研究
杨皓明，齐崴，何志敏。，王红蕾
(天津大学化工学院化学工程研究所，天津 300072)
摘要：目的研究酶在丹参提取过程中的作用，确定不同因素对酶解提取效果的影响。方法采用单因素实验方
法与紫外检测分析方法，以丹参素提取率为评价指标，对原药粒度、酶用量、固液比、第一步酶解时间及第二步水提
时间5个工艺参数分别进行实验，以确定酶法提取的最佳工艺条件。结果 酶法提取丹参素的最佳工艺条件为：酶
解温度50℃；pH=4．6；粒度为20～35目I酶底物质量比1t 200；第一步酶解时间为80rain，固液比为I，15；第二
步水提时间为40rain，固液比为1：9。结论通过本工艺得到的丹参素提取率为84．61％，且工艺条件温和，对设
备要求低，不仅可以降低能耗，还可以避免多糖类物质的糊化，并减小丹参素在提取过程中被氧化的可能。
关键词：丹参素；酶提取；工艺条件
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1161一04
Processofmulti—enzymeassistedxtractionofDa shensufromSalviamitiorrhiza
YANGHao—ming，QIWei，HEZhi—rain，WANGHong—lei
(ChemicalEngineeringResearchCenter，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，
TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectofenzymeinthextractionofSalviamitio彘izaandthein—
fluenceofdifferentfac orsnenzymaticextraction．Methodsonofactorialexperimentsw reemployed
toexaminetheffectsofthesubstratesiz ，enzymeconsumption，ratioofsolidtoliquid，1“enzymaticex—
tractiontime．and2ndwaterxtractionmenthextractionofS．mitiorrhiza．Ultraviolet—visiblespec—
trophotometrywasusedtoanalyzethresultsandDanshensuxtractionratewasregardedasstandard．
ResultsThedatashowedthatthehighestDanshensuxtractionrate(84．61％)couldbea hievedat：t=
50℃，pH=4．6，granularity一20—35meshes，E—S=1：200，1“enzymaticextractionme=80min，
S—L=1：15，2们waterextractiont me=40min，S—L一1：9．ConclusionThisprocesscouldbeconducted
收稿日期：2007一10—30
基金项目：天津市应用基础研究计划面上项目(05YFJMJC09500)
作者简介：杨皓明(198l一)，男，天津市人，天津大学化工学院2003级硕士研究生。
*通讯作者何志敏Tel：(022)27407799E—mail：zhe@tiu．edu．cn
万方数据
盐酸青藤碱多囊脂质体的制备及其释放特性研究
作者： 姜素芳， 姚瑶， 陶昱斐， 丁燕飞， 向璧妤
作者单位： 姜素芳,向璧妤(湖南师范大学医学院,湖南长沙,410006)， 姚瑶,陶昱斐,丁燕飞(中南大学
药学院,湖南长沙,410006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
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