全 文 ：“获“ 水 J。· ;。 。 : 。 , J` 。 。 。。 ; 。 r。 : , r , : · ,。。 。。 & * · 、 。 。 :。 , , ,二 : , ( 4 ) 17 一 1。
金苞花茎段的离体培养 ’
蒋泽平 朱鹿鸣
《江 苏省 植物徽繁殖技术中心 》
金苞花 ( p a e h y s t a e h夕s 落“ t e a N e e s ) ,
又称黄虾花 , 是爵床 科 ( A e a 牲云孔a e e a e ) 中
具有较高观赏价值的花灌木。 花形奇特 , 金
黄色 , 花期长 , 在适宜条件下 , 可全年开花 。
为了快速繁殖此种花卉 , 曾有用金苞花茎尖 、
腋芽组织培养成功的报道 cl, 2〕 , 但往往在继
代培养中出现落叶 、 退化现象 , 影响了快繁
速度 。 为此 , 我们改进培养方法 , 对继代繁
殖过程中出现的落叶 、 退化现象加以抑制。
本文以金苞花茎段为材 料 , 探 讨 了 I A A 、
B A 对其茎段离体培养的增殖和生长 效应 。
1 材料和方法
1
。
1 无菌材料的获得
取 3 年生金苞花植株茎段 , 先用自来水
冲去表面脏物 ,置 70 %酒精溶液中浸 3 0秒钟 ,
再放入 0 . 1%升汞液 中消毒 7~ 10 分钟 , 并用
无菌水冲洗 3 ~ 5次 。 然后在无菌条件下 , 将
外植体接种于人工配制的培养基上 , 且先在
8 0 ~ 10 0 0勒克斯弱光下培养 15 天 , 后放 入
光强 2 0 0 0勒克斯 、 温度 28 士 2 ℃的培 养 室 ,
每月继代 1次。
1
。
2 试验方法
1
.
2
.
1 基本培养基筛选 : 先将外植体在M S
培养基 (不加任何激素 ) 培养 1个月 , 然后在
激素配 比 I A A O . l p p m (下同 ) + B A I . o p p m
情况 下 , 用 M s 、 12/ M s 、 B 。 、 W p M 4种 基
本培养基试验 , 调查外植体的分化早迟 、 分
化率 、 试管苗芽 、 叶色泽 、 1个月苗高生长
情况 。
1
。
2
。
2 激素效应 的研究 : 采用 I A A O , 0。 1 ,
0
.
2
, 。 . 5 , 1 . o p pm的 5个浓度梯 度 , B A为
0
,
0
。
5
,
1
。
0
,
2
。
0
,
4
。
o p P m的 5 个浓度梯
度及 IA A与B A 的浓度组合 , 每 个处理重复
3次 , 1个月后每个处理随机抽取 10 瓶 , 调查
外植体的增殖和分化苗的生长高度。
1
。
2
。
3 对继代培养中出现的落叶 、 退 化 的
抑制 : 采用以下 3种方法进行试验 , ( 1 ) 试
管一次成苗法 , 将试管苗直接转 移 到 ls/ M S
+ B ^ 。 。 。 : p pm + I A A 。 。 : 。 p pm培养基上 , 让
其先长根 , 后长芽 , 再继代时 , 可连续切割 ,
( 2 ) 无菌枝微型扦插法 , 即剪成一芽 一 叶
扦插 , (3 ) 适当增加培养基 中可溶 性糖的浓
度 , 使其由3%上升至 3 。 5% 。 每种方法重复
3 次 , 1个月后随机抽样 , 调查外植体的增殖
系数 、 平均苗高 、 叶的长度和宽度 。
2 结果与分析
2
.
1 基本培养基的筛选
在相同激素配比 的 情 况 下 , 用 M s 、
辘M S 、 B 。 、 W P M 4种基本培养基试 验 。 结
. 移栽工 作中曾得到石鼎 新 、 倪竞德等 同志 的帮助 ,
谨此致谢 。
果表明 (表 1 ): l s / M S基本培养基较好 , 外
一镇体出苗快 , 分化早 , 分化量多 , 幼苗蒸 、
叶生长浓绿 ; M S和M P M居中 , B 。最差 , 外
植体分化迟 , 分化量少 , 幼苗茎 、 叶生长细弱 。
表 1 基本培养基讨试管苗分化生 长的 影响
物高粉明苗派基 本培养基 分化 早迟( 天 ) 分化率(% ) 试管苗茎叶色泽
90827弘巧182份_1/ 2 M S
M S
W P M
B`
}
浓绿 , 茎粗
绿 , 茎较粗
色较淡 , 茎较细
色淡 , 茎细
势 , 当 B A 浓度在 O~ 1。 Op p m范围内 , 分化
苗 的 平均苗高呈上升 趋 势 ; B A 浓度超过
2
.
Op pm时 , 分化苗高生长受抑制 , 而且随着
浓度的提高表现出明显的负效应。
外植体分化苗高生长最佳激素组 合
I鑫A 。 . Z p pm + B A : . 。 p pm , I A A 与B A最佳
比例为 :1 50
表 2 不同浓度邢 A A 或 B A 与
外桂体分化苗高生长
2
.
2 I A A
、
B A激素的浓度 及组合 对 试管
苗增殖和生长效应
2
0
2
.
1 I A A
、
B A 的浓度及组合对试管苗增
殖效应 : 单一激素效应的研究 结 果 表 明 :
I A A对金苞花茎段外植体的增殖作用微弱 ,
略高于无附加激素的对照 , 且浓度之间无显
著差异 ; 而力人对茎段外植体的增殖作 用则
表现出显著的浓度梯度效应 , 即在供试浓度
范围内 , 随着 B A 的浓度增加 , 其外植 ,体 的
增殖倍数呈上升趋势 。 I A A 与B A 的 组合效
应 : I A A 在 0~ o . Zp p m 范围内 , 芽 的 增 殖
取决于 B A 的浓度 : 但 B A的浓度过大或过低
都不利于芽的分 化 , 在 1 . 0~ 2 . Op p m 范围
内 , 随着浓度的增加 , 增殖倍数也增加 , 其
中以 I A A 。 。 : p pm + B A : 。 。 p p m为最佳 , I A A
与 B A 比例为 1 ’ o9
2
.
2
。
2 I A A
、
B A 浓度与组合对试管苗生长
效应
a I A A 浓度对外植体分化苗的高生 长
影响 (表 2 ) 。 当 I A A 浓度小于或等于 o . Z p pm
时 , 随着 I A A 浓度的提高 , 分化苗的高生长
迅速 , I A A浓度大于 0 . 2 p p m时 , 分化苗的高
生长受到抑制 , 同时基部伤口处易形成愈伤
组织 。
b B A 浓度对外植体分化苗高 生 长 的
影响 (表2 ) 。与 I A A 表现出相同 的变 化 趋
1 8
, 号
}
1
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,
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3
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}浓 度 { 。 { n . { 。 。 } 。 , 1 . 。
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2
.
2
.
3 不同的继代培养方 法 对试 管 苗 落
叶 、 退化的抑制 : 对金苞花茎段外植分化的
试管苗 , 在继代时采用 3 种不同方法 , 结果
表明 (表 3 ) : 3 种处理方法对金苞花试管
苗的繁殖系数 、 平均苗高 、 叶片的长度和宽
度都有一定的影响。 试管一次成苗法 , 可提高
试管苗的繁殖系数及质量 (包括苗高 , 苗粗 、
叶长度和宽度 ) ,无菌枝微型扦插法和适当增
加可溶性糖浓度的方法 , 其试管苗繁殖系数
和叶长度 、 宽度的增加与对照差异均显著 ,但
苗高无显著差异 ( O。 01 水平 ) 。 试管一次成
苗法 , 无论在繁殖系数 、 平均苗高 , 还是叶
片的长度和宽度上均与其他两种方法有显著
差异 , 即试管一次成苗法效果好于其他两种
方法 。 无菌枝微型扦插法在试管苗的繁殖系
数 、 叶长度均优于适当增加可溶性糖浓度的
方法 ,而在平均苗高和叶宽度上无显著差异 。
2
.
2
.
4 生根与移栽 : 选高 2厘米左右的健壮
芽苗 , 先用 lz/ M s 十 N A A 。 . 。 p pm培 养 7 天 ,
即试管芽苗已具根原基 , 将带有根原基的芽
苗直接移至含有等体积的碧糠和土的混合物
的营养钵中 , 栽后第1次浇透水 , 用塑 料 薄
膜密封 , 膜内保持相对湿度在 90 % 以上 , 温
度 28 ℃左右 , 这样栽后 15 天 即可生根 , 并开
表 3 不 同 继 代 培 养 方 法 对 试 管 苗 的 影 响
3
.
1 6
1
。
43
*
1
。
1 6
.
O
。
8
.
0
。
8 8
0
。
24
t
0
。
1 0
今
0
。
0 6
.
{ AB C 对 照 备 注
增 均 值 3 。 4 s3 . 1 2. 7 81 。 0 5F = 1 97 8
殖 F o 。 0 1 , 7 。 5 9系 差 异 2 。 7 9 . * 1 。 82 . , L S D o 。 0 1 = 0 。 1 65
数 均 值 0 。 9 7 . 中
(倍 ) 0 。 63 牵
苗 1 6 2 。 0 1 。 7 3 F = 4 9。 2
高 F o . o x 二 7 。 弓9( 厘米 ) 差 异
1 0
。
27 L SD o
.
0 1 = 0
.
3 74
1 1
.
8
.
叶 均 值 0 。 8 8 0 。 83 0 。 7 8 0 。 6 2 F 二 1 5 0 。 8
长 F o . 0 1 二 7 . 5 9
( 厘米 ) 差 异 0 2 t 0 。 2 1 . 0 。 16 . L S D o . o i = 0 。 0 3 7 4
0 1 0
。
0 9
今
0 0
.
叶 均 值 0 。 4 0 0 。 3 5 0 。 3 2 0 . 2 4
宽
( 厘米 ) { 0 . 1 6 * 0 。 11* 0 。 08 ,
差 异 { 0。 0 8 * 0 。 0 3
{… 0 . 0 5 ·
始生长` 从移栽到开花只需 2 个月 。
3
“ 结论与讨论
a 植物生长素 I A A促进金苞花茎 段外
植体的增值效应不显著 , 但能有效地促进外
植体分化苗的高生长 。 这与叶叙丰 、 杨乃博
等 ( 1 9 8 9) 的研究结果 〔 3 〕相吻合 , 说 明 生
长素的增殖效应是微弱的 , 而生长效应是显
著的 。 B A对金苞花茎段外植体的增殖 和 生
长效应均显著 , 这与徐明广 ( 19 8 9 ) 绒毛白
蜡嫩梢培养结果 〔 4〕是一致的 。 说明细胞 分
裂素在微体繁殖中的增殖和生长效应是一条
普遍的规律 。
b 尽管生长素 I A A 对金苞花茎段外 植
体的增殖效应微弱 , 但它与细胞分裂 素 B A
共同作用于外植体时却具有活化增效作用。
这与李玉龙等 ( 1 9 8 8 ) 在含有 B A : . 。 p p m +
I A A 。
. Z p p m的 w P M培养基上 , 用 牡丹 腋
芽 、 嫩叶 、 叶柄培养的愈伤组织 , 分化的芽
数多 , 生长快的 结 果〔 5〕相 同 。 邢 世 岩 等
( 1日8 9) 在苦徕嫩梢培养的增殖研 究 中 指
出 , 尽管生长素的单独效应并非很大 , 但细
胞分裂素和生长素之间有极显著的 交 互 效
应 〔 6 〕。 本文所揭示的 信 息 I A A 与 B A的 配
比为 i : 9、 I A ^ 。 . : p pm + B A : 。 : p p m组 合是
获得最大增殖倍数的最佳比例及最佳组合 。
高生长的最佳 激 素 组 合 为I A A o . : p p !u +
B A :
. 。 P pm , 最佳比例 、 ( I A A , B A ) 为 i 巧 ,
这为对其组合的交互效应的进一步研究奠定
〕 基础 。 .
木本植物花卉在试管繁殖 中 , 往往
在叶柄处出现离层 , 而使叶片脱落和枯萎 ,
影响叶片的光合作用 , 使快速繁殖受到严重
影响。 本文所采用的儿种措施 , 对其他木本
植物的微繁 , 有一定的参考价值 。
4 参考文献
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培养及快速繁殖 . 植物生 理 学 通 讯 , 1 , 8 , ( 2) :
弓6 .
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素探讨 . 园 艺学报 , 1 , 8 9 , ( 3 ) : 2 3 3~ 2 36 .
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其 内源激 素状况的关 系 。 植物生理 学 通 讯 , 1 9 8 9,
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2 6~ 30
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业大学学报 , 1 9 89 , 2 0 ( 3 ) : 6 1~ 6 5 .
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养 . 北京 : 科学 出版 社 , 1夕8 8 , 1 7 6~ 1 7 9 .
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的增殖效应 。 山 东农业大学学报 , 1 9 89 , 2 0 ( 3 ) .
弓6 ~ 6 0 .