全 文 ：药理学与临床药学
龙须藤总黄酮对膝关节炎模型大鼠的抗炎作用
林丽微，周毅生，周臻，孟江，孙志胜
(广东药学院 中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 考察龙须藤总黄酮对膝关节炎模型大鼠的抗炎作用。方法 采用硅胶柱层析方法从龙须藤
乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到龙须藤总黄酮，对膝关节炎症模型大鼠进行药物干预，以关节
直径、足跖容积等指标评价龙须藤总黄酮对该模型的抗炎作用。结果 龙须藤总黄酮给药剂量为 1． 7 ×
10 －3 g /(kg·d)时的抗炎作用与模型组比较差异有统计学意义(P ＜ 0． 01) ，与阳性对照药物阿司匹林给
药剂量为 1． 5 × 10 －1 g /(kg·d)比较差异无统计学意义(P ＞ 0． 05)。结论 龙须藤总黄酮对膝关节模型
大鼠的抗炎作用显著，具有良好的应用前景。
关键词:龙须藤总黄酮;膝关节炎症模型;抗炎作用
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2014． 05． 017
文章编号:1006-8783(2014)05-0608-04
Anti-inflammatory effect of total flavones from Bauhinia championii on the rat model of knee
osteoarthritis
LIN Liwei，ZHOU Yisheng，ZHOU Zhen，MENG Jiang，SUN Zhisheng
(School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract:Objective To study the anti-inflammatory effect of the total flavones derived from Bauhinia
championii on rat knee osteoarthritis． Methods Total flavones were separated from Bauhinia championii by
silica gel column chromatography，and their anti-inflammatory effect was demonstrated by the rat model of
knee osteoarthritis． The indexes of knee diameter and paw volume were observed． Ｒesults Compared with
the model group，the anti-inflammatory effect was significantly different in the total flavones-treated group at
a dose of 1． 7 × 10 －3 g /(kg·d) (P ＜ 0． 01)． However，there was no significant difference between the
total flavones from Bauhinia championii and the positive drug 1． 5 × 10 －1 g /(kg·d)Aspirin treatment (P
＞ 0. 05)． Conclusion Total flavones derived from Bauhinia championii display a strong anti-inflammatory
effect on rat knee osteoarthritis，which provides an evidence for clinical application．
Key words:total flavones from Bauhinia championii;rat model of knee osteoarthritis;anti-inflammatory
effect
收稿日期:2014-06-18
作者简介:林丽微(1989—)，女，在读硕士研究生，Email:may． may24@ 163． com;通信作者:周毅生(1957—) ，男，教授，主要从
事药物新剂型及新技术研究，Email:yishzhou@ aliyun． com。
网络出版时间:2014-10-14 9:55 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． Ｒ． 20141014． 0955． 001． html
龙须藤药材为豆科羊蹄甲属植物龙须藤
［Bauhinia chaampionii (Benth．)Benth．］的干燥藤
茎，别名梅花入骨丹、羊蹄藤、乌郎藤、过岗圆龙、九
龙藤等，在浙江、江西、福建、广东、广西、湖南、湖北、
贵州等省区均有分布［1 － 2］。龙须藤有抗炎、镇痛、抗
感染、抗血小板凝集等作用［3 － 4］。大量研究表明龙
须藤乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位是龙须藤抗炎
镇痛、治疗类风湿性关节炎的有效部位［4 － 8］，但尚未
见有关龙须藤的单体药效、龙须藤总黄酮药效的文
献报道。本文以硅胶柱层析方法分离得到龙须藤总
黄酮，并对膝关节炎症模型大鼠进行药物干预，以关
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Oct． 2014，30(5)
节直径、足跖容积为指标，考察龙须藤总黄酮的抗炎
作用，为龙须藤总黄酮的开发应用提供依据。
1 实验材料
1． 1 主要仪器
Prominence 高效液相色谱仪(日本岛津) ;
BP211D分析天平(德国赛多利斯有限公司，d = 0．
01 mg) ;AY120 分析天平(日本岛津，d = 0． 1 mg) ;
BS系类电子天平(上海友声衡器有限公司制造) ;
游标卡尺(上海恒胜工具有限公司) ;YLS-7C 足跖
容积仪(广州市飞迪生物有限公司) ;紫外光灯(上
海顾村电光仪器厂) ;ＲE-52A 旋转蒸发仪(上海亚
荣生化仪器厂);SB-100D 超声波清洗机(宁波新芝
生物科技股份有限公司) ;501 超级恒温水浴槽(江
苏金坛市宏华仪器厂)。
1． 2 药材与主要试剂
龙须藤药材购于广东清平药材市场，经广东药
学院中药学院李书渊教授鉴定为豆科苏木亚科羊蹄
甲属植物龙须藤 Bauhinia chaampioni(Benth．)Benth．
的干燥藤茎;3’，4’-亚甲二氧基-5’，5，6，7-四甲氧基黄
酮、3’，4’，5’，5，7-五甲氧基黄酮(自制，面积归一化法
测得质量分数≥98． 0%);碘乙酸钠(Aladdin试剂有限
公司，质量分数≥98． 0%);阿司匹林(湖南新汇制药
股份有限公司，批号:130903)。
1． 3 实验动物
SPF级 SD大鼠，体质量(280 ± 20)g，广州中医
院大学实验动物中心提供，生产许可证号 SCXK
(粤)2013 － 0020。
2 方法
2． 1 龙须藤总黄酮的分离
取干燥的龙须藤药材 3 kg，粉碎，按药材与提取
溶剂比例 1∶ 6(g∶ mL)，加入 70%(φ)乙醇 18 L，回
流提取 2 次，每次 2 h，合并提取液后过滤并减压回
收乙醇，得到 0． 75 kg龙须藤的 70%乙醇提取浸膏。
将浸膏用水分散后依次使用石油醚、二氯甲烷、乙酸
乙酯、正丁醇溶液萃取。乙酸乙酯萃取液减压回收
乙酸乙酯，得到乙酸乙酯萃取浸膏 135 g。取该浸膏
为上样样品，上样量与硅胶用量为 1∶ 30(g∶ g)，进行
硅胶柱层析分离。采用溶剂系统为二氯甲烷 /乙酸
乙酯(8∶ 1 ～ 4∶ 1)梯度洗脱，TLC 跟踪分析，合并相
同的部位。最终分离得到龙须藤总黄酮 3． 7 g(经
HPLC 测定，龙须藤总黄酮中 3’，4’-亚甲二氧基-
5’，5，6，7-四甲氧基黄酮含量为 21． 3%，3’，4’，
5’，5，7-五甲氧基黄酮含量为 46． 7%，两者的总含
量达 68． 0%)。
2． 2 造模
在确定龙须藤治疗大鼠膝关节炎的起效时间与
达到抗炎药效作用的用药周期后，使用从龙须藤乙
酸乙酯萃取部位分离得到的龙须藤总黄酮对模型大
鼠给药。随机抽取 8 只大鼠为空白对照组，其余在
膝关节腔内注射碘乙酸钠进行膝关节炎模型的造
模，碘乙酸钠的质量浓度为 1 mg /mL，注射量为 0． 1
mL /只，将其随机分为模型组、阳性对照组、总黄酮
组、乙酸乙酯组，每组各 8 只，灌胃给药;空白对照组
自由饮食，模型组给予生理盐水，阳性对照组给予阿
司匹林水溶液，总黄酮组给予龙须藤总黄酮的水溶
液，乙酸乙酯组给予乙酸乙酯萃取部位的水溶液。
2． 3 给药方法
参考广东省药品检验所的龙须藤质量标准［9］，
折算成大鼠的生药给药剂量为 1． 4 g /(kg·d) ，即
乙酸乙酯萃取物给药量为 6． 3 × 10 －2 g /(kg·d) ，龙
须藤总黄酮的给药剂量为 1． 7 × 10 －3 g /(kg·d)。
参考阿司匹林说明书中起抗炎镇痛消肿作用的成人
用量，折算成大鼠的给药剂量为1． 5 ×10 －1 g /(kg·d)。
2． 4 给药后大鼠体质量、关节直径、足趾容积的变化
实验前称质量，并在大鼠右后肢膝关节处做好
标记，给药后每 4 天测体质量、关节直径、足跖容积，
记录结果。
2． 5 统计学处理
应用 SPSS19． 0 统计软件，实验结果用 珋x ± s 表
示，采用独立样本 t检验，P ＜ 0． 05 为差异有统计学
意义。
3 结果
3． 1 给药后大鼠关节直径的变化
给药后第 8 天，总黄酮组和乙酸乙酯组与模型
组大鼠关节直径比较差异均有统计学意义(P ＜
0. 05) ，与阳性对照组比较差异无统计学意义(P ＞
0. 05) ;总黄酮组与空白对照组比较差异无统计学
意义(P ＞ 0． 05)，而乙酸乙酯组与空白对照组比较
差异有统计学意义(P ＜ 0. 05) ，总黄酮组关节直径
小于乙酸乙酯组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ，提
示龙须藤总黄酮的抗炎作用与乙酸乙酯萃取部位比
较作用较好。给药后第 12 天，总黄酮组、乙酸乙酯
组与模型组比较差异均有统计学意义(P ＜ 0． 05)，
与空白对照组、阳性对照组比较差异均无统计学意
义(P ＞ 0. 05) ，说明龙须藤总黄酮和乙酸乙酯萃取
906第 5 期 林丽微，等．龙须藤总黄酮对膝关节炎模型大鼠的抗炎作用
部位对膝关节炎症模型大鼠具有较好的抗炎作用。
3． 2 给药后大鼠足跖容积的变化
给药后第 4 天，总黄酮组和乙酸乙酯组与模型
组大鼠足跖容积比较差异均有统计学意义(P ＜
0. 05) ，与阳性对照组比较差异无统计学意义(P ＞
0. 05) ;给药后第 12 天，总黄酮组、乙酸乙酯组与空
白对照组比较差异均无统计学意义(P ＞ 0． 05)。说
明龙须藤总黄酮和乙酸乙酯萃取部位对膝关节炎症
模型大鼠具有较好的抗炎作用。
表 1 各组大鼠关节直径的变化
Table 1 Knee diameter changes in each group of rats (珋x ± s，n = 8) D /cm
组别 造模前 造模后
给药后
4 d 8 d 12 d
空白对照组 0． 434 ± 0． 004 0． 437 ± 0． 003 0． 436 ± 0． 003 0． 437 ± 0． 004 0． 437 ± 0． 003
模型组 0． 435 ± 0． 005 0． 499 ± 0． 025＊＊ 0． 495 ± 0． 022＊＊ 0． 490 ± 0． 3019＊＊ 0． 481 ± 0． 011＊＊
阳性对照组 0． 432 ± 0． 004 0． 491 ± 0． 032＊＊ 0． 484 ± 0． 030＊＊ 0． 446 ± 0． 100▲▲ 0． 439 ± 0． 004▲▲
龙须藤 总黄酮组 0． 434 ± 0． 004 0． 498 ± 0． 033＊＊ 0． 485 ± 0． 025＊＊ 0． 448 ± 0． 016▲▲# 0． 438 ± 0． 005▲▲
乙酸乙酯组 0． 435 ± 0． 003 0． 497 ± 0． 035＊＊ 0． 491 ± 0． 030＊＊ 0． 464 ± 0． 025＊▲ 0． 442 ± 0． 018▲▲
与空白对照组比较:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较:▲P ＜ 0． 05，▲▲P ＜ 0． 01;与乙酸乙酯组比较:#P ＜ 0． 05。
表 2 各组大鼠足跖容积变化
Table 2 Paw volume changes in each group of rats (珋x ± s，n = 8) V /mL
组别 造模前 造模后
给药后
4 d 8 d 12 d
空白对照组 1． 434 ± 0． 04 1． 455 ± 0． 040 1． 438 ± 0． 025 1． 456 ± 0． 032 1． 471 ± 0． 03
模型组 0． 431 ± 0． 03 1． 593 ± 0． 070＊＊ 1． 664 ± 0． 059＊＊ 1． 606 ± 0． 008＊＊ 1． 590 ± 0． 08＊＊
阳性对照组 1． 435 ± 0． 06 1． 570 ± 0． 115＊＊ 1． 550 ± 0． 089＊▲▲ 1． 473 ± 0． 026＊＊▲▲ 1． 471 ± 0． 03▲▲
龙须藤 总黄酮组 1． 430 ± 0． 04 1． 597 ± 0． 090＊＊ 1． 555 ± 0． 118＊▲ 1． 475 ± 0． 049＊▲▲ 1． 476 ± 0． 03▲▲
乙酸乙酯组 1． 434 ± 0． 04 1． 592 ± 0． 108＊＊ 1． 573 ± 0． 099＊▲ 1． 483 ± 0． 093＊＊ ▲ 1． 474 ± 0． 06▲▲
与空白对照组比较:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较:▲P ＜ 0． 05，▲▲P ＜ 0． 01。
4 讨论
骨关节炎模型的常用造模方法有［10］:①关节腔
内注射化合物诱导骨关节炎;②骨关节炎制动造模;
③前交叉韧带横断模型;动物半月板切除骨关节炎
模型;⑤骨关节炎负重模型;⑥自发性骨关节炎模
型。骨关节炎制动造模方法需要固定动物肢体，而
操作过程中动物不同程度的挣扎造成肢体损伤，差
异大;前交叉韧带横断模型、动物半月板切除骨关节
炎模型、骨关节炎负重模型的建立均需要进行手术
操作，对操作者要求高;自发性骨关节炎模型的动物
多为大型动物和转基因动物，造模成本高;而关节腔
内注射化合物诱导骨关节炎的造模方法简单易行、
对操作者要求低、操作误差小、成本低，故本实验采
用关节腔内注射化合物诱导骨关节炎的造模方法。
研究表明，龙须藤乙醇提取物的乙酸乙酯萃取
部位具有显著的抗炎镇痛效果［6，11 － 13］，是龙须藤治
疗类风湿性关节炎的抗炎有效部位。本实验对龙须
藤乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进一步分离纯化
得到龙须藤总黄酮，对龙须藤的乙酸乙酯萃取部位
及龙须藤总黄酮的抗炎药效进行比较，实验结果表
明:给予龙须藤总黄酮后模型大鼠的体质量增长较
快，与健康大鼠相当;龙须藤总黄酮、龙须藤乙酸乙
酯萃取部位对膝关节模型大鼠均具有较好的抗炎作
用，起效周期短，快速达到抗炎效果，但总黄酮的给
药量远低于乙酸乙酯萃取部位，且给药中期龙须藤
总黄酮的抗炎药效较佳;龙须藤总黄酮在给药剂量
为 1． 7 × 10 －3 g /(kg·d)时与阳性对照组药物阿司
匹林给药剂量为 1． 5 × 10 －1 g /(kg·d)时比较差异
无统计学意义(P ＞ 0． 05) ，提示龙须藤总黄酮达到
与阿司匹林同等强度的抗炎药效时，用量远低于阿
司匹林的常规用量，龙须藤总黄酮的抗炎作用可能
优于阿司匹林。根据龙须藤总黄酮服用量少、药效
高的特点，有望将龙须藤总黄酮开发成中药微型制
016 广东药学院学报 第 30 卷
剂，方便关节炎患者携带与服用。
本实验仅测定了给药后各组体质量、关节直径
和足趾容积的变化，初步表明龙须藤总黄酮对膝关
节炎模型大鼠的抗炎作用较强，今后可进一步对血
清及关节液中的炎症介质或细胞因子进行检测，探
讨龙须藤总黄酮发挥抗炎药效、治疗关节炎的药理
作用机制。
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(责任编辑:幸建华
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)
治疗慢性腹泻的新药
α-乙基-鹅去氧胆酸(obeticholic acid，OCA) ，为半合成的鹅去氧胆酸(CDCA)的衍生物，可激活法尼酯 X 受体
(FXＲ) ，具有抗淤胆、抗纤维化的效果。近期，伦敦帝国学院医学系研究人员对 OCA的一项实验显示 OCA能缓减
胆汁酸腹泻(BAD)患者的症状。研究的相关结果于 2014 年 10 月 20 日发表在《Alimentary Pharmacology and
Therapeutics》网络版上。
BAD是西方人中引起慢性腹泻较常见的原因，但常被医生误诊为肠易激综合征(IBS) ，从而延误治疗。BAD
是由过度分泌胆汁酸所引起的。由胆囊分泌的胆汁进入肠道后，正常情况下会被回肠吸收;而 BAD 情况下，过量
的胆汁会进入到结肠，导致水样大便。该症状可持续数月，给患者的工作及生活造成了严重的困扰。即使患者被
正确诊断为 BAD，但很多人认为当前用于治疗 BAD的药物难以下咽，影响患者的依从性。
本研究小组的研究人员将 28 名患者分为 3 组，第一组为 10 名原发性 BAD患者;第二组为 10 名由吸收不良
引起继发性 BAD患者;第三组为对照组，患者为 8 名其他原因致慢性腹泻患者。研究人员分别对患者用药前 2
周、治疗期(2 周)及用药后 2 周的相关症状进行考察，并在治疗开始及结束时对患者进行血液检查。结果显示
OCA能使原发性 BAD患者的症状得到改善，部分由吸收不良引起继发性 BAD患者的症状得到改善，而对对照组
患者则无效。患者耐受性良好。
已有研究表明，回肠分泌的激素———FGF19 可以调节肝脏胆汁酸的生成，而 BAD 患者体内的 FGF19 的水平
降低。通过本次实验，研究人员认为 OCA 能够恢复 BAD 患者体内的 FGF19 的水平，从而调节肝脏胆汁酸的生
成。由此，研究人员推测 FXＲ激动剂可以有效治疗慢性腹泻，但这一观点还需要进一步的研究来证明。
(Alimentary Pharmacology ＆ Therapeutics，2014;DOI:10． 1111 /apt． 12999 温玉琴 编译)
116第 5 期 林丽微，等．龙须藤总黄酮对膝关节炎模型大鼠的抗炎作用