全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012，24:55-56，65
文章编号:1001-6880(2012)01-0055-03
收稿日期:2010-06-22 接受日期:2010-08-09
基金项目:中央民族大学“111 引智工程”项目资助 B08044;中央
民族大学“985”工程项目资助(MUC985-14，MUC98507-
08) ;北京市教委科技成果转化与产业化项目。
* 通讯作者 Tel:86-10-68932242;E-mail:wangwshu@ gmail． com
龙芽草化学成分研究
武海波，蓝晓聪，王文蜀*
中央民族大学生命与环境科学学院，北京 100081
摘 要:从药用植物龙芽草(Agrimonia pilosa Ledeb)全草的 95%乙醇提取物中分离得到 4 个化合物，通过理化
性质及波谱学方法分别鉴定为豆甾-5-烯-3β，7β-二醇(1)、豆甾-5-烯-3β，7α-二醇(2)、豆甾-3β，6α-二醇(3)和 β-
谷甾醇(4)。化合物 1 ～ 3 均为首次从龙芽草中分离得到。
关键词:蔷薇科;龙芽草属;龙芽草;豆甾二醇;谷甾醇
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
Chemical Constituents from Agrimonia pilosa Ledeb
WU Hai-bo，LAN Xiao-cong，WANG Wen-shu*
College of Life and Environment Science，Minzu University of China，Beijing 100081，China
Abstract:The 95% ethanol extract of the whole medicinal plants Agrimonia pliosa Ledeb was separated by silica gel col-
umn chromatography and thin layer chromatography to afford four compounds，which were identified as stigmast-5-ene-
3β，7β-diol (1) ，stigmast-5-ene-3β，7α-diol (2) ，stigmastane-3β，6α-diol (3)and β-sitosterol (4)on the basis of spec-
troscopic analysis and comparison with the reported data． Compounds 1-3 were isolated from A． pliosa for the first time．
Key words:Rosaceae;Agrimonia;Agrimonia pliosa Ledeb;stigmastane-3β，6α-diol;β-sitosterol
龙芽草(Agrimonia pliosa Ledeb)又名仙鹤草，为
蔷薇科(Rosaceae)龙芽草属(Agrimonia)多年生草
本植物。龙芽草属世界上有 20 余种，欧洲中部以及
苏联、蒙古、朝鲜、日本和越南北部均有分布，我国约
有 4 种，南北各省区均产［1］。现代药理学研究证实，
龙芽草具有收敛止血、截疽、止痢、解毒等作用［2］。
早期文献报道其主要成分有仙鹤草素、仙鹤草内酯、
鞣质、甾醇、有机酸、酚性成分、皂苷、仙鹤草酚(A、
B、C、D、E)等［3］。为研究和开发民族地区天然资
源，我们对产于四川凉山彝族自治区的龙芽草全草
进行了较系统的化学成分研究。从中分离得到四个
化合物，利用核磁共振等现代波谱数据确定了化合
物结构为豆甾-5-烯-3β，7β-二醇(1)、豆甾-5-烯-3β，
7α-二醇(2)、豆甾-3β，6α-二醇(3)和 β-谷甾醇(4)。
化合物 1 ～ 3 均为首次从龙芽草中分离得到。
1 实验部分
1． 1 仪器与材料
JA2003 电子天平(上海恒平仪器厂) ;RE52AA
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂) ;KQ5200E 超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;SHB-B95 型
循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司) ;
BT224S 电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公
司) ;WRR熔点仪(上海精密仪器有限公司) ;JASCO
V-550 紫外可见分光光度计(日本分光公司) ;Bruk-
er-VERTEX 70 FT-IR 红外光谱仪;Bruker ARX 400
超导核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司) ;Agilent
6890N-5975N质谱仪(美国安捷伦科技有限公司)。
95%乙醇，氯仿，丙酮，石油醚，甲醇，乙酸乙酯(均
分析纯，北京化工厂) ;GF254薄层色谱硅胶与 200 ～
300 目柱色谱硅胶(青岛海洋化工有限公司) ;Seph-
adex LH-20(Pharmacia) ;Acetone-d6(北京化工厂) ;
显色剂为 10%硫酸-乙醇。
龙芽草(Agrimonia pliosa Ledeb)采自四川凉山，
由中科院植物研究所陈艺林教授鉴定，标本存放于
中央民族大学生命与环境科学学院。
1． 2 提取与分离
龙芽草全草 1． 45 kg，95%乙醇提取三次，每次
浸泡一周。提取液回收乙醇，得浸膏 50 g。50 g 硅
胶拌匀浸膏，1 kg 硅胶装柱，以石油醚 /乙酸乙酯溶
剂系统经硅胶柱层析，梯度由 30∶ 1 至 1∶ 1 至纯乙酸
乙酯，洗脱共得到 10 个馏分(F1 ～ F10)。F4 静置
后有针晶析出，经 Sephadex LH-20 洗脱，以氯仿 /甲
醇(1∶ 1)为洗脱剂，得到化合物 4(43 mg) ;F8 经硅
胶柱层析，以氯仿 /丙酮(10∶ 1)为洗脱剂，多次柱层
析后薄层制备，以石油醚 /丙酮(5 ∶ 1)为展开剂，连
续展三次，得到化合物 1(8． 4 mg)和 2(49． 1 mg) ;
F9 经硅胶柱层析，以氯仿 /丙酮(8∶ 1)为洗脱剂，多
次柱层析后薄层制备，以石油醚 /丙酮(5∶ 1)为展开
剂，连续展三次，得到化合物 3(11． 1 mg)。
2 结构鉴定
化合物 1 无色胶状物(丙酮) ，薄层检测在紫
外灯 254 nm下无荧光，10%硫酸-乙醇显色加热氧
化后显蓝色。ESI-MS m/z:431［M + H］+。1H NMR
(Acetone-d6，400 MHz)δ:5. 25(1H，brs，H-6) ，3. 80
(1H，brs，H-7) ，3. 56(1H，m，H-3) ，1. 04(3H，s，H-
19) ，0. 91(3H，d，J = 6. 0 Hz，H-21) ，0. 85(3H，t，J =
7. 0 Hz，H-29) ，0. 84(3H，d，J = 6. 6 Hz，H-26) ，0. 80
(3H，d，J = 6. 6 Hz，H-27) ，0. 68(3H，s，H-18) ;13 C
NMR(Acetone-d6，100 MHz) δ:37. 0(C-1，CH2) ，
31. 6(C-2，CH2) ，71. 4(C-3，CH) ，41. 7(C-4，CH2) ，
143. 5(C-5，C) ，125. 4(C-6，CH) ，73. 4(C-7，CH) ，
40. 9(C-8，CH) ，48. 3(C-9，CH) ，36. 4(C-10，C) ，
21. 1(C-11，CH2) ，39. 5(C-12，CH2) ，42. 9(C-13，
C) ，55. 3(C-14，CH) ，26. 4(C-15，CH2) ，28. 4(C-16，
CH2) ，56. 2(C-17，CH) ，11. 9(C-18，CH3) ，19. 1(C-
19，CH3) ，36. 0(C-20，CH) ，18. 8(C-21，CH3) ，34. 0
(C-22，CH2) ，26. 3(C-23，CH2) ，45. 8(C-24，CH) ，
29. 2(C-25，CH) ，19. 7(C-26，CH3) ，18. 9(C-27，
CH3) ，23. 0(C-28，CH2) ，12. 0(C-29，CH3)。以上数
据与文献［4］报导的豆甾-5-烯-3β，7β-二醇基本一致。
化合物 2 无色胶状物(丙酮) ，薄层检测在紫
外灯 254 nm下无荧光，10%硫酸-乙醇显色加热氧
化后显蓝色。ESI-MS m/z:431［M + H］+。1H NMR
(Acetone-d6，400 MHz)δ:5. 55(1H，d，J = 5. 0 Hz，
H-6) ，3. 80(1H，m，H-7) ，3. 54(1H，m，H-3) ，1. 00
(3H，s，H-19) ，0. 93(3H，d，J = 6. 0 Hz，H-21) ，0. 88
(3H，t，J = 6. 9 Hz，H-29) ，0. 84(3H，d，J = 6. 6 Hz，
H-26) ，0. 81(3H，d，J = 6. 6 Hz，H-27) ，0. 68(3H，s，
H-18) ;13C NMR(Acetone-d6，100 MHz)δ:37. 0(C-
1，CH2) ，31. 4(C-2，CH2) ，71. 4(C-3，CH) ，42. 0(C-
4，CH2) ，143. 8(C-5，C) ，123. 9(C-6，CH) ，65. 4(C-
7，CH) ，37. 5(C-8，CH) ，42. 3(C-9，CH) ，37. 4(C-
10，C) ，21. 7(C-11，CH2) ，39. 2(C-12，CH2) ，42. 2
(C-13，C) ，49. 4(C-14，CH) ，25. 9(C-15，CH2) ，28. 3
(C-16，CH2) ，55. 7(C-17，CH) ，11. 7(C-18，CH3) ，
18. 3(C-19，CH3) ，36. 1(C-20，CH) ，18. 8(C-21，
CH3) ，33. 9(C-22，CH2) ，26. 0(C-23，CH2) ，45. 8(C-
24，CH) ，29. 1(C-25，CH) ，19. 8(C-26，CH3) ，19. 0
(C-27，CH3) ，23. 0(C-28，CH2) ，12. 0(C-29，CH3)。
以上数据与文献［4］报导豆甾-5-烯-3β，7α-二醇基本
一致。
化合物 3 无色胶状物(丙酮) ，薄层检测在紫
外灯 254 nm下无荧光，10%硫酸-乙醇显色加热氧
化后显蓝色。ESI-MS m/z:433［M + H］+。1H NMR
(Acetone-d6，400 MHz)δ:3. 67(1H，m，H-6) ，3. 35
(1H，m，H-3) ，0. 99(3H，s，H-19) ，0. 90(3H，d，J =
6. 5 Hz，H-21) ，0. 88(3H，t，J = 6. 3 Hz，H-29) ，0. 85
(3H，d，J = 6. 6 Hz，H-26) ，0. 84(3H，d，J = 6. 6 Hz，
H-27) ，0. 68(3H，s，H-18) ;13 C NMR(Acetone-d6，
100 MHz) δ:37. 3(C-1，CH2) ，32. 3(C-2，CH2) ，
71. 3(C-3，CH) ，32. 6(C-4，CH2) ，51. 5(C-5，CH) ，
69. 5(C-6，CH) ，42. 6(C-7，CH2) ，34. 4(C-8，CH) ，
54. 0(C-9，CH) ，36. 3(C-10，C) ，21. 1(C-11，CH2) ，
39. 9(C-12，CH2) ，42. 7(C-13，C) ，54. 6(C-14，CH) ，
23. 3(C-15，CH2) ，28. 4(C-16，CH2) ，56. 2(C-17，
CH) ，11. 9(C-18，CH3) ，13. 4(C-19，CH3) ，36. 4(C-
20，CH) ，19. 0(C-21，CH3) ，34. 0(C-22，CH2) ，25. 3
(C-23，CH2) ，45. 8(C-24，CH) ，29. 2(C-25，CH) ，
19. 9(C-26，CH3) ，18. 8(C-27，CH3) ，23. 0(C-28，
CH2) ，11. 9(C-29，CH3)。以上数据与文献
［5］报导
的豆甾-3β，6α-二醇基本一致。
化合物 4 白色针晶(氯仿) ，mp. 140 ～ 142 ℃，
薄层检测在紫外灯 254 nm 下无荧光，10%硫酸-乙
醇显色加热氧化后显紫红色。同 β-谷甾醇标准品
TLC对照，混合点样后经多个展开系统展开均为 1
个斑点，混合后测定熔点不降，确定该化合物为 β-
谷甾醇。
参考文献
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457． (下转第 65 页)
65 天然产物研究与开发 Vol. 24
3 结论
硫酸二甲酯和碘甲烷都是常用的胺类和醇类的
甲基化试剂，但在制备 N，N，N-三甲基壳聚糖季铵
盐的研究中一直以碘甲烷为主，而应用硫酸二甲酯
的研究报道仅有一篇［10］。该文献以硫酸二甲酯为
甲基化试剂与壳聚糖一步反应制得了 N，N，N-三甲
基壳聚糖季铵盐。由于硫酸二甲酯还作为反应的主
要溶剂，所以用量很大，1 g 壳聚糖需用 16 mL 硫酸
二甲酯，而反应体系中少量水的存在也会导致部分
硫酸二甲酯的水解。此外，反应体系中添加了
NaOH，所以壳聚糖上的羟基也发生了部分甲基化。
而本文则先以廉价的甲醛和甲酸为甲基化试剂与壳
聚糖反应制得 N，N-二甲基壳聚糖，然后以硫酸二甲
酯为季铵化试剂制得了 N，N，N-三甲基壳聚糖甲基
硫酸盐，因此极大了降低了硫酸二甲酯的用量，也避
免了羟基的甲基化，季铵化度也高于该文献的
52. 5%。而相对于碘甲烷而言，硫酸二甲酯毒性低、
价格便宜，反应条件宽松易控，作为季铵化试剂具有
一定优势，这也为制备其他类型的 N-甲基-N-二烷
基壳聚糖季铵盐提供了一种新的合成途径。
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(上接第 56 页)
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