全 文 ：第 37 卷 第 3 期
2 0 0 4年 9 月 南 开 大 学 学 报 (自然科学版 ) V
o l
.
3 7 冲3
A e ta S cie n t ia u r mN
a tu a r l i“ mU n ivs e r ita t is Na nk a ie ns is S e t
.
2 0 0 4
文章绷号 : 05 4 6一 7 9 4 2 ( 2 0 0 4) 03一 1 01 5 一 05
狐米草胁迫相关蛋白诱导与分析
石 明’ 赵素然, 李德森` 王连锁“ 潘 铮2 · 窦田芬2 杜荣蓦`
( 1
. 南开大学 生命科学学院 , 天津 3 0 0 0 71 ; 2 . 大港区农林畜牧局 , 天津 3 0 0 2 7。 )
摘要 : 本文对狐米草进行 N a CI 、 A B A 、 P E G 一 6。。 o 三种胁迫处理后 ,在不同时间段分别收集叶片 , 用高盐溶
液处理 , 然后测定一些与抗生相关的生理生化指标 ,并用统计学逐步回归的方法进行抗胁迫相关蛋白的推测 . 结
果表明 ,每种处理对狐米草各生理生化指标均有不同程度的影响 , 且能够使蛋白含量发生变化 ,其中表观相对分
子量为 40 . sk D a 、 39 . sk D a 、 3 8k D a 、 3 6k D a 的蛋白与狐米草抗胁迫能力有相关性 . 同时证明 ,狐米草存在交叉适应
现象 , 用低浓度盐和 A B A 处理的狐米草能不同程度的抵高浓度盐胁迫 .
关艘词 : 狐米草 ; 胁迫 ; 回归分析 ; 交叉适应
中圈分类号 : T Q 93 文献标识码 : A
O 引 言
狐米草是多年生草本 ,在甜土和土壤含盐量为 1 . 5 ~ 2%的土壤中 , 均能正常生长 , 而且能够脱去土壤
中的盐分 ,对盐碱地的改造也能起到很大的作用 . 因此是进行耐盐性生理研究的好材料 . 本文对狐米草进
行不 同诱导处理后 , 分析了狐米草蛋 白与组织含水量 、 叶绿素含量及细胞膜相对透性等指标的相关性 ,从
而推测并分析了几种与其抗盐能力相关性的蛋 白 .
1 材料与方法
1
.
1 实验材料及胁迫诱导处理
实验材料为狐米草 ( sq ar it n a aP t en s ) , 由本实验室以 H oa g lan d 营养液培养 . 将狐米草分成相同四份 ,
分别用 2% ( w / v ) N a C I (记为 N ) , 5 0m m o l . L 一 ` A B A (记为 A ) , 1 5% ( w / v ) P E G 一 6 0 0 0 (记为 P )三种营养液
培养 , 营养液均由 1 2/ 浓度的 H o a g la n d 营养液配制 . 另一组用 1 2/ 浓度的 H o a gl a n d 营养液培养作为对照
组 (记为 C ) . 分别于 2 4 h (标记为 C Z; 、 N Z ; 、 A Z` 、 P Z; ) 、 4 8 h (标记为 C 4。 、 N 4。 、 A 4。 、 P 4 8 ) 、 6 0 h (标记为 C 6。 、 N 。。 、
A
。。 、
P
,;。
)
、
7 2 h (标记为 C 7 2 、 N小 A ? 2 、 P 7 2 )时收集每种处理和对照各 29 材料进行实验 .
72 h 后将四份狐米草取 出 , 分别置 于 1/ 2 浓度的 H oa g l a n d 营养液配制 的 4 % ( w八 ) N a CI 溶液 中 ,
7 2 h后取各 2 9 材料进行实验 (标记为 C 14 ; 、 N l “ 、 A 14 4 、 P , 4 ; ) .
L Z 抗性相关指标测定
利用鲜重法 、 电导率法和分光光度法分别测定狐米草叶片组织含水量 、 细胞膜相对透性和叶绿素含量 .
1
.
3 总蛋白的提取及 SD S一聚丙烯截胺凝胶电泳 ( S D S一 P A G E )
取收集 的每份材料 1 9 ,于液氮中研成粉末后转移至 7 m L 离心管中 , 加人 4 m L 蛋 白提取缓冲液 ( 50
m m o l
·
L 一 ` T r i s
一
H C I ( p H s
.
o )
, 2% S D S
, 5% 甘 油 , 2 m m o l · L 一 ` E D T A , 2% 件琉 基 乙 醇 ,
1 m m ( ) l
·
L 一 ` PM S F )摇匀 , 4 oC 下 1 2 0 0 o r / m in 离心 2 0 m in ,取上清 ,加人 2 . 5 倍体积的冷丙酮沉淀过夜 ,
之后在 4℃下 1 2 0 0 0 印m 离心 20 m in , 弃上清 ,沉淀放置在 一 20 ℃下至丙酮完全挥发干净后 , 按每克材料
收稿日期 :谷金项目 :
2 0 0 3
一
0 9
一
1 9天津市农村工作委员会农业科技基金资助项目 (引种项 目 。 2 0 1 1)作者简介 :石 明 ( 1 9 78 一 ) ,女 ,河北邯郸人 ,博士研究生
一
1 1 6
-南 开 大 学 学 报 ( 自然科学版 )第 37卷
50 0 拌L d d HZ O的比例溶解沉淀 .
采用不连续体系 ,浓缩胶浓度为 3 . 5% , 分离胶浓度为 12 % , 10 o V 恒压电泳至指示剂进人分离胶 ,
20 0 V 继续恒压电泳至指示剂距胶底 1 。 m 结束电泳 , 考马斯亮兰 R 2 50 染色 lj[ .
染色后对凝胶用 Im a g e M a s t e r V D S 系统 (瑞士 P h a r m a e i a B i o t e e h 公司 )进行扫描处理 ,得到各蛋 白
带的积分光密度值 (I O D 值 ) ,用作统计学分析 .
L 4 统计学分析
计算蛋白带与所测指标间的相关系数矩阵 , 以每条蛋白带的相对含量 (用积分光密度表示 )为 自变量 ,
以组织含水量为 因变量 Y , , 以组织叶绿素含量为因变量 Y : , 以细胞膜相对透性为因变量 Y : ,使用统计分
析软件 s A s ( S t a t i s t ie a l A n a l y s i s S y s t e m )对实验数据在 0 . 1 0 水平上进行逐步回归分析 [2 〕 ,确定诱导相关
蛋 白 . 所用的统计模型为 :
Y
, . 1 一 X o . ( * + l )月(* + l ) . 1 + 气 . ,
2 结果与讨论
.2 1 抗性相关指标测定结果
狐米草在不同胁迫条件下生长状况差异不明显 , 于不同时间取狐米草叶片组织 ,测定各生理生化指
标 ,结果见表 1 . 由表 1 中可以看出 ,不同胁迫处理对所测各指标有一定影响 , 组织含水量和叶绿素含量降
低 , 而质膜透性相对电导率则增加 . 将经过这些胁迫处理后的狐米草置于 4% ( w / v) N a CI 溶液中 3 d ,发现
经不同胁迫处理的狐米草对高浓度盐的耐受力不同 ,取其叶片组织测定各指标 ,结果见表 .2
表 1 狐米草经不同胁迫处理后各生理生化指标分析结果
aT b l e 1 A n a l y t ic
r e s u l t o f Ph y s i o l o g ic al a n d ib
o c h e m ic a l c h a r a c te r i s t i c s o f SP
a rt in a P a t e n s t r e a t ed Wi t h d if f e er n t r e a g
e n t
胁迫方式 组织含水量 / %鲜重 叶绿素含量 / m g · g 干重 一 ` 相对电导率 / %
C K ( C Z
。
) 7 5
.
1 5 5 0
.
3 4 3 4
.
1 6
N
a
C I (N Z; ) 7 0
.
1 4 4 3
.
3 1 4 0
.
1 2
2 4 h A B A ( A Z。 ) 7 0
.
4 7 4 4
.
6 3 6 7
.
1 4
P E G ( P Z` ) 6 6
.
7 1 3 6
.
0 0 4 0
.
6 8
4 8 h
C K (C ; 8 )
N a C I (N ` : )
A B A ( A 4 : )
P E G ( P ` s )
7 1
.
4 2
7 0
.
6 5
7 2
.
5 6
6 1
.
6 8
4 7
.
9 0
4 8
.
0 9
5 5
.
2 6
4 8
.
1 7
4 3
.
3 3
3 1
.
6 1
2 9
.
9 5
3 2
.
3 5
6 0 h
C K (C `。 )
N a C I (N 6。 )
A B A (A 6。 )
P E G ( P 6。 )
7 2
.
2 5
7 1
.
9 7
6 8
.
4 3
7 1
.
2 4
5 4
.
9 5
4 6
.
8 5
4 5
.
2 7
4 4
.
0 8
3 4
.
2 1
3 0
.
5 8
2 7
.
2 9
3 1
.
6 0
7 2 h
C K (C ? : )
N a C I ( N 7 2 )
A B A (A ? 2 )
P E G ( P 7 : )
7 3
.
0 2
7 0
.
5 1
6 9
.
2 4
6 7
.
9 3
6 6
.
6 1
4 9
.
1 6
3 5
.
9 3
4 8
.
0 7
2 5
.
1 4
2 0
.
0 0
2 5
.
4 8
2 1
.
7 6
表 2
T a b le Z
狐米草经高盐浓度处理后各指标分析 结果
A n a l y t i e r e s u l t o f Ph y s io l o g i e a l a n d b成o e h e m ie a l
e h a r a e t e r i s t i e s o f SP a rt i
n a P a t e n s t r e a t e d w i t h h ig h e o n e e n t r a t e d N a C I
前处理方式 后处理方式 标记
C l “
N l `。
A z ; `
P
l ` -
组织含水量 / %鲜重 叶绿素含量 / m g · g 干重 一 ` 相对电导率 /%
勺口ē匕内JO内bl从LJg曰0
.…,口厅了几jnnbnjl从LJ工`JO口月性01.1月任9自O甘八j.…三任1一从JA卜U1五八jg曰119口内了巴JO乃 甘乙ōbA孟丹j.…内b户合9曰八é1t口内左匕工7 2 h C KN a C IA B A
P E G
7 2 h
4 % N
a
C I
由表 2 可以看出 , 高浓度盐处理对狐米草各指标均有很大程度影响 : 对照组在高盐环境下生长受到
第 3期 石 明等 :狐米草胁迫相关蛋白诱导 与分析 . 1 1 7.
严重抑制 , 几乎死亡 , 处理 72 h 后 , 组织含水量下降了 76 . 95 % , 叶绿素含量下降了 73 . 63 % , 质膜透性
相对电导率增加了 83 . 08 % ; 而用 N a CI 、 A B A 或 P E G 一 6 0 0 0 处理的狐米草对高浓度盐溶液有一定耐受性 ,
处理 72 h 后含水量分别下降 21 . 39 % , n . ol % , 3 9 . 6 2% ; 叶绿素含量分别下降 3 3 . 3 2% , 4 2 . 7 9% ,
6 3
.
0 0写 ; 细胞膜相对透性分别增加了 2 . 90 % , 42 . 08 % , 58 . 24 写 , 均有不同程度的缓解 . 可见 , N a CI
和 A B A 能较大幅度的提高狐米草的耐高盐能力 , P E G 一 6 0 0 0 也能起到一定的作用 .
M 1 2 3 4 5 6 7 8
. . . . . . . 曰 . . . . . . . . . . 匕白 山 目 内 . ~ 户曰 , ~ 目` 冶 M 1 2 3 4
. . . . . . . . . . . . . . . .
M 1 2 3 4 5 6 7 8
4 3 K D we 卜
4 3 K D 一.卜 4 3K D we 闷卜
2 9 K D we . 卜
2 9K D e 门卜
2 9 K D se , 卜
8
.
4K D - j 卜
4
.
3 K D e 卜
18
。
4 K D e 勺卜
-刁卜
.18 4 K D se 」卜
1 .4 3 K D
圈 1 S D S一丙始派胺凝胶电泳结果 圈 2 SD S一架丙烯陈胺凝胶电泳结果 2 圈 3 SD S一报丙姗醉胶凝胶电泳结果 3
F i g 1 T h e r e s u l t 1 o f SD S
一
P A G E F i g 2 T h e r e s u l t 2 o f s D S一 P A G e F ig 3 T h e r e s , It 3 o f S D S 一 P A G E
M
: 标准分子量 ; 1 : C ; : ; 2 : N ; 。 ; M : 标准分子量 ; 1 : C 。。 ; 2 : N 。。 ;
3 : A
4: ; 4
:
P 4 s 3 : A
oo ; 4 : P s o ; 5 : C
, : ; 6 : N
; z ;
7 : A
7 2 ; 8
:
P
7 :
2
·
2 S D S
一
P A G E 结果
各样品的蛋 白粗提液经 S D S一聚丙烯酞胺凝胶电泳后的电泳结果见图 1~ 图 3 .
从图中可以看出 , 在上样量完全相同的情况下 , 各泳道中某些条带的颜色深浅是不完全一致的 . 说
明狐米草在不同胁迫条件下 , 或同一胁迫条件下不同时间 , 同一种蛋 白的表达量是不完全相同的 , 这些
蛋白有可能与狐米草的抗胁迫能力有关 . 为此 , 对胶 中的各蛋白带进行 V D S 系统扫描得到各蛋 白带的相
对含量 ( 以积分光密度表示 ) , 再对所得数据进行统计学分析以期筛选出狐米草对抗胁迫相关蛋 白 .
.2 3 统计分析结果
通过 Im a g e M a s t e r V D S 系统分析 ,得到 2 3 种表观相对分子量小于 6 2 k D 的蛋白 ( X l一 X : 3 ) , 经 S A S
系统分析得到 0 . 10 水平上的回归方程分别为 :
A K Y
` 1
= 7 6
.
4 8 7 9 4 4 1 8 一 0 . 1 0 8 8 1 3 3 1X 7 + 0 . 0 1 3 6 8 9 2 3X , 。 + 0 . 0 1 4 1 8 7 3 1X z: 一 0 . 0 1 2 2 5 8 7 3X z 6 一
0
.
0 1 0 0 9 2 3 6 7X
2。
A K Y
` 2
= 3 5
.
5 3 8 4 6 2 9 5 + 0
.
3 2 2 14 5 4 5X
s
+ 0
.
0 7 7 2 4 5 2 3X
。 一 0 . 0 1 4 6 6 3 2 3X 16 一 0 . 2 7 5 6 6 9 0 9X 2。
A K Y
八 3
= 一 1 6 . 5 1 5 8 3 9 3 9 + 0 . 3 3 6 4 9 1 4 5X : + 0 . 1 5 1 6 3 8 3 2X 6 + 0 . 0 2 1 8 7 6 8 0 X 1 6 + 0 . 6 9 8 9 7 1 1 5X , 7
由表 3 可以看出 ,表观相对分子量为 43 . sk D 的蛋白 X 7 对含水量有负贡献 , 表观相对分子量分别为
32 kD
、
25 k D 的蛋 白 X l 。 、 X Z。对含水量和叶绿素含量均有负贡献 , 还有表观相对分子量分别为 56 k D 、
47
.
7 kD
、
32 k D
、
28
.
5 k D 的蛋 白 X Z 、 x 。 、 X , 。 、 x ; 7对质膜透性相对电导率有正贡献 , 这些蛋 白与胁迫条件
造成的含水量和叶绿素含量的下降 、 质膜透性相对电导率增加 ,存在密切相关 .
相反 , 表观相对分子量为 40 . 5 k D 的蛋 白 X 。 和 39 . 5 k D 的蛋白 X , 对植物叶绿素含量有正贡献 , 当
这两个蛋白增加时 ,组织叶绿素含量会增加 . 表观相对分子量为 38 k D 的蛋 白 X l 。和 36 k D 的蛋 白 X , 2对
组织含水量有正贡献 , 当这两个蛋 白增加时 , 组织含水量会增加 . 可见 , 以上四个蛋 白是在胁迫条件下诱导
产生的与抗胁迫能力有关的蛋 白 ,可以缓解植物在胁迫条件下含水量或叶绿素含量的居降 .
1 18 南 开 大 学 学 报 ( 自然科学版 )第 37卷
裹 3各蛋 白带的表观相对分子 t 及对各抗性指标的贡献
Tab le 3h Te a P Par n et m o le e u l
r a w e igh t an dt h n e e ot r ib ut ion of
e ach p
r ot e in h an dt oh Py s i o lo g i e a ln ab i do eh lem i e a leh r a a et r e i st i e s
蛋白带 靠 X, X z o X 1 2 X l ` X 17 X Zo表观相对分子量 ( k D a)
组织含水量 /%鲜重
叶绿素含量 /m g · g 干重 一 ’
细胞膜相对透性 /%
组织含水 t /%鲜重
叶绿素含 t /m g · g 干重 一 `
细胞膜相对透性 /%
组织含水量 / %鲜重
叶绿素含 t /m g · g 干重 一 `
细胞膜相对透性 /%
细胞膜相对透性 /%
4 3
.
5 4 0
-
2 8
。
5 2 5
P值
0
.
0 0 5 8 0
.
0 28 8 0
.
0 1 8 2 0
.
0 0 1 7 0
.
0 3 2 6
0
.
0 0 0 9 0
.
0 8 0 9 0
.
0 9 5 6 0
.
0 4 3 3
0
.
0 0 6 6 0
.
0 1 0 5 0
.
0 9 6 9 0
.
0 0 7 6
显著性
+ 十
贡献方向
+ +
+ + + +
本实验中得到的耐盐相关蛋 白 X l 。 (表观相对分子量为 38 k D )和 X l : (表观相对分子量为 3 6k D )分别
与 is n g h 等 3[] 报道的盐胁迫蛋 白 (分子量为 37 kD 、 3 5 . 5 k D )很接近 , 可能为同一种蛋白 . 蛋白 x 。 (表观相
对分子量为 4 0 . 5 k D )与 白振英等闭曾提到的从盐适应烟草愈伤组织和培养细胞中分离的蛋白 (分子量为
40
.
3 kD )很接近 , 可能为同一种蛋 白 . X 。 (表观相对分子量为 39 . 5 k D )未发现其它报道 . 为了全面了解这
些蛋白在狐米草抗盐机制中的作用 , 它们的特性 ,或能以及基因表达调控等还有待进一步研究 .
本实验还证明狐米草存在着交叉适应现象 ,它虽然对一般胁迫条件如低浓度盐等均有良好的耐受性 ,
但若将其直接置于高浓度盐中 , 由于耐盐相关基因没能得到诱导表达 , 使其耐盐能力受到限制 , 导致死亡 ;
若经过一定的胁迫预处理 (低浓度盐或 A B A 处理 ) , 则能明显提高它的耐盐能力 . 这个结果对狐米草在盐
碱地中的实际应用有重要的指导意义 .
参 考 文 献
S
a m b r o o k J
,
F
r
i t
e h E
,
M
a n ia t i s m T 著 , 金冬雁 ,黎孟枫译 . 分子克隆实验指南 [ M 」. 北京 :科学出版社 , 1 9 9 6 , 8 8 0 ~
8 7 8
.
杜荣赛 . 生物统计学〔M〕. 北京 : 高等教育出版社 ;海德堡 :施普林格出版社联合出版 , 1” .9
s i n g h N K
.
P
r o t e i n s a s s o e ia t e d w i t h
a
d
a p t a t io n o f e u l t u r e d t o b a e e o c e ll s t o N a C I仁J〕. 尸 z a n t 尸勺5 10 2 , 1 9 5 5 , 7 9 : 1 2 6~
1 3 7
.
王振英 ,彭永康 ,郑坚瑜 . 盐胁迫下水稻和黑麦幼苗蛋白质组份的变化 〔J〕. 南开大学学报 ( 自然科学版 ) , 2 0 01 , 3 4 (3 ) :
1 1 2~ 1 1 5
.
T H E I N D U C E M E N T A N D A N A L Y S IS O F S T R E S S
一
R E L A T E D
P R O T E IN S I N S 尸A R T IN A 尸A T E N S
S H I M i n g
, ,
Z H A O S u r a n
` , L l D e s e n `
,
W A N G L i
a n s u o , , P A N Zh e n g
Z ,
DO U T i a n f e n
Z , D U R o n g q i a n
( 1
.
oC l
e g e of L ife S
c ie n e e s
,
N 口 n k a i U n i ve sr iyt
,
T i
a
inj
n 3 0 0 0 7 1
,
hC i
n a ;
2
. 刀“卯 n g L io e s t o c k B u er a u , iT a inj n 3 0 0 0 7 1 , hC i n a )
A b s t r a e t
:
SP
a rt i n a P a t e n s w a s t r e a t e d w i t h N a C I
,
A B A a n d P E G
一
6 0 0 0
, r e s p e c t i v e l y
, a n d
t h e i r l e a v e s w e r e e o l l e e t e d a t d i f f e r e n t t im e
.
T h e n t h e y w e r e t r e a t e d w i t h h i g h e r e o n e e n t r a t e d
N a C I
,
w e m e a s u r e d s o m e p h y s i o l o g i e a l a n d b io e h e m i c a l e h a r a e t e r i s t ie s
,
t h e n w e e o n f i r m e d
s t r e s s
一 r e l a t i v e p r o t e i n s w i t h s t e P w is e r e g r e e s i o n m o d e l
.
T h e r e s u l t s i n d i e a t e d t h a t d if f e r e n t
第 3 期 石 明等 :狐米草胁迫相关蛋白诱导与分析 . 1 1 9 -
t r e a tm e n t s e o u l d 。 h a n g e t h e p h y s i o l o g i e a l a n d b i o e h e m i e a l e h a r a e t e r i s t i e s o f SP
a八 i n a P a t e n s
a n d t h e e o n t e n t o f a s e r ie s o f p r o t e i n s
.
S o m e o f t h e m i n e l u d i n g X
s
( 4 0
.
s k D a )
、
X
。
( 3 9
.
s k D a )
、
X
: 。
( 3 8k D a )
、
X
l :
( 3 6k D a ) C o u l d e n h a n e e t h e a b i l i t y o f s t r e s s r e s i s t a n e e o f SP
a rt i n a p a t e n :
.
A t
t h e s a m e t im e it w a s p r o v e d t h a t SP
a rt i n a P a t e n s t r e a t e d w i t h Io w e r e o n e e n t r a t e d N a C I o r A B A
b e f o r e h ig h e o n e e n t r a t e d N a C I h a s s t r o n g e r a b i l i t y o f s t r e s s r e s i s t a n c e t h a n e o n t r o l s
,
K e y w o r d s : SP
a rt i n a P a t e n s ; s t r e s s ; s t e Pw is e r e g r e s s io n , e r o s s
一 a
d
a P t a t i
o n
(上接 第 1 1 4 页 )
S I T E
一
D IR E C T E D M U T A G E N S IS O F A T R A Z IN E
C H L O R O H Y D R A L A S E G E N E A N D D E T E C T IO N
O F I T S A C T IV I T Y
C H EN D e f u
,
C H E N X iw e n
,
C A I B a o l i
( oC l l
e g e Of L ife S
c ie n c e s
,
N
“ 二
k
a i U
n iv e sr i yt
,
T ia inj
n 3 0 0 0 7 1
,
C h i
二 a )
A b s t r a e t : A t r a z i n e e h l o r o h y d r a l a s e ( A t z A ) 15 a n im p o r t a n t e n z y m e
,
w h i e h b i o d e g r a d e t h e
h e r b i e id e a n d d e e o n t a m i n a t e t h e e n v i r o n m e n t
.
T h e 8 3 2 n d b a s e ( g u a n i n e ) i n t h e a t z A g e n e f r o m
P s e u d o m o n a s sP
.
s t r a i n A D P w a s m u t a g e n i z e d i n t o a d e n i n e b y s i t e 一 d i r e e t e d m u t a g e n e s i s .
T h e n i t w a s i n s e r t e d i n t o a n e x p r e s s i o n v e e t o r p E T 2 1 b ( + ) a n d e x P r e s s e d a w a t e r
一 s o l u b le
f u s io n p r o t e in A t z A o r A t z A
一
N K i n E
.
col i
.
T h u s i t w a s e a s y t o i s o l a t e a n d p u r i f y t h e p r o t e i n s
b y N i
一
N T A M a g n e t i e A g a r o s e B e a d s
.
T h e a e t i v i t i e s w e r e d e t e e t e d t h r o u g h t h e e h a n g e o f p H
i n d ie a t o r e o l o r o w i n g t o t h e p r o d u e t i o n o f h y d r o e h l o r ie a e id w h e n a t r a z i n e w a s d e e h l o r i n a t e d
.
T h e m u t a t i o n A t z A
一
N K a n d A t z A f r o m P s e u do m
o n a s sP
.
s t r a i n A D P h a v e t h e s a m e a e t i v i t y
5 t z g g e s t i n g t h e m u t a t io n s i t e
,
w h i e h 15 a t 2 7 8 t h w i t h v a li n e m u t a g e n i z e d i n t o m e t h i o n i n e
,
15 n o t
a n a e t i v i t y d o m a i n o r a s u b s t r a t e
一 e o m b i n g s i t e
.
K e y w o r d s
:
A t
r a z in e e h lo r o h y d r a l s e ; s i t e
一
d i
r e e t e d m u t a g e n e s i s ; d e t e e t i o n o f a e t iv it y