全 文 ：土牛膝中齐墩果酸、牛膝多糖的提取与鉴定
黄志芳 黄志红 胡吉林 周跃辉 魏得良
【摘要】 目的 从土牛膝中提取齐墩果酸和多糖并进行定性定量分析。方法 土牛膝水煮液经水
浴、酸水解、加碱煮沸后，乙醇回流、抽滤，60℃烘干精制得到齐墩果酸;土牛膝的乙醇热回流后再水提，
经过浓缩、沉淀、除杂、抽滤、洗涤、低温干燥得到牛膝多糖。用薄层色谱法和分光光度法进行定性定量
分析。结果 齐墩果酸的提取率为 0. 88%;牛膝多糖的提取率为 7. 2%。结论 通过含量测定结果与提
取率对比，本实验方法可行。
【关键词】 土牛膝;齐墩果酸;牛膝多糖;提取与鉴定
Extracting and Identification of OA and ABPS of local achyranthes aspera HUANG Zhi-fang，HUANG
Zhi-hong，HU Ji-lin，et al． Department of Chemistry and Life Science，Xiangnan University，Chenzhou
423000，China
【Abstract】 Objective To extract oleanolic acid(OA)and achyranthes bidentata polysaccharides(AB-
PS)from local achyranthes aspera，and analyze quantitatively and qualitatively. Methods The oleanolic acid
(OA)was obtained from the decoction of local achyranthes aspera through the process of washing，acid hydroly-
sising，adding alkali and boiling;ethanol refluxing，vacuum filtrating and 60℃ drying. After the ethanol hot re-
fluxing and aqueous extracting，the achyranthes bidentata polysaccharides (ABPS)are obtained through the
process of condensing，sedimenting，impurities removing，vacuum filtrating，washing，cooling and drying. Ul-
traviolet spectroscopy and TCL are adopted for qualitative and quantitive analysis. Results The extracting rate
of OA and ABPS were 0. 88% and 7. 2% respectively. Conclusion The experimental method of comparising
the content determination and the extracting rate is easy and feasible.
【Key words】 Local achyranthes aspera;Oleanolic acid(OA) ;Achyranthes bidentata polysaccharides
(ABPS) ;Qualitative and quantitive analysis
土牛膝，别名倒扣草，《中国药典汇编》对土牛膝有如下
记载:药性:苦、凉。归肺、脾、肝、膀胱经。药效:败毒抗癌、
逐淤除痹，消炎利尿。现代医学研究证明，土牛膝具有改善机
体微循环，调整新陈代谢，改善免疫功能等作用。具有明显的
抗炎抗菌作用、镇痛作用、抗衰老等［1-3］作用。近年来有研究
表明与牛膝含有成分的齐墩果酸、牛膝多糖具有治疗糖尿病
的功效［4-6］，但土牛膝提取物在治疗糖尿病方面的研究尚无
报道。以本地野生土牛膝为原料经过提取、分离、过滤、干燥
得到土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖，将对土牛膝提取物治
疗糖尿病的研究具有重要意义。
1 材料
1. 1 土牛膝 湖南郴州郊外野生自己采集、洗净、除去残留
芦头、切段、晒干。
1. 2 试剂和仪器 齐墩果酸标准品，优级纯，什邡市巨邦植
物原料有限公司;葡萄糖，其余试剂均为市售分析纯。电子天
平，上海精密仪器仪表有限公司;低压型抽虑装置，唐山市玻
璃仪器厂;722 型分光光度计，上海天翔光学仪器有限公司;
硅胶板:5 ～ 12 cm北京市昌平石鹰化工厂。
2 方法与结果
2. 1 土牛膝中齐墩果酸的提取 ［7］
基金项目:湖南省教育厅科研基金资助项目(项编号目:
05C630) ;湖南省科技厅科研基金资助项目(项编号目:06FJ4099)
作者单位:423000 湘南学院化学与生命科学系(黄志芳 黄志
红 胡吉林 周跃辉 魏得良) ;广州市第十二人民医院(黄志芳)
通信作者:魏得良 E-mail:Weideliang22@ sohu． com
2. 1. 1 土牛膝水煮提取液 取土牛膝 150 g，制成细块状药
材，105℃烘干 3 h，取出加 10 g 碳酸钙细粉和 6 倍量的蒸馏
水，置于 1000 ml 大烧杯中加热煮沸 3 次:每次煮沸 2 h 后过
滤得到滤液和滤渣，滤液贮存待用，滤渣用同法煮沸 3 次，将
3 次滤液合并，放置 5 h后析出沉淀，取上层清液约 200 ml。
2. 1. 2 齐墩果酸的粗提 将上清液置于 500 ml 烧杯中，加
5% Hcl 50 ml混匀，60℃左右水浴加热水解约 5 h，水解完毕
后溶液有褐色沉淀产生，趁热过滤，水洗滤饼后，滤饼用 3%
NaOH溶液煮沸后即时过滤得到滤饼，滤饼用水煮沸一次，沸
腾后即时过滤，得到钠盐粗品。
2. 1. 3 齐墩果酸的精制 将粗品加 1%活性炭和 10 倍量的
95%乙醇回流热熔 1 h趁热过滤，滤液放冷后以稀 HCL调 PH
在 1 到 2 之间，放置 24 h，使结晶充分，抽滤干后，以蒸馏水洗
至近中性，60℃烘干，得齐墩果酸精品 1. 32 g。
2. 1. 4 齐墩果酸提取率 提取率 = 1. 32 g /150 g × ﹪
= 0. 88%。
2. 1. 5 齐墩果酸提取品的鉴定［8］ 性状:呈白色针状结晶与
标准品相同。Liebermann-burchard 反应:两液面交界处出现
红紫色环，为阳性反应。薄层层析及显色:如图 1 所示，标准
品齐墩果酸斑点显紫红色微泛蓝黑色，测定 RF值为 9. 5 cm。
供试品在标准品齐墩果酸出现斑点的平行位置处出现斑点，
斑点显紫红色微泛蓝黑色，测定 RF 值为 9. 4 cm，约为 9. 5
cm，可以确认供试品的主要成分一样都是齐墩果酸。
2. 2 土牛膝中齐墩果酸的含量测定［9］
2. 2. 1 供试品溶液的制备 精密称取土牛膝的粗粉 0. 8 g，
加 50%乙醇-浓硫酸 9:1 试液 20 ml于 85℃水浴中回流提取 2
h过滤，洗涤，合并滤液，置水浴上挥发去溶剂，残留物用甲醇
·6· 中国实用医药 2010 年 6 月第 5 卷第 17 期 China Prac Med，Jun 2010，Vol． 5，No． 17
DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2010.17.022
溶解，置过滤，然后定容 10 ml，即得供试品液。
图 1 齐墩果酸的薄层色谱图
图 2 牛膝多糖水解产物和果糖的 TLC图
2. 2. 2 标准曲线的绘制 精密称取齐墩果酸对照品 25. 52
mg，置于 25 ml量瓶中，用氯仿稀释至刻度。取此对照品溶液
10、20、30、40、50 μl于试管中，加 5%香草醛-冰醋酸溶液 0. 20
ml，高氯酸 0. 8 ml于 60℃水浴上加热 10 min。取出，立即用
冷水冷却，然后加冰醋酸 5. 00 ml稀释，摇匀后于 722 型分光
光度计 550nm波长处测定溶液的吸收度 A。由吸收度和相应
齐墩果酸对照品量求得回归方程为 ∶ A = 0. 0072B-0. 0068，r
= 1。
2. 2. 3 含量测定 精密吸取供试品溶液 0. 05 ml，用对照品
相同的方法测得吸收度 A = 0. 2233，通过计算得齐墩果酸的
含量为 0. 799%。
2. 3 土牛膝中牛膝多糖的提取［10］
2. 3. 1 乙醇回流提取 土牛膝粗粉 50 g，用 75%乙醇回流提
取，回收乙醇，得到药渣，干燥后水提，再浓缩水提液，加 95%
乙醇充分沉淀，过滤后将沉淀再次水溶解，加入三氯乙酸去除
蛋白，取上清液。上清液加 95%乙醇沉淀，得到的沉淀物经
过抽滤后并经无水乙醇、丙酮、乙醚相继洗涤后低温干燥得牛
膝多糖产品 3. 6 g。牛膝多糖的提取率为:3. 6 g /50 g
= 7. 2%。
2. 3. 2 牛膝多糖提取品的鉴定 性状:呈红褐色粉末状。牛
膝多糖水解后会得到葡萄糖和果糖，并且葡萄糖:果糖 = 1:8。
只要鉴定土牛膝多糖的水解产物中含有葡萄糖和果糖，就可
证明样品是土牛膝多糖。照薄层色谱法(中国药典 2000 年版
二部附录 V B)试验，薄层层析及显色:如图 2 所示，果糖标准
品的薄层色谱图上的主斑点与提取物水解产物的薄层色谱图
上的主斑点在相同位置上出现，其 RF 值相同。斑点的颜色
深浅一致，说明该提取物水解产物中含有果糖。做斐林反应
有砖红色沉淀产生，说明该提取物水解产物中含有葡萄糖。
由此可以证明本实验的提取品是牛膝多糖。
2. 4 土牛膝中多糖的含量测定［11］:
2. 4. 1 供试品溶液的制备 精密称取土牛膝细粉 1. 000 g。
加 95 %乙醇 100 ml，60℃回流提取 3 h后过滤醇提药液得到
药渣，将药渣干燥 。药渣加水 50 ml回流提取 2 h，过滤得到
滤液，提取 3 次，合并 3 次滤液约 80 ml用 500 ml洁净烧杯贮
存。然后浓缩至 25 ml，加 95%乙醇至含醇量 85%，放置 24 h
使其充分沉淀，抽滤溶液得到残渣，残渣用 75 %乙醇洗涤，残
渣自然干燥，于 100 ml容量瓶定容。精密吸取 1 ml 置 50 ml
量瓶中定容，即得供试品溶液。
2. 4. 2 标准曲线的绘制 精密称取葡萄糖 0. 002 g，置 50 ml
容量瓶中 ，用水溶解定容，即得葡萄糖对照品溶液 45 μg /ml。
精密吸取对照品溶液 0. 0，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0，1. 2 ml 于刻度试
管中，加蒸馏水至 2. 0 ml，加 5%苯酚溶液 1 ml，混匀，迅速加
入 5 ml浓硫酸，振摇 5 min，置沸水浴中 15 min，再置冷水浴
中冷却 30 min，在分光光度计上 485 nm处测定吸收度。得回
归方程:A =0. 01B-0. 0608，R =1。
2. 4. 3 含量测定 精密吸取供试品溶液 25 μl，用对照品相
同的方法测得吸收度 A = 0. 2605，通过计算得齐墩果酸的含
量为 12. 85%。
3 讨论
本实验采用水煮法提取齐墩果酸提取率为 0. 88%。分
光光度计法测定土牛膝中齐墩果酸的含量为 0. 799%。提取
率比含量略大(0. 88% ＞ 0. 799%) ，说明提取品齐墩果酸中
还是有少量的杂质。用醇提法得到土牛膝多糖的提取率为
7. 2%，分光光度法测定土牛膝中牛膝多糖的含量为
12. 85%，提取率比含量略小(7. 2% ＜ 12. 85%) ，说明提取牛
膝多糖不够完全。
参 考 文 献
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