全 文 ：北京中医药 2009 年 8 月 第 28 卷 第 8 期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine，August，2009. Vol. 28,No.8
月光花 （Calonyction aculeatum） 属于旋花科
（Convolvulaceae）植物，原产热带美洲，现广泛分布
于全热带地区。 在国内主要分布广东、广西、云南等
地，属一年生缠绕草本植物。月光花豆是月光花的朔
果，有舒筋活络、消肿止痛、活血化瘀之功效，在广西
民间用于腰腿痛、风湿痛、月经痛、软组织损伤等方
面的治疗，有较好疗效。本课题组在前期药效学预实
验中发现月光花豆乙醇提取物有较好的抗炎作用。
本实验进一步研究月光花豆乙醇提取物对急性炎症
的影响， 为进一步开发利用月光花， 并将其开发成
为新药提供理论及实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物：健康雄性 Wister 大鼠，体重 200±
20 g，广西医科大学医学实验动物中心提供。实验动
物生产许可证：SCXKG 桂 2003-0003， 实验动物使
用许可证：SYXK桂 2003-0005。
1.1.2 试验药品:月光花豆由广西医科大学药理教研
室提供， 经广西中医药研究院鉴定为旋花科植物月
光花的干燥朔果。月光花豆乙醇提取物的制备：月光
花豆适量粗粉碎， 加 10倍量 70 %乙醇， 浸泡 12 h
后回流提取 2 h，待冷却后过滤，留第一次滤液；取
第一次药渣加 8倍量 70 %乙醇，回流提取 2 h，待冷
却后过滤， 留第二次滤液。 取第二次药渣加 8 倍量
70 %乙醇，回流提取 2 h，待冷却过滤。 合并三次滤
液，于水浴冷却装置回收乙醇。收集提取液并进行减
压浓缩，得到浓缩物后，再分别配成所需的相应浓度
的月光花豆乙醇提取物。角叉菜胶：福建食品有限公
司，批号：20030910；地塞米松磷酸钠注射液（1 mL:
5 mg）， 天津药业集团新郑股份有限公司， 批号：
061012；甲醇：成都市科龙化工试剂厂，分析醇；氢氧
化钾：天津化学试剂三厂，分析醇；盐酸：广东省廉江
市爱廉化试剂有限公司；肿瘤坏死因子（TNF-α）试
剂盒均由晶美生物工程有限公司提供； 超氧化物歧
化酶（SOD）试剂盒、MDA 试剂盒由南京建成生物工
程研究所提供；其余试剂均为分析醇。
1.1.3 仪器:TU-1800SPC 分光光度计， 北京普析通
用仪器有限责任公司；MULTISKAN MK3 酶标仪，美
国 Thermo Forma 公司；倒置显微镜，南京江南光电
集团股份有限公司； 高速冷冻离心机 TGL-16G-A，
上海安亭科学仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 分组:取 180～220 g 雄性大鼠 48 只，随机分为
6 组，每组 8 只：正常对照组，模型对照组，阳性对照
组（地塞米松 3 mg·kg-1），月光花豆乙醇提取物高、
中、 低剂量组 （3.50 g 生药·kg-1、 1.75 g 生药·kg-1、
0.875 g 生药·kg-1）。每组动物连续灌胃给药 5 天，每
天 1次， 正常对照组和模型对照组给予等体积蒸馏
水。
1.2.2 造模方法 [1]：于末次给药后 30 min，模型对照
组及各给药组动物分别用乙醚轻度麻醉后， 向右胸
膜腔内注入 1 %角叉菜胶 0.2 ml·100 g-1体重。 正常
对照组注入等体积生理盐水， 致炎后 4 h 各组动物
灌胃给予相应药物或蒸馏水， 致炎后 8 h 后处死动
物，将大鼠四肢展开钉在解剖板上，分离胸部肌肉和
软骨， 用剪刀将软骨剪开一小口， 可从该口到达胸
月光花豆乙醇提取物对大鼠急性胸膜炎的
作用及其机制的研究
唐秀能 1，2 黄建春 1 贺 敏 1 张志伟 2 黄仁彬 1
【摘要】 目的 研究月光花豆乙醇提取物的抗炎作用及其可能的作用机制。 方法 采用角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎模型，
观察月光花豆乙醇提取物对大鼠急性胸膜炎的影响。 结果 与模型对照组比较，月光花豆乙醇提取物能够显著减少大鼠胸腔渗
出液体积，减少胸腔渗出液中白细胞数量、蛋白含量、前列腺素 E2 （PGE2）、丙二醛（MDA）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量，
提高渗液超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结论 月光花豆乙醇提取物对角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎有明显的保护作用，其作用
机制可能与减少 PGE2、MDA 及 TNF-α 的含量，提高 SOD 的活性有关。
【关键词】 月光花豆乙醇提取物；急性胸膜炎；角叉菜胶；PGE2；MDA；TNF-α；SOD
作者单位：1.530021，广西医科大学药理学教研室
2.530001，广西中医学院附属瑞康医院
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DOI:10.16025/j.1674-1307.2009.08.033
北京中医药 2009 年 8 月 第 28 卷 第 8 期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine，August，2009. Vol. 28,No.8
腔。用微量移液器将胸腔内全部渗出液吸出并计量，
再用冰生理盐水冲洗胸腔，冲洗液与渗出液合并，至
离心管内 （冰浴），4 ℃3000 r·min-1离心 10 min，取
上清贮存于-20 ℃待测。
1.2.3 指标与检测方法:（1） 大鼠胸腔内渗出液计量
和白细胞计数: 用微量移液器将胸腔内全部渗出液
吸出并计量， 吸取 10 μL原渗液用 1 %盐酸水溶液
作为稀释液， 用细胞计数板在显微镜下进行白细胞
计数 [2]。 （2） 胸腔渗出液中蛋白和前列腺素 E2
（PGE2）含量测定：取胸腔渗液上清液 0.5 mL 上清
液按总蛋白药盒说明书方法对蛋白进行定量测定。
另取胸腔渗液上清液 150 μL， 加 0.5 mol·L-1KOH-
甲醇溶液 1 mL，50 ℃水浴异构化 20 min 后，用甲醇
稀释至 4 mL， 于紫外分光光度计波长 278 nm 处测
定其吸光度（OD）值，代表 PGE2 的生成量 [3]。 （3）胸
腔渗出液中丙二醛（MDA）含量和 SOD 活性测定：取
胸腔渗液离心后上清液 10 μL 按 SOD 试剂盒说明
测定采用黄嘌呤氧化酶法，加入蒸馏水、黄嘌呤及黄
嘌呤氧化酶反应液，并加入氧化轻胺，充分混匀，置
37 ℃恒温水浴 40 min，加显色剂，混匀，5 min 后倒
入 1 cm光径比色杯中，蒸馏水调零，波长 550 nm处
比色，并计算 SOD 活力（u.mL-1）。 另取胸腔渗液离
心后上清液 100 μL 按 MDA 试剂盒操作步骤采用
硫代巴比妥酸法，依次加入各试剂，混匀，试管口用
封口膜封紧， 膜上刺一小孔，95 ℃水浴 40 min，取
出，流水冷却，4000 r·min-1离心 10 min，取上清，532
nm 处，l cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值，计
算 MDA 含量。 （4） 胸腔渗出液中肿瘤坏死因子-α
（TNF-α）含量测定：将待测样品和配置好各浓度标
准品 100 μL加入到预先已用抗大鼠 TNF-α 单克隆
抗体包被的酶标板上；将反应板充分混匀后置 37℃
温箱 90 min，使标准品、待测样品中的抗原与单抗
充分结合；洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4次，向
滤纸上印干；每孔（除空白孔外）中加入生物素化的一
抗工作液 100 μL，置 37℃温箱 60 min；洗板；每孔（除
空白孔外）加辣根过氧化物酶标记的亲和素抗体工作
液 100 μL，将反应板置 37℃温箱 60 min，使酶标抗体
工作液与生物素化一抗结合成复合物；洗板；每孔加
入显色剂 100 μL，置 37℃暗处反应 10 min；每孔加入
100 μL终止液混匀；在酶标仪上 450 nm测各孔吸光
值。 将所有 OD 值减除空白值后，根据标准曲线，样
品 OD 值在该曲线图上查出每 mL 组织匀浆中相应
炎症因子的含量。
1.2.4 统计学方法：应用 SPSS 13.0 软件进行统计学
处理，计量资料均采用 x±s 表示，多组均数比较采用
单因素方差分析（One way ANOVA），继以 LSD 法检
验，α=0.05为显著性检验水准。
2 结果
2.1 对胸腔渗出液计量、白细胞计数的影响
与正常对照组比较， 模型对照组大鼠胸腔注射
角叉菜胶后出现明显渗液和白细胞总数升高 （P ＜
0.01），呈典型的急性炎症表现，说明大鼠胸膜炎造
模成功。 与模型对照组比较，地塞米松组、月光花豆
乙醇提取物高、 中剂量组可显著抑制胸膜炎大鼠炎
性液渗出及白细胞总数升高 （P ＜0.01 或 P ＜0.05），
月光花豆乙醇提取物低剂量组也有一定的抑制作
用，但组间比较差异无统计学意义（P ＞0.05），说明
月光花豆乙醇提取物能抑制炎症急性期渗液渗出和
白细胞游走。 见表 1。
2.2 对胸腔渗出液中蛋白和 PGE2含量的影响
与正常对照组比较，角叉菜胶致炎后，大鼠胸
膜炎模型渗液中蛋白和 PGE2 含量升高（P ＜0.01）；
地塞米松组、 月光花豆乙醇提取物各剂量组均能
减少渗出液中炎症介质 PGE2 含量 （P ＜0.01）；除
了低剂量组外， 各组对渗出液蛋白含量均有抑制
（P ＜0.01）。 见表 1。
表 1 对大鼠胸腔渗出液、白细胞计数、蛋白和 PGE2 含量的影响 （n=8，x±s）
组别 剂量/g 生药·kg-1 浸出液量/mL WBC/×106·mL-1 蛋白含量/g·L-1 PGE2/OD
正常对照组 0.02±0.01 4.67±1.07 10.53±1.71 0.270±0.044
模型对照组 1.17±0.26△△ 67.88±10.59△△ 45.19±6.26△△ 0.679±0.055△△
地塞米松组 0.003 0.81±0.19** 51.0±10.24** 26.46±4.23** 0.472±0.030**
月光花豆醇提物 3.50 0.85±0.12** 49.88±11.15** 30.45±4.07** 0.504±0.040**
月光花豆醇提物 1.75 0.93±0.18* 56.75±8.33* 34.26±5.02** 0.555±0.028**
月光花豆醇提物 0.875 1.01±0.18 61.63±10.91 40.95±3.84 0.594±0.045**
与正常对照组比较，△△P ＜0.01；与模型对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01
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北京中医药 2009 年 8 月 第 28 卷 第 8 期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine，August，2009. Vol. 28,No.8
表 2 对大鼠胸腔渗出液中 MDA、TNF-α 和 SOD 活性的影响 （n=8，x±s）
组别 剂量/g 生药·kg-1 MDA/nmol·mL-1 SOD/U·mL-1 TNF-α/ng·mL-1
正常对照组 7.21±1.48 336.50±88.66 0.546±0.176
模型对照组 17.32±2.08△△ 214.66±46.66△△ 1.256±0.368△△
地塞米松组 0.003 11.62±2.20** 278.80±35.46** 0.842±0.268**
月光花豆醇提物 3.50 12.68±2.32** 274.28±43.80** 0.928±0.191**
月光花豆醇提物 1.75 12.96±3.12** 264.48±42.56* 0.946±0.232*
月光花豆醇提物 0.875 14.54±2.08* 260.36±50.65* 0.956±0.202*
2.3 对胸腔渗出液中 MDA、TNF-α 含量及 SOD 活
性的影响
与正常对照组比较，角叉菜胶致炎后，大鼠胸膜
炎模型渗液中 SOD 活力降低，MDA、TNF-α 含量升
高 （P ＜0.01）；与模型对照组比较，地塞米松、月光
花豆乙醇提取物各剂量组均可降低渗出液中 MDA、
TNF-α 含量，恢复 SOD 活性（P ＜0.01 或 P ＜0.05）。
见表 2。
3 讨论
角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎模型是以炎性渗出
和白细胞游走为主要改变的急性炎症模型。 炎性刺
激可引起大量血浆蛋白质（如酶类和炎性介质等）的
分泌，导致炎性渗出液中蛋白含量大大增加。故大鼠
胸膜炎炎性渗出液量、 渗液中的白细胞游走数和蛋
白含量可作为衡量炎症的重要指标。
PGE2由环氧合酶（COX）催化花生四烯酸合成，
COX存在两种异构体，即 COX-1及 COX-2。COX-1
是结构酶，在正常生理情况下具有活性，催化生成的
PGE2 具有多种重要生理功能；COX-2 是诱导酶，生
理状况下活性很低，当受到某些因子刺激后，在炎症
细胞中高表达， 水平急剧增加， 进而引起炎症部位
PGE2等产物大量增加， 促进炎症反应及组织损伤[4]。
本实验中月光花豆乙醇提取物可减少大鼠胸膜炎渗
出液中 PGE2 的含量， 提示其抗炎作用可能与其抑
制 COX-2 的活性， 进而阻断炎性介质 PGs 的合成
与释放有关。
MDA 的含量常常可反映机体内脂质过氧化的
程度，并与自由基浓度呈正相关。 SOD 对机体的氧
化与抗氧化平衡起重要作用，此酶能清除 O2－，保护
细胞免受损伤[5]。 MDA 的测定常常与 SOD的测定相
互配合，SOD 活力的高低间接反映了机体清除氧自
由基的能力， 而 MDA 的高低又间接反映了机体细
胞受自由基攻击的严重程度。实验表明，月光花豆乙
醇提取物能显著降低胸膜炎大鼠胸腔渗液中 MDA
含量，并能恢复 SOD 活力，说明其可能通过降低机
体细胞受自由基攻击程度，减少细胞损伤，从而降低
炎症反应程度。
TNF-α 是一种由活化的单核-巨噬细胞分泌的
促炎症因子， 是导致炎性介质级联反应的始发因子，
其可通过多种生物学途径诱发或激活体内产生多种
炎症介质，它们又相互作用，相互影响，加重组织的损
伤和炎症[6]。 本实验预防性给予月光花豆乙醇提取物
可显著抑制炎症时细胞因子 TNF-α 的大量产生，从
而达到抗炎的效果。细胞因子之间的作用是复杂的网
络结构， 还有许多细胞因子在炎症中发挥重要的作
用，如 IL-2、IL-13、IL-10、IL-19等都在炎症发生发展
过程中发挥或拮抗或促进的作用，月光花豆乙醇提取
物对这些因子是否有影响，还有待进一步的研究。
参考文献
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Pathol，1993，143（4）:1009-1016.
作者简介：唐秀能，男，38 岁，硕士，广西中医
学院附属瑞康医院主管药师， 主要从事生化药理
学研究。
（收稿日期：2009-03-24）
与正常对照组比较，△△P ＜0.01；与模型对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01
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