全 文 ：　第 40卷　第 2期
　2011年 6月 　　　　　　　　　
西　部　林　业　科　学
JournalofWestChinaForestryScience　　　　　　　　　　
Vol.40　No.2　
June.2011　
长寿花嫩叶片的组织培养研究＊
孙利娜
(广西林业科学研究院 , 广西　南宁 530002)
摘要:以长寿花嫩叶片为外植体 , 进行了不同灭菌时间对长寿花嫩叶片再生能力的影响实验 , 不同培养基对长
寿花嫩叶片愈伤组织诱导及不定芽生根的影响实验。实验结果表明 , 长寿花嫩叶片的最佳消毒方法为 , 75 %酒
精灭菌 30s, 无菌水冲洗 4次 , 再用 0.1%升汞消毒 12min, 最后无菌水冲洗 7次;长寿花嫩叶片的最佳分化培
养基为 MS+6-BA3.5 mg/L+NAA0.2mg/L;长寿花不定芽在 1/2MS+IBA0.15 mg/L+6-BA0.15 mg/L上生
根效果最好。通过实验获得了长寿花嫩叶片的组培技术 , 为大规模生产长寿花提供了相关技术支撑。
关键词:长寿花;嫩叶片;组织培养
中图分类号:S68　　文献标识码:A　　文章编号:1672-8246 (2011)02-0048-04
TissueCulturefromSeedlingLeafofKalanchoeblossfeldiana
SUNLi-na
(ForestAcademyofGuangxi, NanningGuangxi530002, P.R.China)
Abstract:UsingexplantfromseedlingleafofKalanchoeblosfeldiana, theregenerationabilityoftheleafofKal-
anchoeblosfeldianawastestedunderdiferentdurationofsterilization, andefectofinductionfortheformationof
calusandadventiverootindiferenttypesofculture.Itshowedthatbestwayofsterilizationwassterilizingthetis-
suesin75% ethanolfor30seconds, washing4 timeswithdisinfectionwater, thenin0.1%mercurybichloridefor
12 minutesandwashingwithdisinfectionwaterfor7 times;bestcultureforthediferentiationofseedlingleafwas
MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.2 mg/L;andtheformationofcalusandadventiverootwerebeterinthecul-
tureof1/2MS+IBA0.15mg/L+6-BA0.15mg/L.
Keywords:Kalanchoeblosfeldiana;seedlingleaf;tissueculture
长寿花 (Kalanchoeblosfeldiana)又称寿星花 、
矮生伽蓝菜 , 是景天科多年生草本植物 , 原产马达
加斯加。长寿花植株矮小 , 株型丰满 , 是盆栽观
花 、观叶优良花卉 , 深受人们喜爱 [ 1] 。长寿花一
般不结种子 , 主要靠茎段及叶片扦插繁殖[ 2] , 但
扦插繁殖易受季节影响 , 而组织培养可以避免天气
或季节带来的不良影响 , 并可以迅速地繁殖出所需
要的大量花卉新品种种苗 , 以满足市场需求。近年
来对长寿花的研究越来越多 , 苏惠 、 崔广荣等[ 2 ～ 3]
利用长寿花的叶柄 、 茎段和茎尖等进行组织培养 ,
并获得相应培养基配方。由于长寿花叶片取材方
便 , 且数量多 , 是理想的快繁外植体[ 4] 。高建莉
等[ 5]研究证明长寿花叶片作为外植体诱导愈伤组
织 , 其诱导时间比用叶柄和茎作为外植体的时间要
短 7天左右。本实验旨在探寻长寿花幼嫩叶片的组
织培养配方 , 为大规模生产长寿花提供技术支撑 。
＊ 收稿日期:2011-03-25
　　　基金项目:广西林科院基本科研业务费 (林科 201106)。
　　　作者简介:孙利娜 (1981-), 女 , 河南濮阳人 , 助理工程师 , 主要从事林木 、 花卉育种和组织培养技术研究。
1　材料和方法
1.1　实验材料
供试长寿花品种为卡罗琳 (Caroline), 从其 2
年生植株上采嫩叶片作为外植体。
1.2　外植体灭菌
将供试材料用流水冲洗 2 h, 置于超净工作台
上 , 用 75%酒精和 0.1%升汞对其灭菌 , 设 4个
处理:(1)用 75 %酒精灭菌 25s, 再用 0.1 %升
汞消毒 10min;(2)用 75 %酒精灭菌 30 s, 再用
0.1%升汞消毒 11 min; (3)用 75 %酒精灭菌
30s, 再用 0.1%升汞消毒 12min;(4)用 75%酒
精灭菌 40s, 再用 0.1%升汞消毒 13min。以上每
个处理用 75%酒精灭菌后都要用无菌水冲洗 4次 ,
然后再用 0.1%升汞消毒 , 最后再用无菌水冲洗 7
次 。把灭菌后的长寿花叶片切成 0.5 cm2的小块接
种在诱导愈伤培养基上 , 每个处理接种 10瓶 , 每
瓶放置 5块外植体 , 即每个处理共放 50块外植体 。
置于温度 25 ～ 28℃、光照强度 1 000 ～ 2 000 Lx、
每天照光时间 12 h的条件下培养 , 每天观测 1次 。
1.3　培养基种类及培养条件
本实验所用愈伤诱导培养基和生根培养基分别
见表 1和表 2, 继代培养基为 MS+6-BA3.5 mg/L
+NAA0.2 mg/L。
灭菌方法:用 75%酒精灭菌 30s, 再用 0.1 %
升汞消毒 12 min对外植体进行消毒。灭菌后在 6
种诱导愈伤培养基上接种 0.5cm2大小的叶片 , 每
种培养基接种 6瓶 , 每瓶接种 6片 , 即每个处理共
接种 36片 , 每两天观测 1次 , 40天统计叶片和愈
伤的分化率 , 并将诱导的不定芽继代于 D培养基
上 。
表 1　长寿花嫩叶片诱导愈伤的培养基种类
Tab.1　Typesoftissueculturefortheformationofcallusof
seedlingleafofKalanchoeblossfeldiana mg· L-1
培养基
序号
基本培
养基
6-BA
加入量
NAA
加入量
2, 4-D
加入量
A MS 1.0 0.1
B MS 3.5 0.2
C MS 2.0 0.1
D MS 3.5 0.2
E MS 3.5 0.5
F MS 4.0 1.0
注:培养基每升添加蔗糖 30g, 琼脂粉 6g, pH5.8, 表 2同。
表 2　长寿花不定芽生根的培养基种类
Tab.2Typesoftissueculturefortheformationofadventiveroot
ofseedlingleafofKalanchoeblossfeldiana mg· L-1
培养基
序号
基本培
养基
6-BA
加入量
IBA
加入量
NAA
加入量
① 1/2 MS 0.15 0.15
② 1/2 MS 0.15 0.2
③ 1/2 MS 0.15 0.3
④ MS 2.0 0.2
⑤ 1/2 MS 3.5 0.2 0.2
2　结果与分析
2.1　不同灭菌时间对长寿花嫩叶片再生能力的
影响
接种 15天统计叶片污染率 , 由表 3可以看出 ,
不同灭菌时间对长寿花嫩叶片的再生能力有很大影
响:处理 (3)灭菌效果最好 , 污染率为 2%, 为霉
菌污染 , 未污染的叶片嫩绿;处理 (2)的灭菌效
果次于处理 (3), 污染率达 6 %, 为霉菌污染 , 未
污染的叶片没有被杀死;处理 (1)有 40片污染 ,
污染率达 80 %, 霉菌污染和细菌污染皆有;处理
(4)没有被污染 , 但叶片被杀死且均变褐色。
表 3　不同消毒时间对长寿花嫩叶片再生能力的影响
Tab.3 Efectofdurationofsterizationonabilityofregeneration
ofKalanchoeblossfeldianaleaf mg· L-1
处理 接种数/块
污染数
/块
污染率
/% 消毒效果
(1) 50 40 80 未污染叶片正常
(2) 50 3 6 未污染叶片正常
(3) 50 1 2 未污染叶片正常
(4) 50 0 0 叶片变褐　　　
图 1　长寿花叶片诱导的愈伤组织
Fig.1　ThecalusinducedfromleafofKalanchoeblosfeldiana
49　第 2期　　　　　　　　　　孙利娜:长寿花嫩叶片的组织培养研究
2.2　不同培养基对长寿花嫩叶片诱导愈伤或不定
芽的影响
接种第 10天时 , 叶片边缘或页面上长出绿色
小突起 , 第 18天时接种在培养基 A、 B、 C上的叶
片诱导出的绿色小突起逐渐膨大成疏松的愈伤组
织 , 色泽光亮鲜绿 (见图 1);第 23天时接种在培
养基 F上的叶片诱导的愈伤开始膨大 , 呈黄绿色 ,
愈伤团不如 A、 B、 C培养基上的大;接种第 25天
时 , 培养基 D、 E上的叶片直接分化出带有两片小
叶的绿色不定芽;接种 37天时 , A、 B、 C、 F培养
基上的愈伤也都分化出不定芽 , 具体分化情况见表
4。由表 4可知 , 6种培养基均能分化不定芽 , 以 D
培养基 (MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.2mg/L)分
化的再生不定芽数最高 , 芽苗也最健壮 (见图 2),
因此 , D培养基比较适合长寿花嫩叶片愈伤和不定
芽的分化诱导 。
图 2　长寿花不定芽诱导的芽苗
Fig.2　Seedlingsinducedfromadventiverootbudof
Kalanchoeblossfeldiana
表 4　不同激素种类和浓度对长寿花嫩叶片诱导愈伤或不定芽的影响
Tab.4　EffectofhormonetypesandconcentrationsontheformationofcallusandadventiverootforleafofKalanchoeblossfeldiana
培养基
种类
接种块
数 /块
诱导愈伤
组织数 /块
诱导率
/%
愈伤分不定芽
数 /个
分化率
/%
再生不定芽
数 /个
D 36 0 0 0 0 412
E 36 0 0 0 0 385
A 36 36 100 33 92 376
B 36 31 86 26 84 301
C 36 28 78 22 79 269
F 36 25 70 19 76 238
2.3　不同培养基对长寿花不定芽生根的影响
继代于 D培养基上的不定芽生长到 30天时 ,
芽高 0.5 ～ 1.5 cm, 少数不定芽生出白色细长的
根 , 结果见表 5。将未生根的不定芽转接在上述 5
种生根培养基上 , 培养 10天后 , 培养基 ①、 ②、
③、 ④上的不定芽都有白色的细根出现 , 20天左
右根变粗变长 , 4种培养基每株平均生根数分别为
4.25条 、 3.9条 、 2.5条 、 2.35条 , 根长 1.5 ～
6.0cm, 其中①号培养基上的生根结果最好 (见图
3)。培养基⑤上的不定芽 16天时才开始长出少量
根 , 每株平均生根数 1.8条 , 根长 1.0 ～ 4.0 cm。
由此可知 , 上述 5种生根培养基均能诱导长寿花不
定芽生根 , 但以培养基 ①, 即不定芽接种到 1/2
MS+IBA0.15 mg/L+6-BA0.15mg/L培养基
上的生根效果最好 。
图 3　长寿花不定芽生根效果
Fig.3　ResultofrootingfromadventiverootbudofKalanchoeblossfeldiana
50 西　部　林　业　科　学 　　　　　　　　　　　　　2011年　
表 5　不同激素种类和浓度对长寿花不定芽生根的影响
Tab.5　Effectofhormonetypesandconcentrationson
theformationofadventiverootbudforleafof
Kalanchoeblossfeldiana
培养基序号 每株平均生根数 /条 每株平均根长 /cm
① 4.25 5.1
② 3.9 4.2
③ 2.5 3.5
④ 2.35 3.0
⑤ 1.8 2.3
2.4　移栽
将长成完整植株的幼苗置于室外培养 3天后揭
开瓶盖再放置 7天 , 然后取出幼苗并清洗干净 , 移
入蛭石︰珍珠岩为 1︰ 1的混合基质中 , 并用 0.5%
多菌灵溶液消毒基质 , 最后将移栽苗放在阴凉处并
保湿 , 10天后成活率可达 90%。
3　结语
(1)研究结果表明 , 长寿花嫩叶片消毒的最
佳处理为:75%酒精灭菌 30 s, 无菌水冲洗 4次 ,
再用 0.1%升汞消毒 12min, 最后再用无菌水冲洗
7次 , 污染率只有 2 %, 未污染的叶片表型正常。
(2)培养基中激素的种类 、浓度对长寿花嫩叶
片诱导愈伤 、不定芽有很大影响 。供试的 6种愈伤
诱导培养基均可诱导出不定芽 , 培养基 A、 B、 C、
F培养的外植体都要经过愈伤阶段然后再分化出不
定芽 , 而培养基 D(MS+6-BA3.5mg/L+NAA
0.2 mg/L)、 E(MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.5
mg/L)可以不经愈伤便直接分化出不定芽。 MS+
6-BA3.5mg/L+NAA0.2 mg/L分化的不定芽数
为最多 , 可以确定其为长寿花嫩叶片的最佳分化培
养基 , 该培养基可缩短组培时间 。
(3)长寿花极易生根 , 不定芽在分化培养基
MS+6-BA3.5 mg/L+NAA0.2 mg/L上短时间内
便可生根 , 但最适生根诱导培养基为 1/2 MS+
IBA0.15 mg/L+6-BA0.15 mg/L。
(4)该实验采用的是长寿花一个品种的嫩叶
片 , 由于品种不同 、外植体不同所需要的组培条件
也有差异 , 所以在尝试长寿花其他品种或外植体的
组织培养时需要在此基础上进一步探寻 。
参考文献:
[ 1]蔡　玲 ,王以红 , 吴幼媚 , 等.山苍子芽器官组培技
术研究 [ J] .西部林业科学 , 2010, 39(4):44-47.
[ 2]苏慧 ,黄凤兰 , 尉红梅.长寿花快繁体系的建立 [ J] .
内蒙古农业科技 , 2005(2):23.
[ 3]崔广荣 , 王彦.长寿花组织培养的研究 [ J] .河南职
业技术师范学院学报 , 2003, 31(1):51.
[ 4]周南镚 , 洪军孟.长寿花快速殖技术 [ J] .农业科技
通讯 , 2001(11):15.
[ 5]高建莉 , 王定开.长寿花组织培养技术研究 [ J] .云
南农业科技 , 2009(5):12.
[ 6]杨晓琴 ,王程熹 , 童亚丽 , 等.滇丁香非试管智能化
快繁技术研究 [ J] .西部林业科学 , 2010, 39(4):69-73.
51　第 2期　　　　　　　　　　孙利娜:长寿花嫩叶片的组织培养研究