全 文 ：·论著·
蕨麻提取物的体外抗ＨＩＶ－１活性及毒性研究
刘铁军１，黄洋２，徐维四２，孙坚萍３，刘玉磊２，李灵芝１，４，马丽英２
（１．武警后勤学院药物化学教研室，天津　３００１６２；２．中国疾病预防控制中心 性病艾滋病中心病毒免疫室，北京　１０２２０６；
３．中国医学科学院病原生物研究所，北京　１００７３０；４．天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室，天津　３００１６２）
摘要：目的　研究蕨麻提取物的抗艾滋病病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）活性及毒性。方法　用 ＨＩＶ－１实验室适应株
ＳＦ３３、临床分离株ＸＪＤＣ２５７和０２０１００９６８、假病毒颗粒９－１４，１８－３６，７４－２和Ｚ２０－１１分别感染ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ－４，利用基
于ＴＺＭ－ｂｌ细胞的荧光素酶检测体系和基于 ＭＴ－４细胞的Ｐ２４抗原检测方法，观察蕨麻提取物抑制 ＨＩＶ－１病毒复
制的活性；用不同稀释度的蕨麻提取物与ＴＺＭ－ｂｌ．ＭＴ－４．ＰＢＭＣｓ共培养，使用Ｃｅｌ　Ｃｏｕｎｔｉｎｇ　Ｋｉｔ－８检测活细胞的
数量，观察蕨麻提取物对相应细胞的毒性作用。结果　利用 ＭＴ－４细胞和ＴＺＭ－ｂｌ细胞测得蕨麻提取物对ＳＦ３３的
半数抑制浓度（ＩＣ５０）及选择性指数（ＳＩ）分别为６．２μｇ／ｍＬ，２６．４和４．７μｇ／ｍＬ，７３．５。蕨麻提取物对 ＨＩＶ－１临床分
离株ＸＪＤＣ２５７和０２０１００９６８的ＩＣ５０和治疗指数（ＴＩ）分别为２．１μｇ／ｍＬ，７０．６和１．９μｇ／ｍＬ，７７．６；对 ＨＩＶ－１假病
毒颗粒９－１４、１８－３６、７４－２和Ｚ２０－１１的ＩＣ５０分别为１．８μｇ／ｍＬ、１．０μｇ／ｍＬ、３．４μｇ／ｍＬ和３．５μｇ／ｍＬ，ＴＩ分别
为８１．９、１４７．５、４３．４和４２．１。结论　蕨麻提取物在体外具有一定的抑制 ＨＩＶ－１复制活性。
关键词：蕨麻提取物；抗艾滋病病毒Ⅰ型活性；毒性复制
中图分类号：Ｒ　５１２．９１；Ｒ　２８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１６７２－５６６２（２０１２）０４－０２１４－０４
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ＨＩＶ－１ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔ　ＬＩＵ　Ｔｉｅ－ｊｕｎ，ＨＵＡＮＧ　Ｙａｎｇ，
ＸＵ　Ｗｅｉ－ｓｉ，ｅｔ　ａｌ．（Ｌｏｇｉｓｔｉｃｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ａｒｍｅｄ　Ｐｏｌｉｃｅ　Ｆｏｒｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１６２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ＨＩＶ－１ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔ．Ｍｅｔｈ－
ｏｄｓ　ＴＺＭ－ｂｌ　ａｎｄ　ＭＴ－４ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＨＩＶ－１ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ－ａｄａｐｔｅｄ　ｓｔｒａｉｎ（ＳＦ３３），ｔｗｏ　ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉ－
ｓｏｌａｔｅｓ（ＸＪＤＣ２５７，０２０１００９６８）ａｎｄ　ｆｏｕｒ　ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓｅｓ（９－１４，１８－３６，７４－２ａｎｄ　Ｚ２０－１１）．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎ－
ｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＩＶ－１ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＴＺＭ－ｂｌ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ
ａｎｄ　Ｐ２４ａｎｔｉｇｅｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＭＴ－４ｃｅｌ　ｌｉｎｅ．．Ｔｈｅ　ＴＺＭ－ｂｌ，ＭＴ－４ａｎｄ　ＰＢＭＣｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｗｉｔｈ　ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｎ　ＣＣＫ－８ｋｉｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｌｉｖｉｎｇ　ｃｅｌｓ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＩＣ５０ａｎｄ　ＳＩ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉｌｌ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＦ３３ｗａｓ　６．２μｇ／ｍＬ，２６．４ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＭＴ－４ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ａｎｄ　４．７μｇ／ｍＬ，７３．５ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＴＺＭ－ｂｌ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ．
Ｔｈｅ　ＩＣ５０ａｎｄ　ＴＩ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ＸＪＤＣ２５７ａｎｄ　０２０１００９６８ｗａｓ　２．１μｇ／ｍＬ，７０．６ａｎｄ
１．９μｇ／ｍＬ，７７．６，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ＩＣ５０ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓｅｓ　９－１４，１８－３６，７４－２ａｎｄ
Ｚ２０－１１ｗａｓ　１．８μｇ／ｍＬ，１．０μｇ／ｍＬ，３．４μｇ／ｍＬ　ａｎｄ　３．５μｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｉｎｄｅｘ（ＴＩ）ｗａｓ　８１．９，
１４７．５，４３．４ａｎｄ　４２．１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ
ＨＩＶ－１　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌ　ａｎｓｅｒｉｎｅ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔ；Ａｎｔｉ　ＨＩＶ－１ａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｔｏｘｉｃｔｉｙ；Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ
收稿日期：２０１１－１１－１５；修回日期：２０１１－１２－３０
基金项目：国家自然科学基金项目（Ｎｏ．３０６７２７７４，８１０７３１５２），天
津市重点项目（１０ＪＣＺＤＪＣ２１１００）
Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．３０６７２７７４
Ｎｏ．８１０７３１５２）ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｇｒｅａｔ　Ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｉａｎ－
ｊｉｎ（１０ＪＣＺＤＪＣ２１１００）．
作者简介：刘铁军（１９８６－），男，吉林省九台市人，硕士在读。
通讯作者：李灵芝，教授，博士生导师。Ｅｍａｉｌ：ｌｚｈｘ＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ；马
丽英，研究员，博士生导师。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｙｉｎｇｍａ５５６６＠ｃｈｉｎａａｉｄｓ．ｃｎ
　　自２００３年我国开展大规模艾滋病（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　 Ｉｍｍｕｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＩＤＳ）病人免费抗病毒
治疗后，ＡＩＤＳ的发病率和死亡率大大降低［１］。但由
于目前临床使用的抗艾滋病病毒（Ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄ－
ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ，ＨＩＶ）药物引起的不良反应以及耐药
毒株的迅速产生，使得许多抗 ＨＩＶ药物应用受到限
制［２－３］。迄今，被美国食品和药品管理局（ＦＤＡ）批准
的３１种抗艾滋病药物中，我国已批准进口的只有７
种，而进口药品价格昂贵，使得临床应用受限。因此
寻找安全有效的抗 ＨＩＶ药物，仍然是当前我国艾滋
病治疗中面临的机遇与挑战。
我国临床已经采用中草药辅助艾滋病治疗，但疗
４１２ 中国艾滋病性病　２０１２年４月第１８卷第４期　　Ｃｈｉｎ　Ｊ　ＡＩＤＳ　ＳＴＤ　Ｖｏｌ．１８Ｎｏ．４Ａｐｒ．２０１２
效尚须通过大量严密的实验来证实［４］。蕨麻为蔷薇
科委陵菜属植物鹅绒委陵菜（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ
Ｌ．）的地下块根，广泛分布于我国高原高寒地区，为
藏民常用的保健食品。研究［５］发现，蕨麻的水提液、
醇提液、蕨麻多糖均能增强机体免疫功能，蕨麻总皂
苷有显著的抗乙肝病毒活性［６］，还具有抗氧化、抗缺
氧及抗心肌缺血损伤的作用［７－８］。但迄今尚未见关
于蕨麻抗 ＨＩＶ活性的报道。文章通过体外实验研究
了蕨麻提取物对 ＨＩＶ－１实验室适应株、临床分离株
及假病毒的抑制作用，为开发具有我国自主产权的抗
艾滋病药物提供可能。
１　材料与方法
１．１　蕨麻来源及提取物制备　蕨麻购自青海玉树，
粉碎后以７０％乙醇回流提取，减压浓缩后以热水分
散，石油醚萃取脱脂。水层过滤得澄清液，以Ｄ－１０１
大孔树脂，先以３倍量的水洗，然后以３倍量３０％乙
醇洗脱，收集３０％乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥
即得棕色粉末。
１．２　细胞与毒株　ＴＺＭ－ｂｌ细胞来源于 Ｈｅｌａ细胞
系，稳定表达 ＨＩＶ－１感染细胞受体ＣＤ４ 和辅助受体
ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５，携带有 ＨＩＶ长末端重复系列（Ｌｏｎｇ－
ｔｅｒｉｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）启动的荧光素酶（Ｌｕｃ）和Ｅ－
．ｃｏｌｉβ－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因。培养条件：１０％胎
牛血清（ＦＢＳ，ＧＩＢＣＯ公司）、１００Ｕ／ｍＬ青霉素、１００
ｍｇ／ｍＬ链霉素、１％Ｌ－谷氨酰胺的ＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ
公司）。ＭＴ－４细胞是人嗜 Ｔ 淋巴细胞病毒Ⅰ型
（Ｈｕｍａｎ　Ｔ－ｃｅｌ　ｌｙｍｔｈｏｔｒｏｐｉｃ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅⅠ，ＨＴＬＶ－
１）基因转化的人Ｔ淋巴细胞，被 ＨＩＶ－１感染后表达
Ｐ２４抗原。培养条件：１０％胎牛血清（ＦＢＳ，ＧＩＢＣＯ公
司）、１００Ｕ／ｍＬ青霉素、１００ｍｇ／ｍＬ链霉素、１％Ｌ－谷
氨酰胺的ＲＰＭＩ１６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）。ＳＦ３３毒株为
实验室 ＨＩＶ适应株，同时利用辅助受体ＣＸＣＲ４与
ＣＣＲ５感染靶细胞。ＴＺＭ－ｂ、ＭＴ－４、ＳＦ３３均由美国
国家卫生研究院（ＮＩＨ）ＡＩＤＳ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｒｅｆｅｒ－
ｅｎｃｅ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　Ｐｒｏｇｒａｍ惠赠。两株临床分离病毒株
ＸＪＤＣ２５７和０２０１００９６８分别为 ＨＩＶ－１ＣＲＦ＿０７和Ｂ′
亚型病毒［９］。
１．３　ＨＩＶ－１病毒的制备和滴定　ＨＩＶ－１感染经植物
血凝素（ＰＨＡ　５μｇ／ｍＬ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）刺激的正常外
周血 单 个 核 淋 巴 细 胞 （Ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａ　ｂｌｏｏｄ
ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｓ，ＰＢＭＣｓ）２ｈ后，培养７ｄ。检测培
养上清液中的 ＨＩＶ　Ｐ２４，当Ｐ２４的浓度大于２ｎｇ／
ｍＬ时，收集病毒并冻存于液氮中备用。将病毒分别
感染 ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ－４及ＰＢＭＣ细胞，分别检测并计
算５０％细胞的感染培养剂量（Ｍｅｄｉａｎ　ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ　ｄｏｓｅ
ｏｆ　ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ，ＣＣＩＤ５０）。
１．４　蕨麻提取物体外细胞毒性试验［１０］　蕨麻提取
物在体外对ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ－４及ＰＢＭＣ的毒性试验采
用ＸＴＴ显色后，通过比色法测吸光度。将细胞以５
×１０４／孔的浓度加入９６孔培养板中，每孔１００μＬ，同
时加入１００μＬ经梯度稀释的蕨麻提取物，３７℃条件
下分别培养４ｄ后离心，弃上清，洗去带有蕨麻提取
物的培养基，加入２５μＬ的ＣＣＫ－８试剂，３７℃孵育４
ｈ，通过酶标仪读取４５０ｎｍ处的吸光度，用软件ｃａｌ－
ｃｕｓｙｎ计算引起５０％细胞毒性的浓度（５０％ｃｙｔｏｔｏｘ－
ｉｃｉｔｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＣＣ５０）和９０％细胞毒性的浓度
（９０％ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＣＣ９０）。
１．５　基于ＴＺＭ－ｂｌ的病毒抑制实验［１１］　 将ＴＺＭ－ｂｌ
细胞接种到９６孔平板（１×１０４／孔）培养，２４ｈ后弃上
清，加入２００ＣＣＩＤ５０／孔病毒，并以２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／
ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、１．２５μｇ／ｍＬ、０．６２５μｇ／ｍＬ
浓度加入蕨麻提取物，同时设立细胞对照（不加病毒
和药物）与病毒对照（加病毒不加药物），在５％ＣＯ２
３７℃孵育４８ｈ后，检测ＴＺＭ－ｂｌ细胞中的荧光强度，
采用Ｒｅｅｄ－Ｍｅｕｅｃｈ法计算５０％病毒被抑制时的提取
物浓度（５０％ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＩＣ５０）和９０％
病毒被抑制时的提取物浓度（９０％ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＩＣ９０）。
１．６　基于ＭＴ４细胞的病毒抑制试验　９６孔板中加
入１００μＬ／孔的增殖期 ＭＴ－４（２×１０
５／ｍＬ），并加入
１００ＣＣＩＤ５０／孔 ＨＩＶ－１病毒，然后以２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／
ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、１．２５μｇ／ｍＬ、０．６２５μｇ／ｍＬ
浓度加入蕨麻提取物。５％ＣＯ２３７℃孵育，第４天收
集１００μＬ上清液，用 ＨＩＶ－１Ｐ２４抗原检测试剂盒
（Ｖｉｒｏｎｏｓｔｉｋａ　ＨＩＶ－１ Ｍｉｃｒｏｅｌｉｓａ　ｓｙｓｔｅｍ）检测 ＨＩＶ
Ｐ２４抗原［１０］。采用Ｒｅｅｄ－Ｍｅｕｅｃｈ法计算ＩＣ５０。ＣＣ５０
与ＩＣ５０的比值即为选择性指数（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｉｎｄｅｘ，ＳＩ）
２　结果
２．１　蕨麻提取物对细胞的毒性作用　蕨麻提取物对
ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ－４两种细胞系和人外周血单核细胞的
ＣＣ５０分别为３４５．４μｇ／ｍＬ、１６３．４μｇ／ｍＬ 和９２．５
μｇ／ｍＬ，ＣＣ９０分别为５４９．４μｇ／ｍＬ、２８７．０μｇ／ｍＬ和
１７９．２μｇ／ｍＬ。
２．２　蕨麻提取物对 ＨＩＶ－１的抑制作用　蕨麻提取
物对实验室适应株ＳＦ３３感染 ＭＴ－４和ＴＺＭ－ｂｌ细胞
的ＩＣ５０分别为６．２μｇ／ｍＬ和４．７μｇ／ｍＬ，ＩＣ９０分别为
５１２中国艾滋病性病　２０１２年４月第１８卷第４期　　Ｃｈｉｎ　Ｊ　ＡＩＤＳ　ＳＴＤ　Ｖｏｌ．１８Ｎｏ．４Ａｐｒ．２０１２
１６．９μｇ／ｍＬ 和 １６．６μｇ／ｍＬ，ＳＩ分别为 ２６．４ 和
７３．５。
由表 １ 可 见，蕨 麻 提 取 物 对 临 床 分 离 株
ＸＪＤＣ２５７和０２０１００９６８复制具有抑制作用，ＩＣ５０分别
为２．１μｇ／ｍＬ和１．９μｇ／ｍＬ，治疗指数（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｉｎｄｅｘ，ＴＩ）分别为７０．６和７７．６。对４株ｅｎｖ区来源
于ＣＲＦ０７＿ＢＣ、Ｂ＇和ＣＲＦ０１＿ＡＥ的三种我国主要流行
亚型 ＨＩＶ－１毒株的假病毒颗粒也具有一定的抑制作
用，ＩＣ５０值在１．０～３．５μｇ／ｍＬ之间。
表１　蕨麻提取物对临床分离病毒和假病毒
的抑制作用
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ａｎｓｅｒｉｎｅ
Ｌ．ｏｎ　ｔｈｅ　ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＨＩＶ－１
ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓｅｓ
临床病毒／假病毒
ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ
／ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓ
亚型
ｓｕｂｔｙｐｅ
ＩＣ５０
（μｇ／ｍＬ）
ＴＩ
临床分离株ＸＪＤＣ２５７
ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ＸＪＤＣ２５７
Ｂ’／Ｃ　 ２．１　 ７０．６
临床分离株０２０１００９６８
ＨＩＶ－１ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　０２０１００９６８
Ｂ’ １．９　 ７７．６
９－１４假病毒
９－１４ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓ
Ｂ＇／Ｃ　 １．８　 ８１．９
１８８－３６假病毒
１８８－３６ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓ
ＡＥ　 １．０　 １４７．５
７４－２假病毒
７４－２ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓ
Ｂ＇／Ｃ　 ３．４　 ４３．４
Ｚ２０－１１假病毒
Ｚ２０－１１ＨＩＶ－１ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ　ｖｉｒｕｓ
Ｂ＇ ３．５　 ４２．１
３　讨论
ＴＺＭ－ｂｌ细胞来源于 Ｈｅｌａ细胞系，稳定表达
ＨＩＶ－１感染细胞受体 ＣＤ４ 和辅助受体 ＣＸＣＲ４、
ＣＣＲ５。ＴＺＭ－ｂｌ细胞作为指示细胞携带有 ＨＩＶ
ＬＴＲ启动的荧光素酶（Ｌｕｃ）和Ｅ．ｃｏｌｉβ－半乳糖苷酶
（β－ｇａｌ）基因。细胞一旦被 ＨＩＶ或ＳＩＶ感染，Ｔａｔ蛋
白表达转录激活，启动报告基因活化表达，即可通过
荧光素酶的表达情况表现病毒的感染情况，原代病毒
和假病毒均可感染。ＭＴ－４细胞是 ＨＴＬＶ－１基因转
化的人Ｔ淋巴细胞，被ＨＩＶ－１感染后表达Ｐ２４抗原，
非常适合进行抗病毒药物的细胞毒性检测。本研究
利用ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ－４和ＰＢＭＣｓ等三种细胞测试了蕨
麻提取物对 ＨＩＶ病毒实验适应株（ＳＦ３３）感染细胞
的抑制作用和对细胞的毒性作用，结果表明：蕨麻提
取物的细胞毒性按ＴＺＭ－ｂｌ、ＭＴ４、ＰＢＭＣｓ的顺序依
次增大，推测原因可能有两个：其一可能是由于ＰＢ－
ＭＣｓ不具有增殖能力，而 ＴＺＭ－ｂｌ和 ＭＴ４为细胞
系，均具有增殖能力；其二，ＴＺＭ－ｂｌ为贴壁生长细
胞，在实验中细胞预先培养过夜可能增加了其对蕨麻
提取物的适应能力。从实验结果可知，两种方法均显
示蕨麻提取物对 ＨＩＶ实验室适应株有抑制作用，表
明其具有一定的抗 ＨＩＶ活性。ＨＩＶ具有高变异性，
在我国流行的主要 ＨＩＶ毒株是 ＨＩＶＣＲＦ－１＿０７ＢＣ、
Ｂ′和ＣＲＦ０１＿ＡＥ亚型。本实验所用的４种假病毒颗
粒ｅｎｖ区均来源于ＣＲＦ０７＿ＢＣ、ＣＲＦ０７＿Ｂ′和ＣＲＦ０１＿
ＡＥ，结果表明蕨麻提取物对假病毒和临床分离株均
具有抑制作用，其ＩＣ５０为１～３．４μｇ／ｍＬ，说明蕨麻提
取物对于我国主要流行 ＨＩＶ亚型的复制均有抑制作
用。
本实验室前期对蕨麻提取物进行了化学研究，证
实提取物中含有β－谷甾醇、熊果酸、蔷薇酸、委陵菜
酸、野蔷薇苷、刺梨苷及多酚类等。有研究［１２］报道，
齐墩果酸抗 ＨＩＶ的ＩＣ５０为１．７μｇ／ｍＬ，ＴＩ为１２．８；
其在１０μｍｏｌ／Ｌ时对 ＨＩＶ蛋白酶的抑制率为４３％，
在８０μｍｏｌ／Ｌ时对ＨＩＶ蛋白酶的抑制率为９０％
［１３］。
田英等［１４］证实，熊果酸能抑制 ＨＩＶ蛋白酶，其ＩＣ５０
为８μｍｏｌ／Ｌ。Ｐａｒｋ　ＪＣ等
［１５］从蔷薇科植物玫瑰根部
分离得到的野蔷薇苷，在１００μｍｏｌ／Ｌ时对 ＨＩＶ－１蛋
白酶的抑制率为５３％，委陵菜酸对 ＨＩＶ蛋白酶具有
很微弱的抑制作用，在１００μｍｏｌ／Ｌ时对 ＨＩＶ蛋白酶
的抑制率为２．３％。从文献报道可以看出，已报道的
蕨麻中具有抗 ＨＩＶ活性成分作用靶点多为 ＨＩＶ蛋
白酶。按照 ＨＩＶ－１的生命周期，蛋白酶作用于病毒
的成熟过程，将翻译产物水解为具有活性的结构蛋白
和功能蛋白，此过程发生在病毒整合到宿主细胞之
后，因此通过检测Ｐ２４蛋白可反映蛋白酶抑制剂的
作用效果。但本实验中ＴＺＭ－ｂｌ细胞的报告基因在
病毒进入细胞反转录后即可被 ＨＩＶ的ｔａｔ蛋白激
活，从而产生可检测的绿色荧光，在病毒包装成熟阶
段，ＴＺＭ－ｂｌ细胞的报告基因已被激活。因此ＴＺＭ－
ｂｌ细胞并不适用于蛋白酶抑制剂抗 ＨＩＶ－１活性检
测。但本研究结果表明，蕨麻提取物在基于ＴＺＭ－ｂｌ
细胞的实验中仍显示出抑制 ＨＩＶ－１的活性，且其活
性不低于基于 ＭＴ－４细胞的实验结果。提示本蕨麻
提取物并不仅仅作用于蛋白酶，有可能作用于病毒整
合到宿主细胞之前的环节。同时也提示上述提到的
几种化合物可能并非蕨麻中具有抗 ＨＩＶ－１活性的唯
一成分。蕨麻中是否还含有其他未被发现的抗
ＨＩＶ－１活性成分，尚需进一步研究确定。
蕨麻在对 ＨＩＶ－１有抑制作用的同时对免疫系统
也有增强作用。提示其可能具有进一步研究开发抗
６１２ 中国艾滋病性病　２０１２年４月第１８卷第４期　　Ｃｈｉｎ　Ｊ　ＡＩＤＳ　ＳＴＤ　Ｖｏｌ．１８Ｎｏ．４Ａｐｒ．２０１２
ＨＩＶ－１药物的价值，同时也提示ＡＩＤＳ病人常食用蕨
麻可能有益于ＡＩＤＳ的治疗。
参考文献：
［１］Ｚｈａｎｇ　Ｆ，Ｄｏｕ　Ｚ，Ｙｕ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｉｇｈｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ａｎｔｉｒｅｔ－
ｒｏｖｉｒａｌ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ＨＩＶ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｆｏｒｍｅｒ　ｐｌａｓｍａ
ｄｏｎｏｒｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２００８，４７（６）：８２５－８３３．
［２］Ｍａ　Ｌ，Ｓｕｎ　Ｊ，Ｘｉｎｇ　Ｈ，Ｓｉ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｐａｔ－
ｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ＨＩＶ－１ｓｕｂｔｙｐｅ　Ｂ＇（Ｔｈａｉ　Ｂ）ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ
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７１２中国艾滋病性病　２０１２年４月第１８卷第４期　　Ｃｈｉｎ　Ｊ　ＡＩＤＳ　ＳＴＤ　Ｖｏｌ．１８Ｎｏ．４Ａｐｒ．２０１２