全 文 ：长寿花叶片离体快繁技术研究
刘宇麒 张 英 宗宪春 *
（牡丹江师范学院生命科学与技术学院，黑龙江牡丹江 157012）
摘要 以长寿花幼嫩叶片为外植体，研究不同灭菌时间对长寿花幼嫩叶片再生能力的影响以及不同激素配比对愈伤组织诱导、不定
芽诱导和生根诱导的影响。结果表明：长寿花幼嫩叶片最佳的灭菌方式为 75%酒精消毒 30 s，无菌水冲洗 4 次，再用 0.1%升汞消毒 7 min，
无菌水冲洗 5次；愈伤组织诱导的最适培养基配方为 MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L；不定芽诱导分化的最适培养基配方为 MS+6-BA
2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；不定芽诱导生根的最适培养基配方为 1/2 MS+IBA 0.2 mg/L。
关键词 长寿花；嫩叶片；组织培养；快速繁殖
中图分类号 S682.035.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）07-0143-02
Study on Rapid Propagation Technique of Leaves in vitro of Kalanchoe blossfeldiana
LIU Yu-qi ZHANG Ying ZONG Xian-chun*
（College of Life Science and Technology，Mudanjiang Normal University，Mudanjiang Heilongjiang 157012）
Abstract The research using explant from seeding leaf of Kalanchoe blossfeldiana，the regeneration ability of the leaf was tested under different
duration of sterilization，and the effects of different hormones combination on the induction of callus 、adventitious buds and roots of Kalanchoe
blossfeldiana.The results showed that the best way of sterilization was sterilizing the leaf in 75% ethanol for 30 seconds ，washing 4 times with
disinfection water，then in 0.1% mercury bichloride for 7 minutes and washing with disfection water for 5 times ；the optimum medium for the induction
of leaves was MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L；the suitable culture medium for bud differentiation and proliferation was MS+6-BA 2.0 mg/L+
NAA 0.1 mg/L；the optimum rooting medium was 1/2 MS+IBA 0.2 mg/L.
Key words Kalanchoe blossfeldiana；seedling leaf；tissue culture；rapid propagation
长寿花（Kalanchoe blossfeldiana），又叫矮生伽蓝菜 、寿
星花、假川莲，是景天科（Crassulaceae）伽蓝菜属（Kalanchoe）
多年生肉质草本植物 [1]。长寿花原产自马达加斯加岛，其花
色鲜艳，花期长，观赏效果极佳，20 世纪 90 年代初传入我
国，近年随着进口花卉大量的进入中国市场 ，成为了一种
极具发展潜力的“新品种花卉”[2]。
长寿花因其耐干旱、花期长、花色鲜艳、易栽培等特点
在市场上深受消费者喜爱，是国际花卉市场发展最快的室
内盆栽花卉之一。其繁殖方法一般是播种和扦插，但这 2 种
方法都易受季节影响。笔者以长寿花叶片为外植体，以 MS
为基本培养基，研究不同激素配比对长寿花愈伤组织生长、
不定芽诱导以及生根效果的影响，以期得到各培养阶段的
最佳培养基配方，为国内长寿花组培苗工厂化生产提供理
论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
健康的市售盆栽长寿花幼嫩叶片。
1.2 培养基及培养条件
1.2.1 培养基制备。基本培养基为 MS 或 1/2 MS，各培养基
蔗糖浓度为 3%，琼脂成分为 0.7%，pH 值为 5.8，121 ℃高压
灭菌 20 min[3-8]。
1.2.2 培养条件。温度 23~26 ℃，光照时间 12 h/d，光照强度
1 000 lx 左右培养[9-13]。
1.3 试验方法
1.3.1 外植体灭菌。取长寿花健康幼嫩的叶片，用流水冲洗
10 min，移至超净工作台内操作，用 75%乙醇对叶片进行消
毒，无菌水冲洗 4 次，0.1%升汞消毒，无菌水冲洗 5 次。将灭
菌后的叶片切成约 0.5 cm×0.5 cm 的小块接种在诱导愈伤培
养基中，每瓶放置 5 小块，每个处理水平接种 6 瓶，即每个
水平共接种 30 块外植体，置于培养室中培养，每天观测 1
次并记录，对不同消毒时长的消毒效果进行比较 [14-18]。叶片
消毒时长设置 4 个不同的处理水平，分别为 75%酒精 25 s+
0.1%升汞 3 min（A1）；75%酒精 30 s+0.1%升汞 5 min（A2）；
75%酒精 35 s+0.1%升汞 7 min（A3）；75%酒精 40 s+0.1%升
汞 9 min（A4）。
1.3.2 愈伤组织的诱导。取相同条件下消毒后的叶片进行
切块，切成约 0.5 cm×0.5 cm 的小块，接种在不同激素配比
的诱导愈伤培养基中，每瓶放置 5 小块，每个处理水平接种
6 瓶，即每个水平共接种 30 块外植体，置于培养室中培养，
定期观测愈伤组织生长及增殖的情况并进行记录 [19-20]。对激
素配比设置 5个不同处理水平，分别为 MS+6-BA 0.2 mg/L+
2，4-D 0.1 mg/L （B1），MS+6-BA 0.2 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L
（B2），MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L（B3），MS+6-BA
0.5 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L（B4），MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D
0.4 mg/L（B5）。
1.3.3 愈伤组织的芽诱导。把愈伤组织切成小块转接至分
化培养基，每瓶放置 5 小块，每个处理水平接种 6 瓶，即每
个水平共接种 30 块愈伤组织，置于培养室中培养，定期观
测芽的分化情况，接种后 30 d 进行芽增殖数统计。对激素配
比设置 4 个不同处理水平，分别为 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA
0.1 mg/L（C1），MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L （C2），MS+
6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（C3），MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA
0.2 mg/L（C4）。
1.3.4 根的诱导。待不定芽生长至 2~3 cm 高时，将健壮的
单株芽苗切下转接至生根培养基中，每瓶放置 5 株，每个处
基金项目 牡丹江师范学院研究生创新项目（yjsxscx2014-29mdjnu）；
牡丹江市科技局项目（Z2014n011）。
作者简介 刘宇麒（1990-），女，黑龙江鸡西人，在读硕士。研究方向：
遗传学植物基因工程。
* 通讯作者
收稿日期 2016-01-19
林业科学现代农业科技 2016年第 7期
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林业科学 现代农业科技 2016年第 7期
理水平接种 6 瓶，即每个水平共接种 30 株芽苗，置于培养
室中培养，观测不定根的生长情况并记录。对激素配比设置
4 个不同处理水平，分别为 MS（D1），MS+IBA 0.2 mg/L（D2），
1/2 MS（D3），1/2 MS+IBA 0.2 mg/L（D4）。
2 结果与分析
2.1 不同灭菌时长对长寿花叶片灭菌效果的影响
接种 15 d后对叶片的污染率、死亡率、成活率进行统计。
处理 A3、A4 等 2 个处理污染率最低，分别为 20%和 30%；
处理 A1、A3 等 2 个处理死亡率最低， 分别为 5%和 10%；
处理A2、A3等 2 个处理成活率较高，分别为 45%和 70%。因
此，处理 A3 的处理方式为最佳，即先用 75%酒精消毒 30 s，
再用 0.1%升汞消毒 7 min，消毒后外植体的污染率为 20%，
死亡率为 10%，成活率为 70%。
2.2 不同激素配比对长寿花叶片愈伤组织诱导的影响
以 MS 为基本培养基添加不同浓度的 6-BA 及 2，4-D，
接种 30 d 后观察各激素配比对愈伤组织生长情况的影响，
并进行统计。
处理 B1、B2、B3、B4、B5的诱导率分别为 47%、87%、97%、
53%、47%，其中处理 B3的愈伤组织诱导率是最高的。因此，
处理B3 的激素配比为最佳 ，培养基配方为 MS+6-BA 0.5
mg/L+2，4-D 0.2 mg/L，愈伤组织的诱导率达 97%。
2.3 不同激素配比对长寿花不定芽诱导的影响
以 MS 为基本培养基，附加不同浓度的 6-BA 及 NAA，
将愈伤组织接种到继代分化培养基上，转接 40 d 后对不定
芽的分化情况进行统计 。处理 C1、C2、C3、C4 分化率分别
为 73%、80%、93%及 73%，其中处理 C3 的不定芽分化率
明显高于其他组。因此，处理 C3 的激素配比为最佳（图 1），
培养基配方为 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽
的分化率达 93%。
2.4 不同激素配比对长寿花芽苗根诱导的影响
转接 7 d 后对不定根的生长情况进行统计。处理 D1、
D2、D3、D4 的生根率分别为 80%、93%、70%、100%，其中处
理 D4 的生根率明显高于其他组 ，基部长出白色不定根
（图 2）。因此，处理 D4 的激素配比为最佳 ，培养基配方为
1/2 MS+IBA 0.2 mg/L，芽苗的生根率可达到 100%。
3 结论与讨论
通过对不同消毒时长影响长寿花叶片再生能力以及不
同激素配比影响长寿花愈伤组织生长、不定芽诱导和生根效
果的试验，长寿花嫩叶片最佳的消毒处理方式为：先用 75%
酒精消毒 30 s，无菌水冲洗 4 次，再用 0.1%升汞消毒 7 min，
无菌水冲洗 5 次。消毒后外植体的污染率为 20%，死亡率为
10%，成活率为 70%，这种外植体灭菌方法大大提高了无菌
外植体建立的成功率。愈伤组织诱导效果及生长状况最佳
的培养基配方为 MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L；诱导
不定芽分化的最适培养基配方为 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA
0.1 mg/L，其芽分化的效果最好；诱导不定芽生根的最适培
养基配方为 1/2 MS+IBA 0.2 mg/L，基部长出粗壮白色的不
定根。
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图 1 长寿花不定芽的增殖培养
图 2 长寿花不定芽的生根培养
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