全 文 ：ＨＰＬＣ法测定江南牡丹草块茎中齐墩果酸的含量
江 砚１ 戴纯辉２
１ 浙江省杭州市第一人民医院 浙江 杭州 ３１０００６
２ 浙江省医学科技教育发展中心 浙江 杭州 ３１０００６
关键词 江南牡丹草 齐墩果酸 ＨＰＬＣ法
江南牡丹草是一味有效的止血、止痛良药［１］，但
历代文献未见记载，以裘宝林［２］在浙江西北部湖州市
安吉县孝丰山地发现的该种植物根茎并在杭州植物园
栽培实验后发表的新种，命名为江南牡丹草Ｇｙｍｎｏ－
ｓｐｅｒｍｉｕｍ ｋｉａｎｇｎａｎｅｎｓｉｓ （Ｐ．Ｌ．Ｃｈｉｕ）Ｌｏｃｏｎｔｅ ｉｎ
Ｃａｎａｄ。研究表明其主要有效成分三萜皂苷类化合物
都是以齐墩果酸连糖为基本结构［３］，但至今尚未有齐
墩果酸含量的研究报道。为此，笔者采用 ＨＰＬＣ法对
江南牡丹草块茎中的齐墩果酸进行含量测定，并对测
定方法进行研究。
１ 仪器、材料与试剂
１．１ 仪器：高效液相色谱仪ｖａｒｉａｎｐｒｏｓｔａｒ２３０ （三元
梯度泵）ｐｒｏｓｔａｒ３３０ （二极管阵列检测器）ｐｒｏｓｔａｒ４１０
（自 动 进 样 器）；色 谱 柱 为 ＹＭＣ－ＰａｃｋＯＤＳ－Ａ 柱
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；电子天平ＢＰ２１１Ｄ （ｓａｒｔｏ－
ｒｉｕｓ）；微孔滤膜０．４５μｍ；隔膜真空泵 （津腾）。
１．２ 药材：江南牡丹草块茎采自临安市洪岭乡童家
村，由潘小平提供。经浙江中医药大学陈锡林教授分
类鉴定。药材 （块茎）烘干，打粉，过筛备用。
１．３ 试剂：齐墩果酸对照品 （中国生物制品检定所，
批号：０７０９－９８０３），甲醇 （色谱纯，默克公司，批号：
１００７１７５３），水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
２ 实验方法和结果
２．１ 色 谱 条 件：色 谱 柱：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＯＤＳ－Ａ 柱
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：Ｖ （甲醇）：Ｖ
（水）＝９０：１０；检测波长：２１０ｎｍ；流速：０．８ｍｌ／
ｍｉｎ；柱温：室温２５℃；进样量：１０μＬ。
２．２ 方法学考察：分述如下。
２．２．１ 对照品溶液的制备：精密称取减压干燥至恒
重的齐墩果酸对照品适量，置容量瓶中，甲醇超声溶
解并加至刻度，摇匀，制成含齐墩果酸０．２ｍｇ／ｍｌ的
对照品溶液。
２．２．２ 供试品溶液的制备：江南牡丹草块茎粉末
（过三号筛）低温干燥、衡重后取０．５ｇ，加入１５ｍｌ甲
醇，加热回流提取１．５ｈ，提取液过滤，于水浴挥去甲
醇，残渣加２０ｍｌ ４ｍｏｌ／Ｌ的盐酸加热回流３０ｍｉｎ，水
解液用氯仿萃取 （２０ｍｌ×３次），挥去氯仿，残渣用色
谱纯甲醇溶解并转移至５ｍｌ量瓶中，加至刻度摇匀；
经０．４５μｍ微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
２．２．３ 标准曲线与线性范围：精密吸取对照品溶液，
分别进样２μｌ、４μｌ、８μｌ、１２μｌ、１６μｌ、２０μｌ。按上述
色谱条件测定，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，其
对应的对照品进样量为横坐标，进行回归计算，得到
齐墩果酸的回归方程和相关系数为：Ｙ＝１．１６９０×
１０７ Ｘ－９．５００９×１０５，ｒ＝０．９９９４６９。且分别以各自的
峰面积值 （Ｙ）对进样量 （Ｘ）作图，得一直线，见
图１。以上结果表明：本方法中齐墩果酸在０．４１８２～
３．９７５５μｇ范围内与峰面积的线性关系良好。
图１ 齐墩果酸对照品的线性关系图
２．２．４ 精密度考察：精密吸取对照品溶液，连续进
样５次，每次１０μｌ，测定峰面积。计算得峰面积的
ＲＳＤ值为１．３１３８％。说明试验精密度良好。
２．２．５ 重复性考察：精密称取药材粉末 （过三号筛）
按 “２．２．２”方法平行制备样品５份 （ｎ＝３）。按２．１
项中色谱条件分别测定平均峰面积。计算其ＲＳＤ值
为２．２３２５％。说明试验方法重复性良好。
２．２．６ 稳定性考察：精密称药材粉末 （过三号筛）
按 “２．２．２”方法制备样品，在室温下保存，分别在
０，２，４，６，８，１０，１２小时测定其峰面积。计算其
ＲＳＤ值为２．６６％。说明样品在室温下保存１２小时以
内，稳定性良好。
２．２．７ 回收率试验：精密称取已知准确含量的产地２
粉末６份，每份０．５ｇ，按大约１∶１的比例精密加入
·１８３·浙江中医杂志２０１２年５月第４７卷第５期
齐墩果酸对照品适量，按２．２．２项方法进行处理，并
按２．１项中色谱条件进行测定，计算平均回收率为
９８．５８％，ＲＳＤ值为１．６７％。
２．３ 样品测定结果：精密称取药材粉末 （过三号筛）
各０．５ｇ （ｎ＝３），按２．２．２项进行处理。分别精密吸
取样品溶液１０μｌ，进样，测定峰面积后计算其平均含
量为０．６５３１ｍｇ／ｇ。
３ 小结与讨论
３．１ 检测波长的选择：取齐墩果酸对照品适量，以
甲醇作为溶剂，在２００～２８０ｎｍ波长范围内进行扫描。
扫描结果表明，齐墩果酸甲醇液最大吸收波长为
２０５ｎｍ，在此检测波长下，流动相中甲醇的紫外吸收
干扰较大，基线不稳。考虑到在低波段溶剂的干扰，
本实验确定检测波长为２１０ｎｍ。
３．２ 流动相的选择：参考有关齐墩果酸的文献报
道［４］，考察选用甲醇－水为流动相系统，并调整流动相
比例，发现流动相为 （Ｖ甲醇）： （Ｖ水）＝９０∶１０，
柱温２５℃，流速０．８ｍｌ／ｍｉｎ时分离效果较好且２０分
钟内能完成分析，较为理想。
３．３ 样品溶液提取方法的选择：实验曾以９５％乙醇
作为溶剂，超声提取的方法未检测到齐墩果酸的含
量，可能是江南牡丹草药材中游离的齐墩果酸含量太
低，在 ＨＰＬＣ／ＵＶ的检测限之下。故采用回流后加酸
水解的方法，实验结果也表明，齐墩果酸在江南牡丹
草药材中多以结合型存在，通过测定齐墩果酸 （ＯＡ）
的含量得到江南牡丹草总皂苷的含量，从而为江南牡
丹草药材的质量控制提供科学依据。
３．４ 样品溶液提取溶剂的选择：①甲醇：取样品１
粉末０．５ｇ，加入１５ｍｌ甲醇，加热回流提取１．５ｈ，提
取液过滤，于水浴挥去甲醇，残渣加２０ｍｌ ４ｍｏｌ／Ｌ的
盐酸加热回流３０ｍｉｎ，水解液用氯仿萃取 （２０ｍｌ×３
次），挥去氯仿，残渣用色谱纯甲醇溶解并转移至５ｍｌ
量瓶中，加至刻度摇匀；经０．４５μｍ 微孔滤膜滤过，
取续滤液作为供试品溶液。②无水乙醇：取样品１粉
末０．５ｇ，加入１５ｍｌ无水乙醇，加热回流提取１．５ｈ，
提取液过滤，于水浴挥去甲醇，残渣加２０ｍｌ ４ｍｏｌ／Ｌ
的盐酸加热回流３０ｍｉｎ，水解液用氯仿萃取 （２０ｍｌ×
３次），挥去氯仿，残渣用色谱纯甲醇溶解并转移至
５ｍｌ量瓶中，加至刻度摇匀；经０．４５μｍ微孔滤膜滤
过，取续滤液作为供试品溶液。按以上两种方法提取
制备供试品，测定其含量。结果：甲醇提取所测齐墩
果酸含量 （０．６４８７ｍｇ／ｇ）大大高于无水乙醇提取
（０．５５３６ｍｇ／ｇ）。故尽管甲醇毒性较大但仍选择甲醇
提取。
３．５ 样品溶液提取方式的选择：①回流法：取样品１
粉末０．５ｇ，加入１５ｍｌ甲醇，加热回流提取１．５ｈ，提
取液过滤，于水浴挥去甲醇，残渣加２０ｍｌ ４ｍｏｌ／Ｌ的
盐酸加热回流３０ｍｉｎ，水解液用氯仿萃取 （２０ｍｌ×３
次），挥去氯仿，残渣用色谱纯甲醇溶解并转移至５ｍｌ
量瓶中，加至刻度摇匀；经０．４５μｍ 微孔滤膜滤过，
取续滤液作为供试品溶液。②超声法：取样品１粉末
０．５ｇ，加入１５ｍｌ甲醇，超声提取１．５ｈ，提取液过滤，
于水浴挥去甲醇，残渣加２０ｍｌ ４ｍｏｌ／Ｌ的盐酸加热回
流３０ｍｉｎ，水解液用氯仿萃取 （２０ｍｌ×３次），挥去氯
仿，残渣用色谱纯甲醇溶解并转移至５ｍｌ量瓶中，加
至刻度摇匀；经０．４５μｍ微孔滤膜滤过，作为供试品
溶液。按以上两种方法提取制备供试品，测定其含
量。结果：回流提取所测齐墩果酸含量 （０．６９７３ｍｇ／
ｇ）较超声提取 （０．６０５４ｍｇ／ｇ）高，故选择回流提取。
３．６ 样品溶液提取时间的选择：按３．５①项回流法。
分别回流１ｈ，１．５ｈ，２ｈ。最终各自浓缩、定容至
５ｍｌ，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。进样，
测定其含量。结果表明，回流时间１．５ｈ和２ｈ所测含
量无显著性差异，但都比１ｈ大，从提取率和时间考
虑，选择回流１．５ｈ。
３．７ 样品溶液盐酸水解浓度的选择：按３．５①项回流
法，回流时间为１．５ｈ。盐酸水解浓度分别为３ｍｏｌ／Ｌ，
４ｍｏｌ／Ｌ，５ｍｏｌ／Ｌ．最终各自浓缩、定容至５ｍｌ，摇
匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。进样，测定其
含量。结果盐酸水解浓度４ｍｏｌ／Ｌ所测齐墩果酸含量
最高，故选择盐酸水解浓度为４ｍｏｌ／Ｌ。
本实验首次建立了 ＨＰＬＣ法测定江南牡丹草块茎
中齐墩果酸成分。由于 ＨＰＬＣ法属于定量测定方法，
且有操作简便，测定直观、准确、直接等薄层方法无
法比拟的优点，因而较之薄层层析法、薄层扫描法等
更具有科学性，能将江南牡丹草药材质量控制方法从
形态鉴别和薄层层析的定性阶段推向定量检测的科学
化和规范化阶段。
４ 参考文献
［１］国家中医药管理局《中华本草》编委会 ．中华本草［Ｍ］（第３
卷）．上海：上海科学技术出版社，１９９９：３１６－３１７．
［２］裘宝林 ．浙江的新植物［Ｊ］．植物分类学报，１９８０，１８（１）：
９６－９７．
［３］Ｍｉｎ ｃｈｅｎ，Ｗｅｉ Ｗｅｉ Ｗｕ，Ｏｔｔｏ Ｓｔｉｃｈｅｒ．Ｌｅｏｎｔｉｃｉｎｓ Ａ～Ｃ，Ｔｈｒｅｅ
Ｏｃｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｌｅｏｎｔｉｃｅ ｋｉａｎｇｎａｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｎａｔ．
Ｐｒｏｄ，１９９６，５９：７２２－７２８．
［４］王天勇，杨文远 ．反相高效液相法测定七种中药中齐墩果酸
［Ｊ］．分析测试学报，１９９５，１４（４）：８２－８４．
收稿日期 ２０１２－０１－１８
·２８３· 浙江中医杂志２０１２年５月第４７卷第５期