全 文 ：·!#·中药新药与临床药理 !#年 $月第 %& 卷第 #期
收稿日期：$%%$ & !$ & ’!
作者简介：刘耀明 ( !)** & +，男，副主任中药师，主要从事新药开发研究。
山蜡梅颗粒系根据江西婺源民间常用预防和治疗
感冒的山蜡梅叶研制而成的中成药，具有解表祛风，
清热解毒的功效，用于防治感冒、流行性感冒、咽喉
炎等疾病。原质量标准的鉴别为专属性不强的总生物
碱、黄酮颜色反应，未建立含量测定项，故开展本研
究。本实验采用薄层色谱法对该制剂进行定性鉴别，
并增加高效液相色谱法来控制该产品含有的槲皮素及
山柰素的含量测定项，以利于产品质量的有效控制。
现将研究结果报道如下。
! 仪器与试药
,-!%%电子分析天平 （梅特勒托利多仪器有限公
山蜡梅颗粒的质量标准研究
刘耀明 !，冯淑香 $，肖炳坤 $ (!. 江中制药集团，南昌 ’’%%%*；$. 江西中医学院，南昌 ’’%%%* +
摘要：目的 建立山蜡梅颗粒的质量控制标准。方法 以山蜡梅药材为对照，采用薄层色谱法对该产品进行定性鉴
别，并用高效液相色谱法对其中含有的槲皮素及山柰素进行含量测定。结果 鉴别项下的阴性对照无干扰，重现性
好；槲皮素在 !. *! !/ 0 12 3 $#. 4$ !/ 0 12范围内呈良好的线性关系 （5 6 %. ))))），平均回收率为 ). ) 7 ，89:
为 !. $! 7；山柰素在 $. !* !/ 0 12 3 ’;. *% !/ 0 12 范围内呈良好的线性关系 （5 6 %. ))))），平均回收率为 )4. 4#
7，89:为 !. #’ 7。结论 该方法准确、简便、灵敏度高，结论可靠，可作为山蜡梅颗粒的质量控制标准。
关键词：<山蜡梅颗粒 0化学；槲皮素 0分析；<山柰素 0分析；色谱法，薄层；色谱法，高压液相
中图分类号：8$;. ! 文献标识码：, 文章编号：!%%’ & )4’ （$%%’）%’ & %!# & %;
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一色谱峰，即样品橙皮苷峰处无干扰。
参考文献：
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卫生出版社，!)*. ;’# & ;’*.
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;;.
·!#· 中药新药与临床药理 !#年 $ 月第 %&卷第 # 期
司）；硅胶 $板 （青岛海化工厂）；%&’()*#++型高
效液相色谱仪 （%&’()*#++ 型控制器，%&’()*#++ 型
泵，%&’()*,# 紫外检测器）；大连江申色谱工作站
软件 （-+-+版）；./ 0 !1+#紫外分光光度计 （日本
岛津）；槲皮素 （中国药品生物制品检定所，批号
!++! 0 22+3）；山柰素 （中国药品生物制品检定
所，批号 +#! 0 1++++1）；芦丁 （中国药品生物制
品检定所，批号 ++ 0 2-+-）；山蜡梅药材 （采自江
西婺源），经鉴定为蜡梅科山蜡梅 （!#$%&’&()*
&#(+&* 4567()8）的叶；山蜡梅颗粒由江西婺源制药厂
提供；流动相用的甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析
纯，水为重蒸馏水。
! 薄层鉴别
! # 山蜡梅颗粒生物碱的薄层鉴别 取本品 3 9，研
细，加氯仿 0氨水 （,+ : +8 3）3+ ;<，超声处理 -+
;6=，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 ! ;<使溶解，作
为供试品溶液。取山蜡梅阴性制剂 3 9，同法制得山
蜡梅阴性对照液。另取山蜡梅叶粉末 3 9，加乙醇 3+
;<，超声处理 -+ ;6=，滤过，滤液蒸干，残渣加 3
>盐酸 1+ ;<使溶解，滤过，滤液加浓氨水调 ?@2 A
!+，加氯仿 -+ ;<萃取，分取氯仿溶液蒸干，残渣加
甲醇 ! ;<使溶解，作为对照药材溶液。按照薄层色
谱法 （中国药典 1+++ 年版一部附录! B）试验，吸
取上述 - 种溶液各 3 <，分别点于同一硅胶 $ 薄层
板上，以氯仿 0甲醇 （2 : !）为展开剂，展开，取
出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，
在与对照药材色谱的相应位置上，显相同颜色的斑
点；阴性对照液色谱中，则无此斑点。
! ! 山蜡梅颗粒芦丁的薄层鉴别 取本品 1 9，研
细，加乙醇 1+ ;<，超声处理 -+ ;6=，滤过，滤液蒸
干，残渣加甲醇 ! ;<使溶解，作为供试品溶液。取山
蜡梅阴性制剂 39，同法制得山蜡梅阴性对照液。另取
芦丁对照品加甲醇制成每 ! ;<含 +8 3 ;9的溶液，作为
对照品溶液。按照薄层色谱法 （中国药典 1+++年版一
部附录! B）试验，吸取上述 -种溶液各 <，分别
点于同一硅胶 $薄层板上，以醋酸乙酯 0甲酸 0水 （
: ! : !）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷
以 ! >三氯化铝乙醇溶液，在 !+3 C烘约 3 ;6=，置紫
外光灯 （-#3 =;）下检视。供试品色谱中，在与对照品
色谱的相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对
照液色谱中，则无此斑点。
$含量测定
$ # 色谱条件 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为
填 充 剂 ， DE7& 0 ?&F G! （-8 2 ;; H !3+ ;;， ,
;）；流动相：甲醇 0 +8 3 >磷酸 （,3 : 33）；流
速：! ;< I ;6=；柱温：-3 C；检测波长：-#3 =;；
进样量：3<；理论塔板数按槲皮素峰计算不低于
!3++，按山柰素峰计算应不低于 !3++。在该色谱条
件下，槲皮素与山柰素均达到基线分离，且两个目标
峰均分离度良好。见图 !。
$ ! 对照品溶液的制备 取槲皮素对照品 # ;9，精
密称定，置 !++ ;<量瓶中，加甲醇适量溶解，并稀
释至刻度，摇匀；取山柰素对照品 ;9，精密称
定，置 !++ ;<量瓶中，加甲醇适量溶解，并稀释至
刻度，摇匀。分别精密吸取 ! ;<，置同一 !+ ;< 量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得 （每 ! ;<含
槲皮素 # 9，含山柰素 9）。
$ $ 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取
1 9，精密称定，置 !3+ ;< 烧瓶中，加甲醇回流 1
次 （每次加甲醇 3+ ;<，回流 !J），滤过，用适量甲
醇洗涤滤器和残渣，合并滤液；挥尽甲醇，加水 -+
;<，加冰醋酸调 ?@- A ,，加醋酸乙酯振摇 3次，每
次 -+ ;<，合并醋酸乙酯液，挥尽醋酸乙酯，加甲醇
溶解，置 !+ ;<量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，
即得。
$ % 线性关系的考察 取槲皮素对照品 # ;9，精密
称定，置 !++ ;< 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为母液 K。取山柰素对照品 ;9，精
密称定，置 !++ ;<量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为母液 B。分别精密吸取 1 种母液
·!#·中药新药与临床药理 !#年 $月第 %& 卷第 #期
表 ! 样品中槲皮素与山柰素的含量测定结果 （! $ %）
批号
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槲皮素含量 + !,·,-!
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表 山柰素加样回收率试验结果
样品量 + !,
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加入量 + !,
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测得量 + !,
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回收率 + 1
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平均回收率 + 1
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234 + 1
!. (%
’. &(，’. (，!，&，* 56，将同体积的 7、8 液置于
同一 !’ 56量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别
精密吸取对照品混合溶液 ( !6，注入高效液相色谱
仪，测定。得槲皮素峰面积积分值为 !&0’’. (、
&(()(!. (、(!)’(0. (、!’!#(%. (、&’*%’0&；得山柰
素峰面积积分值为 !#)0*、 %(#*’、 #!00*!. (、
!%()!0、&#%*%#%. (。以浓度为横坐标 9: ;，峰面积
为纵坐标 9< ;，分别绘制槲皮素和山柰素标准曲线，
并计算回归方程。槲皮素的回归方程： < $
#)%*0. *!: = !#*. )0 （> $ ’. ))))）；山柰素的回归
方程：< $ #*&. !: = !*#0. %! （> $ ’. ))))）。结
果表明，槲皮素在 !. 0! ? &(. #& !, + 56范围内呈良
好的线性关系；山柰素在 &. !0 ? %*. 0’ !, + 56范围
内呈良好的线性关系，且直线均通过原点。
! # 精密度试验 精密吸取对照品溶液 （含槲皮素
0. *%!, + 56，山柰素 . 0(!, + 56）(!6，测定槲皮素
和山柰素峰面积，连续测定 0次，槲皮素的峰面积积
分值为 (!)!*%、(!#&!、(!(&’、(!((*0、(!#%!0、
(!)’!)，平均值为 (!#%(*. &，234 $ ’. &) 1。山柰素
的 峰 面 积 积 分 值 为 #’%’0)、 #’)’0#、 #’%00)、
#’*’0#、 #’&%%、 #’#’’0，平均值为 #’*#0. ，
234 $ ’. %# 1。
! $ 重现性试验 取本品 （批号 &’’&’*&’）(份，按
含量测定项下供试品液的制备方法处理，进样量为 (
!6，按上述色谱条件测定槲皮素和山柰素含量，槲
皮素峰面积为 (!%&#. ’、 (!%#((. ’、 (!*((!. ’、
(!*!)(. (、 (’#&**. ’， 平 均 含 量 为 %!. *!, + ,，
234 $ ’. (0 1 9 ! $ (）；山柰素峰面积为 #!*%%. (，
#!((!(. (，#!*’’’. ’，#!0)((. ’，#!!&’. ’，平均含
量为 *%. %’ !, + ,，234 $ ’. &% 1 （! $ (）。以上结
果表明，本方法重现性良好。
! % 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 （’. &’’) , +
56）(!6，按上述色谱条件，每隔一定时间，测定槲
皮素与山柰素含量。结果槲皮素、山柰素的平均峰面
积分别为 (!(&%!. 、#!#!&*. 0，234分别为 ’. *( 1
（! $ (）、’. &) 1 （! $ (）。以上结果表明，本方
法 ( @内稳定性良好。
! & 加样回收率试验 取已知含量的本品 （批号
&’’&’*&’）0 份，每份 ! ,，精密称定，分别精密加
入一定量的槲皮素和山柰素母液，挥尽溶剂，按供试
品溶液制备方法处理，依法测定，结果见表 !、&。
结果表明，本方法回收率良好。
! ’ 样品的测定 取本品 !’ 批，按含量测定项下供
试品液的制备方法处理，进样量为 (!6，按上述色谱
条件，测定，结果见表 %。
上述结果表明，本品制备工艺稳定。本品每 ,含
山蜡梅按槲皮素 （A!(B!’C#）计，不得少于 &( !,，按
山柰素 （A!(B!’C0）计，不得少于 %( !,。
( 讨论
( ) 含测指标的选择 山蜡梅的主要化学成分为黄酮
类和生物碱类，目前对山蜡梅化学成分研究较少，药
典中尚未收载其已报道的生物碱类对照品 （蜡梅
碱），而黄酮类槲皮素与山柰素药典上已有收载；根
据 《中药新药研究的技术要求》及有关文件，中药中
化学成分的含量测定，如果成分含量低于万分之一，
应采用两个测定指标，本品中槲皮素和山柰素含量均
低于万分之一，故选用槲皮素与山柰素同时作为含测
指标，以有效控制本品的质量。
( * 色谱条件的优选 通过查阅文献资料 D !E & F和实际
色谱条件的筛选，在本色谱条件下，槲皮素与山柰素
均达到基线分离，且两个目标峰均分离度良好。
表 # 槲皮素加样回收率试验结果
样品含量 + !,
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·!· 中药新药与临床药理 !#年 $ 月第 %&卷第 # 期
收稿日期：#$$% & $! & $’
作者简介： 袁旭江 ( !)*’ & +，男，广州中医药大学 #$$$ 级硕士研究生，研究方向为中药资源开发利用与中药新药研究。
基金项目：广东省科技计划项目 (编号 ,%$!$#$!$! +。
化橘红为理气化痰的常用中药，其道地药材为
芸香科植物化州柚 （!#$%& ’$()*& -./0 #+,-)#+&(
12/3）未成熟果实的外果皮，主要含属二氢黄酮的柚
皮苷等黄酮类 4 ! 5、挥发油 4 #，% 5、糖类 4 6，7 5等成分。化
橘红采收期多在 7 8 ’ 月，采收时并未考虑果龄的影
响，随意性较大，市售化橘红药材大小参差不齐，
质量难以保持一致。为此，笔者就果龄对化橘红化学
成分含量的影响进行了研究。
! 仪器与试药
! ! 仪器 *## 型分光光度计 （上海分析仪器二
厂），,9:;<=3 67%>分光光度计，?@ & A型三用紫外
分析仪 （上海康乐光电仪器有限公司），硅胶
# $ 供试品溶液的制备 研究中曾尝试用超声法、索
氏提取法与回流法进行比较，结果发现回流法能达到
最佳的提取效果，故选用回流法。为了避免样品溶液
污染色谱柱，对供试品溶液进行精制。本品含大量水
溶性杂质，而槲皮素、山柰素均溶于醋酸乙酯，用醋
酸乙酯能将槲皮素、山柰素从本品的水溶液中萃取出
来。优选了萃取次数，最后确定为 7次，这样使得供
试品溶液得到纯化，既能得到满意的分离效果，又能
保护色谱柱。
参考文献：
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#$$!，#6 （!$）：*6’0
果龄对化橘红化学成分含量的影响
袁旭江，林 励，陈志霞 （广州中医药大学，广州 7!$6$7）
摘要：目的 通过对不同果龄的化橘红的化学成分比较分析，确定化橘红的适宜采收期。方法 以薄层色谱法比较
了不同果龄化橘红柚皮苷元和佛手内酯的含量变化，并采用分光光度法在波长 %6=C处进行二氢黄酮含量比较测
定。结果 化橘红中柚皮苷元及总二氢黄酮含量随果龄增长而递减；其佛手内酯含量却随果龄增长而递增。结论
果龄对化橘红化学成分含量有显著影响，故采收期的选择对药材质量有很大影响，应当结合药效学等方法对化橘红
进行深入研究，科学地确定采收期。
关键词：化橘红 D化学；柚皮苷元 D分析；黄酮类 D分析；佛手内酯 D分析；分光光度法，紫外线；色谱法，薄层
中图分类号：E#60 ! 文献标识码：, 文章编号：!$$% & )*% （#$$%）$% & $! & $%
%&&’()* +& ,-./) 0 12’ +3 45’6/(17 4+68+*/)/+3 /3 !#$%&’()* +(,&( -&%./(0
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