全 文 ：３　讨　论　在对水提取工艺的优选中，还可以选
择地榆中的主要成分没食子酸为指标进行测定［３］，但
是因为其他药材里也含有这种成分，专属性不强，因此
选择大黄中的大黄素作为指标成分进行测定。
参考文献
［１］　国家药典委员会．中国药典［Ｓ］．北京：人民卫生出版
社，２０１０：２２．
［２］　朱庆玲，李瑞和，石文宏．大黄中大黄素的提取工艺
研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（３）：３８８－３８９．
［３］　孙立立，江 波，袁振海，等．ＨＰＬＣ测定地榆饮片中没
食子酸的含量［Ｊ］．中成药，２００６，２８（８）：１１４４－１１４８．
（收稿２０１２－１１－２０；修回２０１３－０１－０７）
△ 西安市碑林区中医医院（西安７１０００１）
▲通讯作者
◇西安市食品药品检验所（西安７１００５４）
变化波长高效液相色谱法同时测定鬼箭羽槲皮素和山奈酚的含量
刘　富△　谢志民◇　傅　强▲　西安交通大学医学院药学系（西安７１００６１）
　摘　要　目的：建立高效液相色谱同时测定鬼箭羽中槲皮素和山奈酚含量的方法。方法：采用 Ｗｅｌｃｈ
Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，以甲醇－磷酸（０．４％）为流动相梯度洗脱（０～
２５ｍｉｎ　４３：５７，２５～３８ｍｉｎ　４３→４８：５７→５２，３８～５０ｍｉｎ　４８→５２：５２→４８）柱温３０℃，流速１．
０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长３７０ｎｍ（槲皮素）和３６７ｎｍ（山奈酚）。结果：槲皮素在４．０３～４０．３４μｇ·
ｍＬ－１范围内与其峰面积呈良好的线性关系（ｒ２＝０．９９９９）山奈酚在２．７１～２７．１４μｇ·ｍＬ－
１范
围内与其峰面积呈良好的线性关系（ｒ２＝０．９９９９），槲皮素和山奈酚的回收率分别为１０３．６％
（ＲＳＤ＝１．２％）和９７．２８％（ＲＳＤ＝１．７％）。结论：该测定方法精密度高，重现性好，可用于鬼
箭羽的质量控制。
　主题词　中药／标准　鬼箭羽／化学　槲皮素／分析　山奈酚类／分析　色谱法，高压液相　质量控制
　【中图分类号】　Ｒ２８２．７１　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】　１０００－７３６９（２０１３）０５－０５９８－０２
　　鬼箭羽，学名：Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ａｌａｔｕｓ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｓｉｅｂ．，
为卫矛科卫矛属植物卫矛的带翅嫩枝或枝翅。其性
寒，味苦，归肝经，有破血、通经、杀虫之功效。主要分
布于我国北部、中部、华北、西南各地区。其质量标
准［１，２］方面仅局限在鉴别方面，随着时代的发展及检
测技术的提高，这些项目已不能更好的控制鬼箭羽药
材的质量，目前，在“陕西省中药材质量标准起草任务”
中，已将药材鬼箭羽列入其中。本文通过采用变化波
长 ＨＰＬＣ法同时测定鬼箭羽中槲皮素和山奈酚的含
量［３］，经方法学验证，证明该含量测定方法精密度、重
现性、稳定性均良好，可用于鬼箭羽的质量控制。
１　仪器与试药　Ａｇｉｌｅｎｔ　ＨＰＬＣ　１２６０高效液相
色谱 仪，Ｗｅｌｃｈ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｃ１８ 色 谱 柱 （４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），ＫＱ－３００ＶＤＢ型双频数控超声仪（昆山
市超声仪器有限公司），ＢＳ２１０Ｓ电子天平 （北京赛多
利天平有限公司），５０ｇ手提式高速中药粉碎机（温岭
市林大机械有限公司）；槲皮素对照品（中国药品生物
制品检定所，批号：１０００８１－２００９０７）；山奈酚对照品
（中国药品生物制品检定所，批号：１１０８６１－２００８０８）；
鬼箭羽药材经西安市食品药品检验所中药室谢志民主
任药师鉴定为卫矛科植物Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ａｌａｔｕｓ（Ｔｈｕｎｂ．）
Ｓｉｅｂ．的翅状附属物和其嫩枝。甲醇为色谱纯、水为娃
哈哈纯净水，其余实验所用试剂均为分析纯。
２　方法与结果　２．１　色谱条件　色谱柱：
Ｗｅｌｃｈ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动
相：以甲醇－磷酸（０．４％）为流动相［４］梯度洗脱［５］（０～
２５ｍｉｎ　４３：５７，２５～３８ｍｉｎ　４３→４８：５７→５２，３８～５０ｍｉｎ
４８→５２：５２→４８）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：３７０ｎｍ
（槲皮素）和３６７ｎｍ（山奈酚）ｎｍ；柱温：３０℃；进样量：
１０μＬ。
２．２　溶液的制备　２．２．１对照品溶液：精密秤取
槲皮素对照品适量，置棕色瓶中，加甲醇制成 ２．
０１７ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，置（０～４℃）保存，作为对照品
储备溶液；精密秤取山奈酚对照品适量，置棕色瓶中，
加甲醇制成１．４１５ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，置（０～４℃）保
存，作为对照品储备溶液。精密吸取对照品储备溶液
各１ｍＬ，置同一１０ｍＬ棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻
度，摇匀，作为对照品６号溶液。
８９５ 陕西中医２０１３年第３４卷第５期
２．２．２　供试品溶液：精密称取鬼箭羽粉末２ｇ，置
１００ｍＬ具塞三角瓶中，精密加入甲醇５０ｍＬ，称定重
量，超声处理（功率：２８０Ｗ，频率：４５ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，取
出，放冷至室温，以甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃
去初滤液；精密量取续滤液２５ｍＬ，精密加入盐酸
２ｍＬ，分别加热回流９０ｍｉｎ，取出，定量转移至蒸发皿
中，置水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至
５ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心（每分钟４０００
转），取上清液用微孔滤膜（０．４５μｍ）滤过，即得。
２．３　标准曲线制备　精密吸取对照品６号
１ｍＬ５份，分别置２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２５ｍＬ和５０ｍＬ量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液５～１
号。分别精密吸取１～６号对照品溶液各１０μＬ（６号
增加一１５μＬ，１号增加一５μＬ）进样３次，在上述色谱
条件下进样测定。以峰面积平均值为纵坐标，以进样
量（μｇ）为横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。结
果槲皮素和山奈酚的回归方程分别为：Ｙ＝４８５３．２ｘ－
６．３８２８，ｒ２＝０．９９９９；Ｙ＝４７３２．１ｘ＋１．８８０６，ｒ２＝０．
９９９９；分别在４．０３～４０．３４μｇ·ｍＬ－
１和２．７１～２７．
１４μｇ·ｍＬ－
１范围内具有良好线性关系。
２．４　精密度试验　精密吸取同一样品的供试品
溶液１０μＬ，注入液相色谱仪，重复进样５次，记录槲皮
素和山奈酚的色谱峰峰面积，以峰面积计算得ＲＳＤ（ｎ
＝５）分别为０．７６％和１．５８％，表明本实验精密度良
好。
２．５　 稳定性试验　精密吸取同一样品的供试品
溶液１０μＬ，注入液相色谱仪，分别在０、２、２、４、８、１２、
１６、２０、２４ｈ进样，按上述色谱条件测定槲皮素和山奈
酚的色谱峰峰面积，以峰面积计算ＲＳＤ（ｎ＝８）分别为
０．８５％和１．７６％，说明样品溶液中槲皮素和山奈酚在
２４ｈ内基本稳定，可满足测定需要。
２．６　重复性试验　取同一批鬼箭羽药材，按“２．
２．２”项下方法平行制备６份供试品溶液，进样１０μＬ，
测定含量。计算槲皮素平均含量为６１．０８μｇ／ｇ，ＲＳＤ
＝２．０４％；山奈酚平均含量为１０．１３μｇ／ｇ，ＲＳＤ＝１．
０６％，表明本方法具有较好的重现性。
２．７　加样回收率试验　取已知含量的供试品９
份，分别加入一定量槲皮素和山奈酚对照品，按供试品
溶液的制备方法进行处理，按上述色谱方法进行测定，
计算回收率。槲皮素的回收率为１０３．６％（ＲＳＤ＝１
．２％），山奈酚的回收率为９７．２８％（ＲＳＤ＝１．７％）。
２．８　样品含量测定　精密称取样品粉末２．０ｇ，
按供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定，记录
峰面积，外标法计算槲皮素和山奈酚的含量，结果见表
１。
　表１　　　样品含量测定结果
样品来源 槲皮素含量（μｇ／ｇ）山奈酚含量（μｇ／ｇ）
中药饮片厂 ４６．５８　 ８．１９
陕西香菊 １３．５４　 ２０．８０
西安药材市场 １２．０３　 ２１．４０
　　３　讨　论　３．１　供试品制备方法选择　本实验
过程中，按照正交表的要求，对超声时间（２０ｍｉｎ、
３０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ）、加入盐酸的量（２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ）以及
回流时间（３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ）进行考察，结果发现，
超声处理３０ｍｉｎ、加入２ｍＬ盐酸、回流９０ｍｉｎ，提取效
率最高。故采取此方法制备供试品溶液。
３．２　流动相选择　 本文曾用乙腈－磷酸０．４％进
行梯度洗脱，结果山奈酚峰分离效果不好。故采用本
实验的流动相。
３．３　样品测定　 本文曾对鬼箭羽枝条进行含量
测定，结果发现，在鬼箭羽药材样品中，槲皮素含量大
于山奈酚的含量，而在鬼箭羽枝条中，却是槲皮素含量
少于山萘酚含量。提示鬼箭羽药材和药材枝条的含量
差别很大，值得注意。
参考文献
［１］　 国家药典委员会．中华人民共和国药典［Ｍ］．北京：
化学工业出版社，２０１０：２４１．
［２］　卫生部药政管理局．全国中药炮制规范［Ｍ］．北京：
人民卫生出版社，１９８８：３０６．
［３］　方振峰，李占林，王　宇，等．中药鬼箭羽的化学成
分研究Ⅱ［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（１２）：１４２２．
［４］　徐　飞，陆免林，谢　辉，等．ＨＰＬＣ测定复方银杏
颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素及总黄酮醇苷含量［Ｊ］．中成
药，２００７，２９（１１）：１６１７．
［５］　王云霞，王敏春，谢志民．ＨＰＬＣ法测定乳癖散结颗
粒中迷迭香酸的含量［Ｊ］．陕西中医，２０１２，３３（４）：４８１．
（收稿２０１２－１２－１０；修回２０１３－０１－１５）
９９５陕西中医２０１３年第３４卷第５期