全 文 ：收稿日期：2010-10-28
*基金项目：江西省科技厅自然科学基金资助项目(No：2008ZGY0096)；江西省卫生厅科技计划项目（No：20073214）
在原发性高血压进展中，血管平滑肌细胞
（VSMCs）的异常增殖是重要病理过程，导致血管壁
增厚，顺应性下降，管腔狭窄；同时VSMCs分泌众多
活性物质及细胞外基质成分也促进高血压的发展。
因此，抑制VSMCs增殖，是防治高血压的重要途径
之一[1]。
文章编号： 1005-8982（2011）08-947-04
·论著·
粟米草三帖皂苷对PDGF诱导的血管平滑肌
细胞增殖的影响*
干丽君 1，龚 帧 2，熊建军 2，李雪芹 2，吴周环 2，林 玲 2，李卫东 2
（九江学院 1 .护理学院，2.基础医学院，江西 九江 332000）
摘要：目的 研究粟米草三帖皂苷（MPTS）在体外对血小板源生长因子（PDGF）诱导大鼠血管平滑肌细胞
（VSMCs）增殖作用的影响及其机制。方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞，PDGF或PDGF与不同浓度MPTS
（1~27μmol/L）共同作用后，以MTT法检测细胞活力；western-blot检测细胞pERK1/2表达变化。结果 成功
培养血管平滑肌细胞；10ng/mL的PDGF促进VSMCs的增殖，而不同浓度MPTS作用后均可抑制PDGF诱
导的VSMCs增殖（P<0.05）；并且，MPTS对PDGF诱导的pERK1/2活化有抑制作用（P<0.05）。结论 MPTS
对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用，其部分机制可能与下调pERK1/2活性有关。
关键词： 粟米草三帖皂苷；血小板源生长因子；ERK1/2；细胞增殖
中图分类号：R-332 文献标志码：A
Mollugo Pentaphylla Triterpenes Saponins effects on
vascular smooth muscle cell proliferation induced by
platelet-derived growth factor*
GAN Li-jun1, GONG Zhen2, XIONG Jian-jun2, LI Xue-qin2, WU Zhou-huan2,
LIN Ling2, LI Wei-dong2
(1.College of Nursing College, 2.College of Basic Medical Science, Jiujiang University,
Jiujiang, Jiangxi 332000, P.R.China)
Abstract: 【Objective】To investigate the effects of Mollugo Pentaphylla Triterpenes Saponins (MPTS) on
proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) induced by PDGF in vitro, and to explore the underly－
ing mechanism.【Methods】The primary cultured rat VSMCs were exposed to PDGF or PDGF combining vari－
ous concentrations of MPTS (1～27 μmol/L), and the proliferative activity of cells were determined by MTT as－
say. The effects of MPTS on expression of pERK1/2 were detected by western blot. 【Results】The primary
VSMCs were successfully cultured. In the concentration of 10 ng/mL, exogenous PDGF promoted the prolifera－
tion of VSMCs. However, various concentrations of MPTS inhibited proliferative activity of PDGF on VSMCs
(P <0.05). Furthermore, MPTS decreased the activation of pERK1/2 induced by PDGF (P <0.05).【Conclusion】
MPTS can inhibit the PDGF-induced growth of VSMCs, decrease of pERK1/2 activation might be one of its
mechanisms.
Key words: Mollugo Pentaphylla Triterpenes Saponins; platelet-derived growth factor; ERK1/2; cell prolif－
eration
第21卷第8期 中国现代医学杂志 Vol. 21 No.8
2011年3月 China Journal of Modern Medicine Mar. 2011
947· ·
粟米草（mollugo pentaphylla）为番杏科植物，性
味淡平，有清热解毒、利湿功能，主治腹痛泻泄，仓疥
肿毒等。其中丰富的黄酮类和甾体类化学成分，是抗
心血管疾病的药效物质基础[2]。我们前期研究表明，
粟米草提取物在非细胞毒剂量时对高血压大鼠有明
显的降压效果[3]，其机制可能与下调VSMCs的线粒
体转录因子A（mtTFA）mRNA表达有关[4]。在此基础
上，本课题通过研究MPTS对PDGF诱导VSMCs增
殖的影响，进一步探讨其作用机制，为评价粟米草在
治疗高血压中的价值提供实验基础。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
CO-150细胞培养箱（New Brunswick Scientif-
ic），Multiskan MK3 酶标仪（Thermo），DMEM 干粉
（Gibco）；超级新生小牛血清（FBS），杭州四季青生物
材料研究所；胰酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT），AMRE-
SO产品；PDGF-BB、山羊抗人 pERK1/2 多克隆抗
体、二抗和ECL均购自 Santa Cruz公司。实验药物
使用DMSO溶解MPTS粉（九江学院基础医学院保
存），配制成1、3、9和 27 mmol/L的贮存液，使用时
按1∶1000比例加入培养液中，终浓度为1、3、9和
27μmol/L。对照组加入等量的DMSO。
1.2 大鼠VSMCs原代培养
将大鼠颈椎脱位处死，放入75%乙醇中浸泡5
min，T型切口剪开大鼠胸腹部皮肤及胸骨，暴露其
胸腹腔。上端沿主动脉弓，下端至隔的主动脉裂孔
处，无菌剪取长约5cm胸主动脉，移入置37℃的
DMEM液中，眼科镊剥除血管外层浆膜，漂洗2~3
次，沿纵轴剪开动脉，用单面刀片轻轻刮擦内膜表
面1~2次去除内皮细胞。眼科直剪将动脉剪碎至约
1mm3，用吸管将其均匀分布于100mL玻璃培养瓶
底，使种植块面反转向上，放入37℃、5％二氧化碳
孵箱内静置5h后，轻轻翻转培养瓶，使已贴壁的组
织块完全浸泡于培养液中，继续静置孵育。48h后半
量换液，72h后全量换液，以后每2～3d换1次液。
待细胞生长汇合至90%左右时用0.25%胰酶消化传
代。首次按1∶1传代（以后隔3~5d按1∶3传代），
免疫细胞化学法进行细胞鉴定，实验用第 4~8
代细胞。
1.3 MTT法检测细胞增殖
将VSMCs悬液以每孔1×104个细胞接种于96
孔细胞培养板，待细胞贴壁生长良好后吸去原培养
液，无血清培养12h后，以10ng/mL PDGF为刺激
增殖浓度。实验分为6组：MPTS分5个剂量组，终
浓度分别为0、1、3、9和27μmol/L（其中溶剂DMSO
终浓度均为0.1%）；对照组（含10ng/mL PDGF的
DMEM）。每组均设6个复孔。加药后培养24、48和
72h，实验终止前加MTT（5mg/mL）20μL，继续培养
4h 后离心弃上清液，加DMSO 150μL，振荡 10 min，
溶解结晶物，酶联免疫检测仪上波长490nm处测各
孔吸光值。以空白对照调零，计算出药物对细胞生长
抑制率。抑制率计算公式：抑制率（%）=（1-药物组
OD值/空白组OD值）×100%，分别求得各组的细
胞抑制率。
1.4 Western blot
取处于对数生长期的细胞，不同浓度MPTS处
理 48h后，收集细胞，常规裂解提取胞浆及胞核蛋
白，取50μg总蛋白加入上样缓冲液煮沸3min变
性，经SDS-PAGE凝胶电泳，再电转移至PVDF膜，
封闭后与1∶1000稀释的l抗4℃孵育过夜，与1∶
20000稀释的二抗室温孵育1h，再与ECL温浴1
min后曝光、显影和定影。数据分析采用 Image Pro
Plus图像分析管理系统测定各条带密度与面积的乘
积为积分光密度，并进一步计算出每组的积分光密
度与β-actin的比率，以对照组为100%。
1.5 统计学分析
所有数据采用SPSS 11.5软件包进行分析。计
量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间显著性检
验采用t检验，检验水准为α=0.05。
2 实验结果
2.1 成功培育原代VSMCs
倒置相差显微镜观察，细胞培养在贴壁4~5d
后可见少量单个细胞从不同的组织块边缘游离出
来，细胞形态不一，多呈梭形或长梭形分布，传代后
VSMCs突起增多，细胞呈梭形或长梭形、放射性生
长，胞质伸展，较多分支状突起，细胞平行排列成束，
部分区域细胞重叠堆积生长，部分区域细胞呈单层，
高低起伏，细胞性状没有明显改变，呈现典型的平滑
肌细胞状生长。细胞经平滑肌肌动蛋白α-actin特
异性抗体染色后，90%以上的细胞呈染色阳性反应，
即光镜下显示细胞浆内有大量平行的丝条状染成黄
褐色颗粒，细胞核不染色，且经过多次传代后，平滑
肌细胞性状没有发生明显改变。而对照组细胞胞浆
内无相应黄褐色颗粒出现，即未加抗体的VSMCs则
中国现代医学杂志 第20卷
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组别 24h 48h 72h
粟米草皂苷0μmol/L 8.7±2.32 11.4±3.98 13.3±3.75
粟米草皂苷1μmol/L 10.3±3.56 13.9±2.37 18.6±4.56
粟米草皂苷3μmol/L 16.3±4.491） 28.0±4.781） 34.7±4.331）
粟米草皂苷9μmol/L 24.8±4.471） 37.9±4.392） 46.8±5.622）
粟米草皂苷27μmol/L 36.1±4.22） 45.2±4.992） 58.3±6.122）
注：1）与对照组比较，P<0.05；2）与对照组比较，P<0.01
附表 不同浓度MPTS作用不同时间VSMCs的
生长抑制率 （x±s，%）
A
A：原代培养细胞未经α-actin 染色；B：原代培养细胞经
α-actin染色
图1 原代培养大鼠动脉平滑肌细胞鉴定
B
呈阴性反应，见图1。
2.2 MPTS对VSMCs细胞增殖的影响
1μmol/L浓度以下的MPTS对细胞的生长抑制
作用不明显，无统计学意义；在3~27μmol/L浓度范
围内，随MPTS作用浓度的递增，VSMCs细胞生长
抑制率逐渐增加；细胞的生长抑制率与药物浓度有
明显的依赖关系。随着药物作用时间增加，生长抑制
率增加，说明在一定浓度范围内，MPTS对VSMCs
细胞增殖抑制作用有时间依赖关系，见附表。
2.3 MPTS对VSMCs pERK1/2表达的影响
Western blot结果显示，与对照组相比，不同浓
度MPTS作用48h后，VSMCs细胞pERK1/2水平下
降，且呈剂量依赖性，见图2。
不同浓度MPTS作用VSMC 48h后，裂解细胞，
提取蛋白用于Western blot分析。
3 讨论
心血管疾病的发病率和死亡率在很多国家居于
首位，而VSMCs异常增殖是动脉粥样硬化、高血压
等疾病的重要病理过程。抑制VSMCs增殖与迁移，
逆转血管构型可有效提高动脉粥样硬化，高血压等
患者的生存率和生存质量[1]。目前临床上只有少数药
物如血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体
拮抗剂等有类似的疗效。
粟米草为番杏科植物，包括星粟米草属和粟米
草属，有清热解毒、利湿等功能，而黄酮类和甾体类
化学成分则是其药效物质基础。本研究前期发现，
非细胞毒剂量的粟米草提取物对高血压大鼠有明
显的降压效果[3]，其机制之一为粟米草皂甙对血清
诱导的VSMCs增殖有抑制作用[4]。在此基础上，本研
究以原代培养的大鼠动脉平滑肌为研究对象，采用
MTT法观察 MPTS 对 PDGF诱导的 VSMCs生长的
影响。结果显示，不同浓度MPTS作用 24、36和48h
后均可抑制PDGF诱导的VSMCs的生长（P<0.05，
P<0.01），并且这种抑制作用随着MPTS浓度增高
而增强。这一结果进一步证实MPTS抑制VSMCs增
殖可能是其抗高血压的作用基础。
PDGF主要来源于血小板的α颗粒，是一种较
第8期 干丽君，等：粟米草三帖皂苷对PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
注：1：VSMCs 未加药物处理；2：0.1% DMSO 处理组；3：
1μmol/L MPTS 处理组；4：3μmol/L MPTS 处理组；5：9μmol/L
MPTS处理组；6：27μmol/L MPTS处理组；覮与对照组比较，P<0.05
图2 MPTS对VSMC 内pERK1/2表达的影响
1 2 3 4 5 6
3
2
1
0
覮 覮 覮
1 2 3 4 5 6
β-actin
pERK1/2
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中国现代医学杂志 第21卷
强的促有丝分裂因子，促进多种细胞的分裂增殖，在
血管增殖病变起重要作用[5-6]。PDGF 3种异构体对
VSMCs都有促进增殖的作用，但是PDGF-BB作用
更强[7]，因此本实验应用PDGF-BB诱导建立VSMCs
增殖模型。PDGF-BB诱导VSMCs增殖的分子机制
十分广泛，目前主要有两种途径：①PDGF与受体结
合后激活受体上的酪氨酸蛋白激酶，进而激活磷脂
酶 C，刺激肌醇磷酸产生三磷酸肌醇和甘油二酯
（DAG），DAG 激活蛋白激酶 C，促进基因转录[8]；②
PDGF与受体结合后激活小分子G蛋白（ras蛋白），
通过 ras/GTP 逐级激活 MAPKKK/MAPKK/ERK 通
路，促进细胞的有丝分裂[9]。那么MPTS是在哪些环
节抑制PDGF诱导的VSMCs增殖呢？
本研究发现，MPTS 抑制 PDGF 诱导的 VSMC
增殖与胞外信号调控激酶（extracellular signal-regu-
lated kinase，ERK）信号通路存在关联。ERK1/2是最
重要的 MAPK 家族成员之一，包括两种异构体
ERK1和ERK2，主要介导细胞因子、生长因子的细
胞增殖效应，参与调节细胞的生长、分化和细胞周期
等生命活动[10]。ERK通路的激活途径包括酪氨酸激
酶受体、Ca2+及 PKC等。激活的pERK有多个下游
底物，如MNK-1、Elk-1、SAP-1等，对于Ras诱导的
细胞增殖反应起重要作用[10]。已有研究显示，黄酮类
化合物PD98059通过MEK抑制ERK的激活，削弱
细胞的增殖反应[11]。本研究结果提示，MPTS中的黄
酮类化学成份可能也具有PD98059类似的活性，抑
制PDGF诱导的pERK1/2活化，从而抑制了细胞增
殖相关基因的转录，最终导致细胞增殖减少。这一结
果表明MPTS抑制PDGF诱导的VSMC增殖作用与
ERK通路的活性密切相关，但具体机制尚需进一步
研究。
参 考 文 献：
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（张 蕾 编辑）
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