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杉木双花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究



全 文 :第 15 期
收稿日期:2012-09-12
基金项目:广西中医药管理局课题项目(gzzc1208);广西中医药大学赛恩斯新医药学院课题项目(2012zr01)
作者简介:陈 睿(1980-),男(壮族),广西南宁人,工程师,硕士,主要从事中药有效成分分离提取和活性研究工作,(电话)18607711687
(电子信箱)58251323@163.com;通讯作者,霍丽妮(1982-),女(壮族),广西德保人,讲师,主要从事中药有效成分分离提取和活性
研究工作,(电话)15994365816(电子信箱)huolini@126.com。
生物体内存在的过量氧自由基与蛋白质、脂类
化合物、多糖、核酸等大分子发生氧化反应,造成细
胞损伤和引起组织结构的非正常变化,进而引发心
血管疾病[1]、衰老[2]甚至癌变[3]等问题。 抗氧化性物
质可淬灭自由基,阻止因过量自由基和生物大分子
作用而引起的一系列链式氧化过程。 尽管通过化学
手段合成的物质如叔丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-
二叔丁基对甲酚(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、叔丁
基对苯二酚(TBHQ)等具有优良的抗氧化性质,且
在食品及其他领域已经得到了广泛应用,但近年研
究发现,这类物质对人体呼吸酶活性产生一定的不
利影响,甚至还有致畸作用,一旦进入人体就会产
生潜在危害[4]。因此寻找安全、可靠的抗氧化物质成
为近年世界各国精细化工领域研究的重点内容之
一。
双花鞘花 [Macrosolen bibracteolatus (Hance)
Danser]别名二苞鞘华、八角寄生等,为桑寄生科鞘
花属植物,常寄生于杉木属、樟属、五月茶属、灰木
属或壳斗科植物,民间主要用于治风湿痹症、关节
疼痛、筋骨拘挛、腰膝酸软[5]。 植物的抗氧化活性多
与酚类及黄酮类物质有关 [6],双花鞘花的同属植物
鞘花寄生(Macrosolen cochinchinensis)可分离出酚
及黄酮类物质[7,8]。目前,寄主为杉木(Cunninghamia
Lanceolata)的双花鞘花(以下均称为杉木双花鞘花
杉木双花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究
陈 睿 1,霍丽妮 2,李培源 2,廖艳芳 3,庞凯夏 2
(1. 广西中医药大学赛恩斯新医药学院,南宁 530222;2.广西中医药大学药学院,南宁 530001;
3.广西化工研究院,南宁 530001)
摘要: 以 95%乙醇、 丙酮和乙酸乙酯为溶剂分别对杉木双花鞘花 [Macrosolen bibracteolatus (Hance)
Danser]寄生进行冷浸提取,用 DPPH 和 ABTS 体系评价杉木双花鞘花寄生提取物清除自由基的能力。 结
果表明,杉木双花鞘花寄生各提取物对 DPPH 自由基和 ABTS 自由基均具有清除能力,其中 95%乙醇和
丙酮提取物对自由基的清除能力较强,可作为抗氧化剂的天然来源之一。
关键词:双花鞘花[Macrosolen bibracteolatus (Hance) Danser];杉木寄生;抗氧化;DPPH 自由基;ABTS
自由基
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2013)15-3625-03
Study on Free Radical Scavenging Ability of Extracts of Macrosolen bibracteolatus
Parasitizing on Cunninghamia lanceolata
CHEN Rui1,HUO Li-ni2,LI Pei-yuan2,LIAO Yan-fang3,PANG Kai-xia2
(1.College of Chinese Medical Science, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530222, China; 2.College of Pharmacy, Guangxi
University of Chinese Medicine, Nanning 530001, China; 3.Guangxi Research Institute of Chemical Industry, Nanning 530001, China)
Abstract: 95% ethanol, acetone and ethyl acetate were used for cold-soaking extraction of Macrosolen bibracteolatus (Hance)
Danser parasitizing on Cunninghamia Lanceolata. And the free radical scavenging ability of the extracts was assessed by using
DPPH system and ABTS system. The results showed that extracts of M. bibracteolatus, especially 95% ethanol extracts (EE) and
acetone extracts (AE) had good free radical scavenging ability, which could be potential source of natural antioxidants.
Key words: Macrosolen bibracteolatus(Hance)Danser; parasitizing on Cunninghamia lanceolata; antioxidant; DPPH free radi-
cals; ABTS free radicals
第 52卷第 15期
2013年 8 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 52 No.15
Aug.,2013
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.15.036
湖 北 农 业 科 学 2013 年
寄生)的抗氧化活性鲜有报道。 因此,通过分析杉木
双花鞘花寄生乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和乙醇
提取物对 DPPH (1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 )、
ABTS[2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]
自由基的清除能力,研究杉木双花鞘花寄生不同溶
剂提取物的抗氧化活性,旨在为天然抗氧化物质的
开发利用提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
材料:双花鞘花,经广西中医药大学壮医药学
院韦松基教授鉴定为桑寄生科鞘花属植物双花鞘
花,其寄主鉴定为杉科杉木属植物杉木,将其茎枝
自然晾干,粉碎。
仪器:8453 型紫外可见分光光度计(美国安捷
伦公司)、BS224S电子天平(德国赛多利斯公司)、恒
温水浴锅(黄骅市新兴仪器厂)、RE-52A 型旋转蒸
发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
试剂 :DPPH、ABTS购于美国 SIGMA 公司 ,其
他试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 杉木双花鞘花寄生的部位提取 将杉木双
花鞘花寄生全株阴干 , 粉碎后各称取 100 g,用
800 mL 95%乙醇冷浸 3 d,过滤。 滤渣加等量溶剂同
法再提取 1次,过滤,合并 2次滤液。 滤液置旋转蒸
发仪中减压蒸馏,回收溶剂,残留物低温真空干燥
至干, 得杉木双花鞘花寄生乙醇提取物浸膏(EE)
5.181 g, 得率为 5.18%。 同法制备丙酮提取物浸膏
(AE) 3.203 g,得率为 3.20%;乙酸乙酯提取物浸膏
(EAE) 1.400 g,得率为 1.40%。
1.2.2 清除 DPPH 自由基能力测定 [9] 取 0.15 mL
不同浓度(0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg / mL)杉木
双花鞘花寄生提取物,分别加入 8 mL 0.004%(m /V)
DPPH 溶液, 室温放置 10 min, 以不加提取液的
DPPH 为空白对照,在最大波长 517 nm 处测定吸光
度,直到平衡为止。 根据下列公式计算各种提取液
对 DPPH自由基的清除率:SC=(1-A1 /A0)×100%,式
中,SC 为清除率,A1为加提取物后 DPPH 溶液的吸
光度;A0为未加提取物时 DPPH溶液的吸光度。
1.2.3 清除 ABTS 自由基能力测定[10] 用去离子水
将 ABTS 配制成 7 mmol / L 准备液,然后往准备液中
加入过硫酸钾固体,使此准备液的过硫酸钾浓度变
为 2.45 mmol / L。 室温避光放置 2 d 备用。 将 ABTS
溶液用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释,在 732 nm 下测得
吸光度为(0.70±0.05),将 30 μL不同浓度(同“1.2.2”)
的杉木双花鞘花寄生提取物分别与 3 mL ABTS 溶
液混合, 在室温下放置 10 min 后测其吸光度,PBS
溶液作为参比,取稳定时的 A732 nm值。 清除率计算公
式如下:SC=[1-Atest /Acontrol)]×100%。 其中,Atest 为加
入提取物后的 ABTS 的稳定吸光度;Acontrol 为不加提
取物的 ABTS的吸光度。
2 结果与分析
2.1 杉木双花鞘花寄生对 DPPH 自由基的清除能

DPPH 是一种早期合成的有机自由基, 其结构
中含有 3 个苯环,1 个氮原子上有 1 个孤对电子,
常用来评估抗氧化物的供氢能力,它在有机溶剂中
非常稳定,呈紫色,在 517 nm处有强吸收,当遇到自
由基清除剂时,DPPH 的孤对电子被配对而使其退
色,也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。 因此,
可通过测定吸光值的变化来评价样品对 DPPH自由
基的清除效果。 通过测定不同浓度杉木双花鞘花寄
生不同极性溶剂提取物对 DPPH 自由基的清除能
力,结果(图 1)表明,杉木双花鞘花寄生不同极性溶
剂提取物 DPPH自由基清除率与提取物浓度呈正相
关,EE、AE 具有较强的清除能力, 且清除率较为相
近。 在提取物溶液浓度为 2.0 mg / mL 时,EE、AE 对
DPPH自由基的清除率分别为 76.75%和 74.75%,而
EAE清除能力则相对较弱,仅为 64.59%。
2.2 杉木双花鞘花寄生对 ABTS 自由基的清除能

ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的
ABTS自由基,在抗氧化物存在时 ABTS 自由基的产
生会被抑制,在 732 nm测定其吸光度即可测定并计
算出样品的 ABTS 自由基清除能力。 图 2 是不同浓
度杉木双花鞘花寄生不同极性溶剂提取物对 ABTS
自由基清除能力的测定结果。 由图 2 可知,EE 和
AE 均具有很好地清除 ABTS 自由基的能力 ,对
ABTS 自由基的清除率与提取物溶液浓度呈正相
关。 在浓度为 0.5~1.2 mg / mL 时,AE 对 ABTS 自由
图 1 杉木双花鞘花寄生各提取物对 DPPH 自由基的
清除能力
80
70
60
50
40
30
20
10
0



//%
0.5 0.8 1.0 1.2 1.5 1.8 2.0
提取物浓度//mg/mL
EAE
AE
EE
3626
第 15 期
皮多酚提取量的影响最大,其次是浸提时间和浸提
温度,而甲醇—乙醇—丙酮混合溶液体积分数的影
响最小。
葡萄中所含的多酚在酿酒过程中有一小部分
转移到葡萄酒中, 但大部分仍残留在葡萄皮、子
中 [4]。除多酚类化合物以外,葡葡萄皮还可作为提取
酒石酸、葡萄子油、膳食纤维等的原料 [5],对葡萄皮
的综合利用还有待进一步的深入研究。
参考文献:
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source of phenolic antioxidants[J]. Food Chemistry,2009,112(3):
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(责任编辑 向 闱)
表 2 正交试验结果
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
x1
x2
x3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
11.720
12.063
12.106
0.386
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
12.721
13.018
10.151
2.867
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
10.641
10.991
13.257
2.616
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
8.397
11.866
15.626
7.229
多酚提取量//mg/g
7.590
12.706
14.865
16.512
10.846
8.832
14.061
15.501
6.755
(上接第 3624页)
基清除能力稍强于 EE, 但在浓度为 1.5~2.0 mg / mL
时,EE对 ABTS的清除率高于 AE。 EAE 活性最弱,
其对 ABTS的清除能力随提取物浓度的升高变化幅
度很小。
3 结论
杉木双花鞘花寄生各极性提取物对 DPPH 及
ABTS 自由基均具有清除能力, 清除率与各提取物
溶液浓度呈正相关;95%乙醇和丙酮提取物对自由
基的清除能力均很强,乙酸乙酯提取物对自由基的
清除能力较弱,表明杉木双花鞘花寄生提取物特别
是 95%乙醇和丙酮提取物具有较好的开发天然抗
氧化性物质的潜力,这为进一步开发利用杉木双花
鞘花寄生资源、深入挖掘杉木双花鞘花寄生在食品
和医学领域的应用提供了一定的参考依据。
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1231-1237.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0



//%
0.5 0.8 1.0 1.2 1.5 1.8 2.0
提取物浓度//mg/mL
EAE
AE
EE
图 2 杉木双花鞘花寄生各提取物对 ABTS 自由基的
清除能力
(责任编辑 吕海霞)
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陈 睿等:杉木双花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究 3627