全 文 ：文章编号:1005-4014(2006)02-0093-03
虎眼万年青皂苷的分离提取*
肖　冲 ,鱼红闪
(大连轻工业学院 生物与食品工程学院 , 辽宁 大连　116034)
关键词:虎眼万年青皂苷;虎眼万年青
摘要:通过实验确定虎眼万年青总皂苷的提取条件 , 并比较不同部位虎眼万年青总皂苷的提取得
率。结果表明采用大孔吸附层析分离提取 , 35%乙醇洗杂质 , 95%乙醇洗脱皂苷 , 总皂苷得率为
0. 91%。从虎眼万年青的茎叶 、球状根 、根须提取皂苷的得率分别为 0. 73%、1. 12%、0. 46%。
中图分类号:Q946. 49 　　　文献标识码:A
Separation and extraction of caudaside
X I AO Chong , YU Hong-shan
(Schoo l o f Bio lo gical &Foodstuff Enginee ring , Dalian Institute o f Light Industry , Dalian 116034 , China)
Key words:caudaside;Ornithogalum caudatum Ait
Abstract:This paper describes the experiments for caudaside ex traction from the Ornithogalum caudatum Ait ,u-
sing macroporous absorbitive resin. The contraction condition is determined as follows:35%ethanol to wash off
impurities , 95% ethanol to w ash down caudaside-glycosidase , with 0. 91% of gross yield. The yield for the
stem , root ball , and root beard are 0. 73%, 1. 12%, and 0. 46%respectively.
　　虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)又
名胡连万年青 、海葱 、葫芦兰 ,为百合科虎眼万年
青 ,属常绿多年生球根植物 ,原产于非洲南部[ 1] 。
因为它每生长出一片叶片 ,鳞茎包皮上就会长出几
个小仔球 、形似虎眼 ,因而称为虎眼万年青。虎眼
万年青有极高的药用价值 ,虎眼万年青球茎中含有
大量的生物碱及化学成份 ,己测出的化学成份有
27种之多[ 2] 。药理学研究表明虎眼万年青中的虎
眼万年青皂苷 OSW-1对肺癌 、乳腺癌有明显的抗
癌活性 ,体外抗 p338淋巴细胞白血病活性结果表
明 ,OSW-1是常见抗癌药物喜树碱 、阿霉索 、紫杉
醇抗癌活性的10 ～ 100倍 ,而且对正常细胞没有毒
性[ 3-4] ,因此 ,是一种极具开发潜力的中草药 。到目
前为止 ,国内对虎眼万年青的研究 ,局限在其多糖
方向 ,对于虎眼万年青皂苷的分离提取尚未见报
道。本研究主要对虎眼万年青皂苷的分离提取条
件及虎眼万年青不同部位的皂苷提取进行了对比
研究 ,得到虎眼万年青总皂苷样品 ,为进一步研究
虎眼万年青皂苷的功用提供了条件。
1　材料与方法
1. 1　实验材料
虎眼万年青 ,吉林长白提供;薄层层析板(TLC),
德国Merck公司生产的硅胶板(Kiesel-gel 60-F254);
大孔吸附树脂:商品号AB-8树脂 、商品号D-280树脂 ,
南开大学化工厂生产;其他试剂均为分析纯。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　虎眼万年青总皂苷的提取
取植物虎眼万年青 ,在自然条件下干燥 ,粉碎
成粉。加入 95%的乙醇浸泡 24 h ,纱布 、滤纸过
滤后 ,收集滤液 ,滤渣继续加入乙醇浸泡 ,同上方
法循环 3次 ,收集滤液 ,将 3次所得滤液合并 。滤
液经减压浓缩为原来体积的 1 /5 ,再用 1 /3体积
的石油醚萃取脱脂 ,保留水相 ,再次减压蒸馏后 ,
加水稀释上 AB-8柱吸附 ,反复吸附 3次 ,6 ～ 8倍
柱体积水洗掉糖后用 5倍柱体积 95%乙醇洗脱
皂苷 。所得皂苷洗脱液 ,经 D-280柱脱色后 ,减压
浓缩后蒸干 ,即为虎眼万年青总皂苷。
第 25卷第 2期
2 0 0 6 年0 6 月　　　　　　　　
大 连 轻 工 业 学 院 学 报
Journal of Dal ian Institute of Light Industry
　　　　 　　　　Vol. 25 , No. 2
Jun . 2 0 0 6
* 收稿日期:2005-12-05
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30371744 , 30470055 , 20476017);辽宁省科学技术基金资助项目(20042132);
　　　 　　　　辽宁高等学校优秀人才支持计划资助项目(RC-04-05).
作者简介:肖　冲(1981 ～ ) , 女 ,硕士研究生.
　　D-280树脂柱洗脱:D-280树脂装柱后 ,柱体积
约等 于待脱色液 样品 1 /3 , 控制 流速约为
3mL/min ,集流出液 ,待样品全加过后 ,加 3倍体积
的95%乙醇洗柱 ,收集流出液减压浓缩。蒸干。
本实验用 AB-8 树脂柱:柱径 4. 4 cm ,柱高
34 cm ,柱体积 517 cm3 。
本实验用 D-280树脂柱:柱径 6. 6 cm ,柱高
30 cm ,柱体积 1 026 cm 3 。
1. 2. 2　AB-8树脂柱洗脱液乙醇体积分数的确定
样品液加入预处理好的 AB-8柱 ,反复吸附去
离子水脱糖后 , 依次用 15%、25%、35%、45%、
55%、65%、75%、85%、95%不同乙醇体积分数的
洗脱液洗脱皂苷 ,分别收集 。从各个梯度洗脱液中
测总皂苷量 。根据各乙醇体积分数洗脱液的虎眼
万年青总皂苷含量确定洗脱液的乙醇体积分数。
1. 2. 3　虎眼万年青皂苷含量测定
采用香草醛比色法[ 5] 。试剂:8%香草醛乙醇
溶液 ,77%硫酸。用人参皂苷 Re 做皂苷含量标准
曲线。根据标准曲线和 OD值可以算出皂苷含量。
1. 2. 4　薄层层析(TLC)检测虎眼万年青皂苷的方法
本实验室所用薄层层析板是由德国 Merck
公司生产的。首先 ,将薄层层析板在 110 ℃烘箱
活化 30 ～ 60min。然后 ,在薄层层析板上 ,用微量
点样器吸取样品 ,点样于薄层层析板上 。每次点
样依据样品浓度确定点样次数 ,每次点样均须吹
干。将点好样品的薄层层析板放入放好展开剂的
层析缸内展开 ,浸入展开剂的深度为薄层层析板
底边 0. 5 ～ 1. 0 cm(切勿将样点浸入展开剂中),
密封盖 ,待展开至规定距离(一般为 8 cm)后 ,取
出 ,吹干溶剂 ,喷 10%H2 SO4水溶液后 ,于 105 ℃
下加热 5 min显色 。展开剂为 CHCl3 ∶MeOH ∶
H 2O=7∶2. 5∶0. 5(均相);点样量 2 ～ 5μL 。
2　结果与讨论
2. 1　大孔树脂吸附层析提取虎眼万年青总皂苷
的条件
称取 500 g粉碎好的虎眼万年青干粉 ,经 95%
乙醇浸泡 ,减压浓缩 、石油醚脱脂后得到1 000 mL虎
眼万年青皂苷提取液 , 加入去离子水稀释到
3 000mL ,稀释液加入预处理好的 AB-8柱子(柱体
积517 cm3)反复吸附 ,去离子水脱糖后 ,依次用
15%、25%、35%、45%、55%、65%、75%、85%、95%的
乙醇各500mL洗脱皂苷 ,分别收集 ,测各个体积分数
洗脱下来的皂苷含量 ,各乙醇体积分数洗脱液所含
虎眼万年青总皂苷的量 ,见图 1。从图 1可知 ,在
15%、25%、35%、45%乙醇体积分数的洗脱液几乎不
含虎眼万年青皂苷 ,从 45%开始 ,随着乙醇体积分数
的不断上升 ,洗脱液中的皂苷含量不断上升 ,到65%
～ 75%达到最高 ,然后下降。TLC检测洗脱液 ,发现
15%、25%、35%洗脱液洗下的是杂质 ,45%～ 95%乙
醇体积分数洗下的含有虎眼万年青皂苷 ,最后用
1 000mL 80%乙醇体积分数的洗脱液将吸附柱上的
残留成分全部洗脱下来。各乙醇体积分数洗脱液所
含虎眼万年青的量 ,如表 1所示。
图 1　不同体积分数乙醇洗脱液的总皂苷含量
表 1　不同体积分数乙醇洗脱液的虎眼万年青皂苷
φ(乙醇)% 15 25 35 45 55 65 75 85 95
m / g 0 0 0. 03 0. 48 0. 74 1. 54 1. 93 0. 37 0. 25
w /% 0 0 0. 5 8. 8 15. 6 28. 3 35. 4 6. 8 4. 6
　　由表 1可见 ,15 ～ 35%洗脱下来的虎眼万年青
皂苷占总体洗脱的0. 5%,45%～ 95%洗脱下来的占
99. 5%。虎眼万年青总皂苷的得率为1. 09%。因此 ,
大孔吸附树脂法提取虎眼万年青总皂苷的最佳工艺
是先用35%乙醇洗去杂质 ,皂苷损失量少 ,再用95%
乙醇洗脱虎眼万年青皂苷。
2. 2　大孔树脂吸附层析提取虎眼万年青总皂苷
将虎眼万年青植物自然干燥后粉碎 。称取虎
眼万年青干粉 500 g ,加入 2 500 mL 95%乙醇浸泡
24 h ,过滤取上清 ,滤渣重复浸提 3次 ,将 3次滤液
合并 ,减压浓缩到 2 000 mL ,用 1 /3体积的石油醚
萃取其中的脂溶性成分 ,稀释到 5 L 加入预处理完
全的 AB-8柱(517 cm3),反复吸附至完全 ,先用 4 L
水洗去糖 ,然后用800 mL 35%乙醇洗去杂质 ,最后
用5倍柱体积95%乙醇洗脱皂苷 ,收集洗脱液上预
处理好的 D-280柱脱色 ,脱色后的洗脱液减压浓缩
至小体积 ,冻干 ,得产品虎眼万年青皂苷 4. 55 g ,得
率为 0. 91%。所得虎眼万年青总皂苷用 TLC 检
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测。结果如图2所示。
展开剂为 CHC l3∶MeOH∶H2O=7∶2. 5∶0. 5
图 2　虎眼万年青总皂苷 TLC 图
　　如图 2所示 ,提取的虎眼万年青总皂苷中含
有很多成分。查阅文献得知虎眼万年青皂苷结构
为酰化二糖甾体皂苷[ 6] ,所含糖基较多 ,因此偏下
方的点应该是需求的虎眼万年青皂苷。其他点是
何物质需要以后做进一步的分离分析工作。
2. 3　虎眼万年青不同部位的皂苷提取
将自然干燥的虎眼万年青茎叶 、球状根 、根须
粉碎 ,分别称取 300 g ,按照上述提取方法进行提
取 ,所得数据如表 2。从表 2 可知 ,各个部位虎眼
万年青总皂苷提取率的对比:球状根>茎叶>根
须。球状根处提取的得率最高 ,为 1. 12%,茎叶
处提取的次之为 0. 73%, 根须处的得率最低
0. 46%,仅为球状根处提取的皂苷得率的一半不
到。提取过程中每个步骤的得率如表 3。
表 2　不同部位虎眼万年青总皂苷提取情况
m(初始物) / g m(95%乙醇浸提后产物) /g
m(石油醚萃取
脱脂后产物) / g
m(AB-8脱
糖后产物) / g
m(D-280脱
色后产物) /g 总得率 /%
茎叶 300 25. 7 21. 2 2. 74 2. 19 0. 73
球状根 300 48. 8 37. 4 4. 04 3. 36 1. 12
根须 300 15. 8 13. 7 1. 85 1. 38 0. 46
表 3　不同部位虎眼万年青提取过程得率对比情况
脱脂得率 /% 脱糖得率 /% 脱色得率 /%
茎叶 82. 5 12. 9 80. 0
球状根 76. 6 10. 8 83. 2
根须 86. 4 13. 5 74. 6
　　注:表中各个过程得率均为该步产物与该步起始物的比值
从表 3不同部位虎眼万年青提取过程得率对
比情况可知 ,球状根中的脂溶性物质和多糖类物
质含量较高 ,因此在脱脂和脱糖过程中的得率均
低于茎叶和根须;根须处的乙醇浸提物含色素类
物质较多 ,与实验过程中呈现的洗脱液颜色较深
符合 。浸提物中脂溶性物质的对比:球状根>茎
叶>根须;浸提物中多糖类物质含量的对比:球状
根>茎叶>根须;浸提物中色素类物质含量的对
比:根须>茎叶>球状根 。
3　结　　论
通过实验 ,建立一种提取虎眼万年青总皂苷
的方案 ,大孔树脂吸附层析法提取分离虎眼万年
青总皂苷的最佳工艺为:先用 35%的乙醇洗脱除
杂 ,再用 5倍柱体积 95%乙醇洗脱皂苷 。采用上
述工艺 ,提取虎眼万年青总皂苷 ,得率为 0. 91%;
对不同部位虎眼万年青皂苷的分离提取进行对
比 ,浸提物中脂溶性物质的对比:球状根>茎叶>
根须;浸提物中多糖类物质含量的对比:球状根>
茎叶>根须;浸提物中色素类物质含量的对比:根
须>茎叶>球状根;各个部位虎眼万年青总皂苷
总得率的对比:球状根处得率 1. 12%>茎叶处得
率 0. 73%>根须处得率 0. 46%。
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