全 文 ：第 29卷第 5期
2 0 1 0 年 9 月
大 连 工 业 大 学 学 报
Journal of Dalian Polytechnic University
Vol.29 No.5
Sept.2 0 1 0
文章编号:1674-1404(2010)05-0346-03
虎眼万年青总皂苷中单体皂苷的分离纯化
孙 亚 娟 , 　金 凤 燮 , 　鱼红 闪
(大连工业大学 生物与食品工程学院 , 辽宁 大连　116034)
摘要:虎眼万年青总皂苷中含有很多皂苷组分 , 为了得到虎眼万年青单体皂苷 , 采用硅胶柱层析法分
离虎眼万年青总皂苷 ,以氯仿-甲醇混合液为流动相进行洗脱 , TLC 跟踪检测。 5 g 虎眼万年青总皂苷
进行硅胶柱层析分离 , TLC 检测 , 得到 5 种虎眼万年青皂苷的单体组分 , 得率分别为 2.6%、2.6%、
3.6%、5.4%、12.6%。超高压液相色谱检测 , 分离效果相对较好的是 D、E 组分。结果表明 , 采用硅胶
柱层析的方法可以初步达到分离纯化虎眼万年青皂苷的目的。
关键词:虎眼万年青;虎眼万年青皂苷;硅胶柱层析
中图分类号:TS218;Q946.49 文献标志码:A
Separation and purif ication of Ornithogalum caudaside
SUN　Ya-juan , 　JIN　Feng-xie , 　YU　Hong-shan
(School of Biological &Food Engineering, Dal ian Polytechnic University , Dal ian 116034 , China)
Abstract:There are many saponins in Orni thogalum caudaside.The Orni thogalum caudaside w as
separated and purificated using silica gel column and solvent chlo rofo rm and me thano l.5 elements
were obtained from 5 g O rnithogalum caudaside.The yield of these elements w as 2.6%, 2.6%,
3.6%, 5.4%, 12.6%.Every element w as de tected by UPLC and D and E elements are bet ter.Thus ,
silica g el co lumn layer chromato graphy is a useful technique fo r separation and puri ficat ion of
O rnithogalum caudaside.
Key words:Orni thogalum caudatum Ait;Ornithogalum caudaside;silica g el co lumn
收稿日期:2009-12-08.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30470055);辽宁省教育厅创新团队项目(2007T006).
作者简介:孙亚娟(1984-),女 ,硕士研究生;通信作者:鱼红闪(1968-),男 ,教授.
0　引　言
虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)是
一种极具开发潜力的中草药。虎眼万年青中所包
含的虎眼万年青皂苷属于甾体皂苷 ,甾体皂苷具
有广泛的药理作用和重要的生物活性 ,如抗肿瘤 、
抗真菌 、防治心血管疾病 、降血糖 、免疫调节等。
虎眼万年青皂苷 OSW-1 ,是一种具有极强抗癌活
性的酰基胆甾烷苷 ,对肺癌 、乳腺癌有明显的抗癌
活性 。体外抗 p338 淋巴细胞白血病活性结果表
明 ,OSW-1是常见抗癌药物喜树碱 、阿霉素 、紫杉
醇抗癌活性的 10 ～ 100倍[ 1] ,而且对正常细胞没
有毒性。迄今为止 ,国内对虎眼万年青的研究 ,主
要集中在多糖的提取及药理活性[ 2-4] 和组织培养
方向[ 5] ,对于虎眼万年青皂苷的分离提取的报道
很少。本实验室肖冲等[ 6]已从虎眼万年青中提取
了虎眼万年青皂苷 ,由于单体皂苷作用不同 ,所以
有必要制成单体皂苷制剂 。本实验以分离得到虎
眼万年青皂苷单体组分为首要目的 ,用硅胶柱层
析法尝试分离虎眼万年青皂苷单体组分 。
1　材料与方法
1.1　材料和仪器
虎眼万年青总皂苷 ,实验室自制;硅胶 ,青岛
海洋化工厂;薄层层析板(T LC),德国 Merck 公
司生产;旋转蒸发仪 ,上海爱郎仪器有限公司 。
1.2　方　法
1.2.1　薄层层析(TLC)
本实验所用薄层层析板由德国 Merck 公司
生产 。用微量取样器取一定量样品点于薄层层析
板起始线上 ,电吹风吹干 ,置于放好展开剂的展开
缸中展开后 ,吹干溶剂 ,10%H2 SO 4 溶液显色 ,得
T LC图谱。所用展开剂为:V(氯仿)∶V(甲醇)
∶V(水)=7.0∶3.0∶0.5。
1.2.2　减压硅胶柱层析
制备样品胶:称取一定量的虎眼万年青总皂
苷放入瓷碗中 ,加入适量的甲醇 ,充分溶解后 ,与
1.5倍样品质量的 80 ～ 100目硅胶混合 ,搅拌均匀 ,
60 ℃水浴锅上加热 ,待样品被硅胶吸附 ,溶剂充分
挥发干燥后 ,磨成均匀的粉末 ,样品胶制备完成。
装柱:先用一小块脱脂棉堵住柱底 , 然后取
16倍样品质量的 300 ～ 400 目硅胶(分离胶)装
柱 ,保持水平 ,抽真空压实 ,然后在其上面装入薄薄
一层 80 ～ 100目的硅胶 ,再装入干燥好的样品胶 ,
最后在样品胶上面铺上一层脱脂棉 ,抽真空压实。
硅胶柱装好后 ,先用纯氯仿通柱子 , 再用氯
仿-甲醇的混合溶剂进行洗脱 ,每次大约 100 mL ,
分别收集洗脱液 。用薄层层析法跟踪检测整个洗
脱过程 ,根据硅胶板上显示的结果 ,把具有相同组
分的洗脱液收集在一起 ,浓缩得固体产物 。
本实验虎眼万年青总皂苷用量为5 g ,洗脱液
比例为 V(氯仿)∶V(甲醇)=9∶1。
1.2.3　超高压液相色谱检测虎眼万年青皂苷
实验所用为美国 Wate rs Acquity UPLC 色
谱仪;C18色谱柱为 waters 50 mm ×2.1 mm ,
1.7 μm;进样量为 3μL。流动相 A 为乙腈 ,流动
相 B为水 。流动相比例为:初始 , A 为 10%, B为
90%;3 min时 , A为 60%, B为 40%;5.5 ～ 7 min
时 ,A 为 100%,B 为 0。
2　结果与讨论
2.1　硅胶柱分离虎眼万年青皂苷
称取虎眼万年青总皂苷5 g ,硅胶柱层析方法
分离 。由图 1可知 ,分离产物按照极性由小到大
顺序流出 ,瓶号 25 ～ 28 ,48 ～ 56 , 72 ～ 77 ,86 ～ 89 ,
97 ～ 122为单点 ,单独收集 ,分别标记为 A 、B 、C 、
D 、E 加以区分 。
图 1　虎眼万年青总皂苷硅胶柱分离成分
TLC检测结果
Fig.1　T LC fo r O rnithogalum caudaside sample sepa-
rated by silica g el co lumn chromatog raph
将所得各单体皂苷组分单独收集 ,浓缩后称
重 ,并计算得率 ,对比如表 1 。
表 1　各组分洗脱分离收集表
Tab.1　Yield of pr oduct
组分 瓶号 m(样品)/ g 得率/ %
A 25～ 28 0.13 2.6
B 48～ 56 0.13 2.6
C 72～ 77 0.18 3.6
D 86～ 89 0.27 5.4
E 97～ 122 0.63 12.6
2.2　虎眼万年青皂苷单体的检测
UPLC 检测虎眼万年青总皂苷及分离所得单
体。精密称取各样品1 mg ,分别溶于1 mL乙腈 ,
完全溶解过 0.45 μm 微孔滤膜 ,取滤液 。其 UP-
LC 检测图谱如图 2 ～ 7所示 。
由虎眼万年青总皂苷的色谱图可以看出 ,虎
眼万年青总皂苷中含有很多组分 ,共有 12个峰 ,
其中 D 、E组分的峰值较高 ,峰面积也相对较大 ,
含量相对较高 ,比较各色谱图 ,可以看出 ,本次硅
胶柱层析对 D 、E 组分的纯化效果较好。各样品
保留时间及峰面积所占比例情况见表 2。
图 2　虎眼万年青总皂苷色图谱
Fig.2　Chromato gr am of caudaside
347第 5期 孙亚娟等:虎眼万年青总皂苷中单体皂苷的分离纯化
表 2　各组分色谱分析对比
Tab.2　Analy sis fo r chromato gr am of product
组分 t/min 峰面积所占比例/ %
A 6.093 66.6
B 5.606 70.0
C 4.620 79.6
D 4.063 80.1
E 3.723 90.1
3　结　论
硅胶柱分离虎眼万年青皂苷样品 5 g , T LC
跟踪检测 ,按照极性由小到大依次得到 5种虎眼
万年青皂苷单体 。得率分别为 2.6%、2.6%、
3.6%、5.4%、12.6%。超高压液相色谱检测各样
品 ,虎眼万年青总皂苷中 D 、E组分的含量相对较
高 ,本次硅胶柱层析对 D 、E 组分的分离效果相对
较好 。采用硅胶柱层析的方法可以初步达到分离
纯化虎眼万年青总皂苷的目的 。本实验对今后研
究虎眼万年青单体皂苷的分子结构及其药理活性
打下一定的基础 。
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348 大　连　工　业　大　学　学　报 第 29卷