全 文 ：直立百部药材中 2 种生物碱的含量测定
帅真，李卫民，高英
(广州中医药大学 新药研究与开发中心，广东 广州 510006)
摘要:目的 测定直立百部中二脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱的质量分数。方法 采用 THERMO
Hypersil ODS-C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-水为流动相梯度洗脱(0 ～ 45 min，体积比 43∶
57;45 ～ 50 min，体积比 43∶ 57 ～ 55∶ 45;50 ～ 90 min，体积比 55∶ 45。) ，检测波长为 237 nm，柱温为室温。
结果 二脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱的线性范围分别为 23 ～ 161 μg·mL －1(r = 0． 999 8) ，14 ～ 98
μg·mL －1(r = 0． 999 9) ;平均加样回收率分别为 100． 9%、101． 3%，RSD 值分别为 1． 98%、1. 66%(n =
6)。3 批药材中的二脱氢对叶百部碱质量分数分别为 1． 13、1． 14、1． 11 mg·g －1，氧化对叶百部碱质量
分数分别为 1． 78、1． 81、1． 76 mg·g －1。结论 该方法简便、准确、重复性好，适用于直立百部药材中二脱
氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱的质量控制。
关键词:二脱氢对叶百部碱;氧化对叶百部碱;直立百部总碱;高效液相色谱法
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2012． 02． 016
文章编号:1006-8783(2012)02-0167-03
Determination of the contents of two alkaloids in Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．
SHUAI Zhen，LI Wei-min，GAO Ying
(New Drug Research ＆ Development Center，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，
China)
Abstract:Objective A high perfomance liquid chromatographic (HPLC)method was developed for the
simultaneous determination of oxotuberostemonine and bisdehydrotuberostemonine in Stemona sessilifolia
(Miq．)Miq． Methods The HPLC was performed on a THERMO Hypersil ODS-C18(250 mm × 4． 6 mm，5
μ m)at room temperature and detected at 237 nm with a gradient elution of methanol-H2O． Results The
linear range of bisdehydrotuberostemonine and oxotuberostemonine were 23 － 161 μg·mL －1(r = 0． 999 8)
and 14 － 98 μg·mL －1(r = 0. 999 9) ，respectively，and the average recovery ratio were(n = 6) :100． 9%
(RSD = 1． 98%)and 101． 3% (RSD = 1． 66%)． The contents of bisdehydrotuberostemonine in three
samples were 1. 13，1. 14 and 1. 11 mg·g －1，and the contents of oxotuberostemonine were 1. 78，1. 81 and
1. 76 μg·g －1 ． Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，which may be suitable for the
quality control of oxotuberostemonine and bisdehydrotuberostemonine in Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．
Key words:bisdehydrotuberostemonine;oxotuberostemonine; total alkaloids from Stemona sessilifolia
(Miq．)Miq．;HPLC
收稿日期:2011-12-23
作者简介:帅真(1987 －) ，男，硕士研究生，从事中药新药与中药有效物质研究，Email:johnbox11@ 163． com;通信作者:高英
(1956 －) ，女，硕士生导师，主任中药师，主要从事中药新药有效物质的研究，电话:020-39358390，Email:gaoyingw@
126． com。
网络出版时间:2012-03-27 16:06 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． R． 20120327． 1606． 003． html
直立百部是百部科植物直立百部 Stemona
sessilifolia(Miq．)Miq． 的干燥块根，具有润肺下气、
止咳、杀虫等作用［1］，文献报道其主要有效成分为
生物碱类化合物［2 － 3］，现代药理表明直立百部的水
提液对豚鼠的支气管平滑肌有解痉作用［4］。因此
以直立百部生物碱类成分作为直立百部药材质量控
制的指标性成分较为合理。关于直立百部质量控制
方面的研究开展得较少［5 － 6］，本试验采用 HPLC 法
测定直立百部总生物碱中二脱氢对叶百部碱、氧化
对叶百部碱的质量分数，为直立百部的开发利用提
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Apr． 2012，28(2)
供了依据。
1 仪器与试药
LC-10AT vp Plus 高效液相色谱仪(二元泵，日
本岛津公司) ，SPD-10A vp紫外检测器(日本岛津公
司) ;SHIMADZU CBM-10A vp 色谱工作站(日本岛
津公司) ;THERMO Hypersil BDS-C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm)色谱柱。
百部药材(购于江西省樟树中药材市场实业有
限公司，批号:20100126、20100725、20110216)经广
州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定为百部
科植物直立百部 Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．的干
燥块根。二脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱对照
品(自制，经过 HPLC 法检测质量分数在 98% 以
上)。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备
2． 1． 1 混合对照品溶液的制备 分别精密称取二
脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱对照品 2. 3、1. 4
mg，分别置 5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻
度，摇匀，即得。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取直立百部药材 5 g，
精密称定，加入 90%(体积分数)乙醇加热回流 2 h，
滤过，回收乙醇，得浸膏。浸膏用适量甲醇溶解，
0. 45 μm滤膜滤过，定容至 100 mL 容量瓶中，作为
供试品溶液。
2． 2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:THERMO Hypersil BDS-C18(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)柱;流动相:甲醇-水梯度洗脱(0 ～ 45
min，体积比 43∶ 57;45 ～ 50 min，体积比 43∶ 57 ～ 55∶
45;50 ～ 90 min，体积比 55∶ 45) ;检测波长:237 nm;
流速:1 mL·min －1;柱温:室温。分别精密吸取对照
品、供试品溶液 20 μL注入液相色谱仪，按上述条件
进行测定。理论塔板数以二脱氢对叶百部碱、氧化
对叶百部碱计均不低于 6 000;二脱氢对叶百部碱
的拖尾因子为 1. 080，保留时间约为 70． 317 min;氧
化对叶百部碱的拖尾因子为 0． 881，保留时间约为
45． 528 min，对照品与其他成分基线可达到分离。
见图 1。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 标准曲线的绘制 分别精密量取混合对照
品溶液 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5、0． 7 mL，分置 6个 2 mL
容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度。按“2． 2”项下
1．氧化对叶百部碱;2．二脱氢对叶百部碱。
图 1 对照品(A)、供试品(B)溶液 HPLC图
Figure 1 HPLC chromatograms of reference substance (A)
and sample (B)
色谱条件进样分析。以对照品质量浓度(ρ)对峰面
积(A)进行线性回归，得回归方程。二脱氢对叶百
部碱:A1 =1． 3398 ×10
4ρ1 +9． 7846 ×10
4，r1 =0． 999 8;
氧化对叶百部碱:A2 = 1． 2815 × 10
4ρ2 + 3． 7792 × 10
4，
r2 = 0. 999 9。结果表明，二脱氢对叶百部碱的质
量浓度在 23 ～ 161 μg·mL －1，氧化对叶百部碱在
14 ～ 98 μg·mL －1范围内与其峰面积呈良好的线
性关系。
2． 3． 2 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 20
μL，重复进样 6 次，依法测定，测定峰面积，结果二
脱氢对叶百部碱峰面积的 RSD为 0. 87%，氧化对叶
百部碱峰面积的 RSD 为 0. 52%，表明仪器精密度
良好。
2． 3． 3 重复性试验 取同一批(批号:20100126)
直立百部药材适量，共 6 份，精密称定。按“2． 1． 2”
项下方法制备供试品溶液，“2． 2”项下色谱条件测
定。测得二脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱平均
质量分数的 RSD值分别为 0. 78%、1． 02%。
2． 3． 4 稳定性试验 取同一批(批号:20100126)
供试品溶液，于室温下放置，每隔 3 h 测定 1 次，共
测定 6 次，15 h内二脱氢对叶百部碱、氧化对叶百部
碱峰面积的 RSD 分别为 0. 82%、1. 13%，表明供试
品溶液在 15 h内基本稳定。
2． 3． 5 加样回收率试验 精密称取已知二脱氢对
叶百部碱、氧化对叶百部碱质量分数的直立百部药
材(批号:20100126)6 份，分别加入对照品适量，按
“2． 1． 2”项下方法制备供试品溶液，按“2． 2”项下色
谱条件进行测定，计算回收率。结果见表 1。
2． 4 样品含量测定
分别取 3 批直立百部药材，各 3 份，精密称定。
按“2． 1． 2”项下方法制备供试品溶液，按“2． 2”项下
色谱条件进行测定，计算含量。结果见表 2。
861 广东药学院学报 第 28 卷
表 1 加样回收率试验结果
Table 1 Results of the recovery test(n = 6)
成分 样品量 m /g 样品中的量 m /mg 加入量 m /mg 测得量 m /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
氧化对 2． 527 4． 50 4． 58 9． 12 100． 9
叶百部 2． 632 4． 68 4． 64 9． 38 101． 3
碱 2． 428 4． 32 4． 13 8． 46 100． 2 101． 3 1． 66
2． 573 4． 58 4． 52 9． 21 102． 4
2． 386 4． 25 4． 63 9． 06 103． 9
2． 621 4． 67 4． 28 8． 91 99． 1
二脱氢 2． 527 2． 86 2． 75 5． 63 100． 7
对叶百 2． 632 2． 97 2． 68 5． 71 102． 2
部碱 2． 428 2． 74 2． 88 5． 66 101． 4 100． 9 1． 98
2． 573 2． 91 2． 59 5． 49 99． 6
2． 386 2． 70 2． 84 5． 48 97． 9
2． 621 2． 96 2． 53 5． 58 103． 6
表 2 2 种生物碱的含量测定结果
Table 2 Determination results of the contents of two alkaloids(n = 3)
批号 w(二脱氢对叶百部碱)/(mg·g －1) RSD /% w(氧化对叶百部碱)/(mg·g －1) RSD /%
20100126 1． 13 1． 3 1． 78 1． 5
20100725 1． 14 1． 8 1． 81 2． 1
20110216 1． 11 1． 6 1． 76 1． 7
3 讨论
本研究考察了不同提取溶剂(不同体积分数甲
醇、乙醇)和不同提取方法(超声、回流法)的提取效
果，并优化了提取时间，结果以 90%(体积分数)乙
醇加热回流提取 2 h的提取效率最高。
本研究建立了直立百部药材总生物碱中的二脱
氢对叶百部碱、氧化对叶百部碱的 HPLC 含量测定
方法，并对 3 批直立百部药材进行了测定。结果表
明，这 2 种生物碱在直立百部药材中的质量分数均
较高，对直立百部质量控制具有一定意义;且该方法
操作简便、准确、重复性好，可有效控制直立百部药
材质量，为直立百部的开发利用提供了依据。
参考文献:
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(责任编辑:刘晓涵)
961第 2 期 帅真，等．直立百部药材中 2 种生物碱的含量测定