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不同剂量绿萝花对组织器官抗氧化能力的影响



全 文 :收稿日期:2015 - 04 - 05;修回日期:2015 - 04 - 16
基金项目:“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAD34B0
2 - 4);四川省研究生教改项目“专业学位研究生教育实践基
地建设”
作者简介:韩金潭(1990 -),女,硕士研究生,研究方向为中药
药理学,hanjintan00@ 163. com.
通信作者:刘 群(1965 -),男,副教授,博士,研究方向为中
药药理学,liuqun2567@ 163. com.
不同剂量绿萝花对组织器官抗氧化能力的影响
韩金潭,刘 群,孙翠翠,王 赛,邱园园
(西南民族大学 生命科学与技术学院,成都 610041)
中图分类号:S865. 1 + 2;S859. 82 文献标识码:A 文章编号:1004 - 7034(2015)11 - 0024 - 05
关键词:绿萝花;大鼠;抗氧化作用;毒性作用;抗衰老
摘 要:为了研究不同剂量绿萝花对大鼠组织器官抗氧化能力的影响,探讨绿萝花的抗衰老及毒性作
用机理,试验将正常大鼠分为空白组、低剂量绿萝花组、中剂量绿萝花组、高剂量绿萝花组和大剂量绿
萝花组,连续给药 28 d,测定脏器的超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛含量(MDA)、总抗氧化能力
(T - AOC)、单胺氧化酶活性(MAO)、谷胱甘肽过氧化氢酶活性(GSH - Px)、过氧化氢酶活性(CAT)。
结果表明:连续服用绿萝花 28 d后,低(1. 0 g /d)、中(2. 0 g /d)、高(4. 0 g /d)剂量绿萝花能引起大脑、
肝脏和心脏的 SOD、T - AOC、GSH - Px、CAT 活性上升,MDA 含量下降,MAO 活性下降;大剂量绿萝
花(10. 0 g /d)则引起大脑、肝脏和心脏的 SOD、T - AOC、GSH - Px、CAT 活性下降,MDA 含量上升,
MAO活性上升。说明绿萝花具有增强组织器官抗氧化能力的作用;抗氧化作用与剂量有关,大剂量
绿萝花具有一定的毒性作用。
Effects of different doses of Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl on
the antioxidant capacity of tissues and organs of rats
HAN Jin - tan,LIU Qun,SUN Cui - cui,WANG Sai,QIU Yuan - yuan
(College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities,Chengdu 610041,China)
Key words:Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl;rat;antioxidant effect;toxic effect;anti - aging
Abstract:To study the effects of different doses of Scindapsus aureus(Linden ex Andre)Engl on the antioxidant capacity of rat tissues and or-
gans,and explore the anti - aging and mechanism of toxicity action of Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl,the normal rats were divided
into blank group,low - dose group,medium - dose group,high - dose group,and large - dose group of Scindapsus aureus (Linden ex Andre)
Engl. The rats were continuously administrated with Scindapsus aureus(Linden ex Andre)Engl for 28 d. The activity of superoxide dismutase
(SOD),the content of malondialdehyde (MDA) ,total antioxidant capacity (T - AOC) ,monoamine oxidase (MAO)activity,glutathione
peroxidase (GSH - Px)activity,catalase (CAT)activity of the main organs of all rats were determined. The results showed that the increase
of the SOD activity,T - AOC,GSH - Px activity,CAT activity and the decrease of the MDA content with MAO activity of the brains,livers
and hearts were induced by taking low dose(1. 0 g /d) ,medium dose(2. 0 g /d) ,and high dose(4. 0 g /d)of Scindapsus aureus (Linden ex An-
dre)Engl for 28 d. The decrease of the SOD activity,T - AOC,GSH - Px activity,CAT activity and the increase of the MDA content,MAO
activity of the brains,livers and hearts were induced by taking large dose(10. 0 g /d)of Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl for 28 d.
The results indicate that Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl has an enhanced effect on the antioxidant capacity of tissues and organs,
which is related close to the dose. The large dose of Scindapsus aureus (Linden ex Andre)Engl has certain toxic effect.
绿萝花[天南星科喜林芋属,Scindapsus aureus
(Linden ex Andre)Engl]产于喜马拉雅山脉西藏寒冷
地带珍贵植物绿萝花干燥花蕾,主治糖尿病、高血压、
高血脂、冠心病、血管炎、脉管炎等疾病[1]。民间习
以花蕾晾干,泡水饮用。目前,关于绿萝花的研究报
道甚少,其毒性研究未见报道。本研究采用不同浓度
剂量的绿萝花对大鼠进行连续灌胃 28 d,主要脏器的
超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总
抗氧化(T - AOC)活性、单胺氧化酶(MAO)活性、谷
胱甘肽过氧化氢酶(GSH - Px)活性、过氧化氢酶
(CAT)活性作为检测指标,探讨绿萝花的抗氧化作用
及量效关系,在此基础之上,对连续服用大剂量绿萝
花对机体的毒性反应也进行了初步研究,现将研究结
果报道如下。
42
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 11 2015
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2015.1841
2015 年 11 月(上)
1 材料
1. 1 试验动物
Wistar 大鼠(SPF 级,雌雄各半,体重 200 ~
250 g),由成都达硕生物科技有限公司提供。
1. 2 试验药物
绿萝花,购自成都国际商贸城荷花池中药材专业
市场,由四川省兽药监察所鉴定。
1. 3 主要试剂及仪器
SOD、MDA、GSH - Px、CAT、T - AOC、MAO 试剂
盒,购自南京建成生物工程研究所;Lowry 法蛋白含
量检测试剂盒,购自南京凯基生物科技发展有限公
司;分光光度计(型号为 Beckman DU - 800),购自贝
克曼库尔特公司。
2 方法
2. 1 绿萝花口服液的制备
按照优化后的水提工艺(浸泡 0. 5 h,20 倍加水,
煎煮 1 h,煎煮 3 次)制备绿萝花干膏制剂(干膏得率
为 23. 2%),换算成生药含量并配制成 500%、200%、
100%、50%浓度的绿萝花口服液,4 ℃冰箱保存。
2. 2 试验动物的分组与处理
将 50 只大鼠随机分为 5 组,每组 10 只,各组处
理如下:空白组,常规饲养,灌胃生理盐水 2 mL /(d·
只);低剂量组,常规饲养,灌胃 50%浓度的绿萝花口
服液 2 mL /(d·只);中剂量组,常规饲养,灌胃
100%浓度的绿萝花口服液 2 mL /(d·只);高剂量
组,常规饲养,灌胃 200% 浓度的绿萝花口服液
2 mL /(d·只);大剂量组,常规饲养,灌胃 500%浓度
的绿萝花口服液 2 mL /(d·只)。各组均连用 28 d,
最后一次灌胃后禁食 12 h(仅给水),处死。
2. 3 10%组织匀浆液的制备
以断颈法处死大鼠,迅速摘取大脑、肝脏、心脏,
用生理盐水冲洗并用滤纸吸干,分别取大脑、肝脏、心
脏组织约 300 mg于 4 mL 的 EP 管中,加入 9 倍量预
冷生理盐水(以重量计),用组织匀浆机匀浆并制成
10%的组织匀浆液;将制备好的 10% 组织匀浆液
3 000 r /min离心 15 min;取上清液测定 SOD 活性、
MDA含量、T - AOC活性、GSH - Px活性、MAO活性、
CAT活性、组织蛋白含量。
2. 4 检测指标的测定
取制备好的大脑、肝脏、心脏 10%组织匀浆,按
照试剂盒说明书测定样品中蛋白质的浓度及 MDA
含量及 SOD、T - AOC、MAO、GSH - Px、CAT的活性。
2. 5 数据的统计与分析
采用 SPPS17. 0 软件对各组数据进行统计,试验
数据以“平均数 ±标准差”与柱状图表示。
3 结果
3. 1 大脑抗氧化能力
大脑 SOD 活性、MDA 含量、T - AOC 活性、MAO
活性、GSH - Px 活性、CAT 活性统计结果见表 1 和
图 1。
表 1 大脑相关指标统计结果(x ± s,n = 10)
Table 1 Statistical results of the relative indexes of brain(x ± s,n = 10)
组别
SOD活性
/(U·mgprot - 1)
MDA含量
/(nmol·mgprot - 1)
T - AOC活性
/(U·mgprot - 1)
MAO活性
/(U·mgprot - 1)
GSH - Px活性
/(U·mgprot - 1)
CAT活性
/(U·mgprot - 1)
空白组 65. 50bAB ± 7. 35 15. 35bcBC ± 1. 42 0. 28abAB ± 0. 17 7. 71abAB ± 0. 85 119. 79aA ± 9. 78 8. 29aA ± 0. 66
低剂量组 68. 09bB ± 7. 15 14. 02abAB ± 1. 58 0. 37bcB ± 0. 18 7. 43acABC ± 0. 81 131. 60bB ± 9. 61 11. 44bB ± 0. 85
中剂量组 81. 49cC ± 7. 14 13. 29aA ± 1. 53 0. 47cB ± 0. 19 6. 70cdAC ± 0. 87 133. 17bBC ± 8. 86 12. 31cBC ± 0. 59
高剂量组 86. 60cC ± 6. 38 12. 85aA ± 1. 62 0. 48cB ± 0. 19 6. 44dC ± 0. 89 142. 73cC ± 5. 20 12. 63cC ± 0. 83
大剂量组 59. 16aA ± 6. 65 16. 32cC ± 1. 81 0. 13aA ± 0. 12 8. 36bB ± 0. 77 112. 45aA ± 9. 62 7. 39dA ± 0. 84
注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著(P >0. 05),小写字母不同表示差异显著(0. 01 <P <0. 05),大写字母不同表示差异极显著(P <0. 01)。
注:图中纵坐标数据单位除 MDA含量为 nmol·mgprot - 1外,
其余均为 U·mgprot - 1。
图 1 大脑相关指标柱状图
Fig. 1 Histogram of the relative indexes of brain
由表 1、图 1 可以看出:高、中剂量组 SOD活性极
显著高于空白组和低剂量组(P < 0. 01),但大剂量组
SOD活性显著低于空白对照组(0. 01 < P < 0. 05)。
高、中剂量组 MDA 含量极显著低于空白组(P <
0. 01),但大剂量组 MDA 含量极显著高于中、高剂量
组(P < 0. 01)且与空白组相当(平均 MDA 含量升
高)。高、中剂量组 T - AOC 活性显著高于空白组
(P < 0. 05);大剂量组 T - AOC 活性极显著低于高、
中、低剂量组(P < 0. 01)。高剂量组 MAO 活性极显
著低于空白组(P < 0. 01);中剂量组 MAO 活性显著
低于空白组(P < 0. 05);大剂量组 MAO 活性极显著
低于高、中剂量组(P < 0. 01)。低、中、高剂量组
52《黑龙江畜牧兽医》科技版
GSH - Px酶活性极显著高于空白组(P < 0. 01);大剂
量组 GSH - Px 酶活性极显著低于高、中、低剂量组
(P < 0. 01)。高、中剂量组 CAT 活性极显著高于空
白组(P < 0. 01);大剂量组 CAT 活性极显著低于高、
中、低剂量组(P < 0. 01)。
3. 2 肝脏抗氧化能力
肝脏 SOD 活性、MDA 含量、T - AOC 活性、MAO
活性、GSH - Px 活性、CAT 活性统计结果见表 2 和
图 2。
由表 2、图 2 可以看出:大剂量组 SOD活性极显
表 2 肝脏相关指标统计结果(x ± s,n = 10)
Table 2 Statistical results of the relative indexes of liver(x ± s,n = 10)
组别
SOD活性
/(U·mgprot - 1)
MDA含量
/(nmol·mgprot - 1)
T - AOC活性
/(U·mgprot - 1)
MAO活性
/(U·mgprot - 1)
GSH - Px活性
/(U·mgprot - 1)
CAT活性
/(U·mgprot - 1)
空白组 355. 57aA ± 12. 30 6. 72aA ± 0. 60 0. 74aAB ± 0. 23 5. 40aAB ± 0. 81 70. 19aA ± 10. 08 302. 12aA ± 8. 99
低剂量组 356. 94aA ± 11. 76 6. 63aA ± 0. 71 0. 78abAB ± 0. 18 5. 34aAB ± 0. 80 82. 13bB ± 9. 23 347. 38bB ± 8. 98
中剂量组 358. 75aA ± 10. 76 6. 59aA ± 0. 72 0. 81abAB ± 0. 23 4. 62bA ± 0. 81 97. 94cC ± 9. 82 499. 10cC ± 8. 62
高剂量组 359. 14aA ± 12. 28 6. 35aA ± 0. 83 0. 99bA ± 0. 34 4. 43bA ± 0. 81 110. 10dD ± 10. 50 551. 51dD ± 9. 33
大剂量组 329. 43bB ± 11. 54 8. 12bB ± 0. 72 0. 51cB ± 0. 20 6. 20cB ± 0. 69 62. 35aA ± 8. 50 254. 94eE ± 9. 70
注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著(P > 0. 05),小写字母不同表示差异显著(0. 01 < P < 0. 05) ,大写字母不同表示差异极显著(P <
0. 01)。
注:图中纵坐标数据单位除 MDA为 nmol·mgprot - 1外,
其余均为 U·mgprot - 1。
图 2 肝脏相关指标柱状图
Fig. 2 Histogram of the relative indexes of liver
著低于空白组和其他三个剂量组(P < 0. 01)。大剂
量组 MDA含量极显著高于空白对照组和其他三个
剂量组(P < 0. 01)。低、中、高剂量组尤其是高剂量
组 T - AOC 活性高于空白组(P < 0. 05);大剂量组
T - AOC 活性显著低于空白组和其他三个剂量组
(P < 0. 05)。中、高剂量组 MAO 活性低于低剂量组
和空白组(P < 0. 05);大剂量组 MAO 活性显著高于
空白组(P < 0. 05)且极显著低于中、高剂量组(P <
0. 01)。低、中、高剂量组 GSH - Px活性极显著高于空
白组(P < 0. 01),且高剂量组极显著高于中剂量组
(P < 0. 01),中剂量组极显著高于低剂量组(P <
0. 01);大剂量组 GSH - Px酶活性极显著低于其他三
个剂量组(P < 0. 01)。低、中、高剂量组 CAT 活性极
显著高于空白组(P < 0. 01),且高剂量组极显著高于
中剂量组(P < 0. 01),中剂量组极显著高于低剂量组
(P < 0. 01);大剂量组 CAT 活性显著低于空白组和
其他三个剂量组(P < 0. 01)。
3. 3 心脏抗氧化能力
心脏 SOD 活性、MDA 含量、T - AOC 活性、MAO
活性、GSH - Px 活性、CAT 活性统计结果见表 3 和
图 3。
表 3 心脏相关指标统计结果(x ± s,n = 10)
Table 3 Statistical results of the relative indexes of heart(x ± s,n = 10)
组别
SOD活性
/(U·mgprot - 1)
MDA含量
/(nmol·mgprot - 1)
T - AOC活性
/(U·mgprot - 1)
MAO活性
/(U·mgprot - 1)
GSH - Px活性
/(U·mgprot - 1)
CAT活性
/(U·mgprot - 1)
空白组 134. 33aAB ± 11. 05 10. 71aA ± 0. 72 0. 42aA ± 0. 11 2. 13aAC ± 0. 77 49. 31acAB ± 10. 72 13. 00aA ± 1. 29
低剂量组 144. 48bABC ± 11. 21 10. 19abAB ± 0. 76 0. 45aA ± 0. 18 1. 69abAB ± 0. 69 54. 12abcAB ± 11. 52 14. 37bB ± 1. 04
中剂量组 147. 82bBC ± 10. 76 9. 68bB ± 0. 79 0. 51aAB ± 0. 17 1. 44abAB ± 0. 75 57. 65abAB ± 10. 04 14. 92bBC ± 1. 00
高剂量组 151. 25bC ± 9. 99 9. 53bB ± 0. 59 0. 71bB ± 0. 21 0. 99bB ± 0. 67 61. 56bA ± 9. 85 16. 16cC ± 1. 35
大剂量组 131. 20aA ± 10. 89 11. 68cC ± 0. 79 0. 40aA ± 0. 18 2. 81cC ± 0. 83 47. 22cB ± 10. 70 12. 48aA ± 1. 37
注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著(P > 0. 05),小写字母不同表示差异显著(0. 01 < P < 0. 05) ,大写字母不同表示差异极显著(P <
0. 01)。
由表 3、图 3 可以看出:低、中剂量组 SOD活性显 著高于空白组(P < 0. 05);高剂量组 SOD 活性极显
62
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 11 2015
2015 年 11 月(上)
注:图中纵坐标数据单位除 MDA为 nmol·mgprot - 1外,
其余均为 U·mgprot - 1。
图 3 心脏相关指标柱状图
Fig. 3 Histogram of the relative indexes of heart
著高于空白组(P < 0. 01);大剂量组 SOD 活性显著
低于低剂量组(P < 0. 05),极显著低于高、中剂量组
(P < 0. 01)。高、中剂量组 MDA 含量极显著低于空
白组(P < 0. 01);大剂量组 MDA 含量极显著高于空
白组和其他三个药物组(P < 0. 01)。随着剂量增加
高剂量组 T - AOC 活性极显著高于空白组(P <
0. 01),剂量再增加的大剂量组则表现出极显著的抑
制作用。高剂量组 MAO 活性极显著低于空白组
(P < 0. 01);大剂量组 MAO 活性显著高于空白组
(P < 0. 05),极显著高于其他三个药物组(P <
0. 01)。低、中、高剂量组 GSH - Px活性尤其是高剂量
组显著高于空白组(P < 0. 05);大剂量组 GSH - Px
活性极显著低于高剂量组(P < 0. 01)。低、中、高剂
量组 CAT活性极显著高于空白组(P < 0. 01),高剂
量组 CAT活性极显著高于低剂量组(P < 0. 01),显
著高于中剂量组(P < 0. 05);大剂量组 CAT 活性极
显著低于低、中、高剂量组(P < 0. 01)。
4 讨论
衰老是生命发展的必然规律。中医学是世界最
早提出养生理念的医学。《黄帝内经》记载:“上古之
人,其知道者,法于阴阳,和以术数,食饮有节,起居有
常,不妄作劳,故能形与神俱,而尽终其天年,度百岁
乃去”,其所阐述的正是人类逐渐衰老的一个过程。
同时《黄帝内经》也明确指出:如果人类能够懂得养
生之道,是完全可以减慢生命衰老的进程的。中医学
认为机体衰老的机理很复杂,除了与体质因素有关
外,气、血、精、津液的消耗至五脏虚损、有害物质的蓄
积是衰老的主要机理。氧化自由基学说是目前现代
医学比较公认的衰老机制学说之一[2 - 3]。机体新陈
代谢产生大量的氧自由基;生理情况下机体存在清理
系统,将自由基控制在正常范围之内,生理平衡失调
导致自由基过剩,引起细胞膜上不饱和脂肪酸产生脂
质过氧化反应,及核酸和蛋白质分子交联,DNA 基因
突变或复制异常,生物酶活性下降,最终导致细胞功
能严重受损,引起死亡和衰老现象。机体抗氧化系统
是机体延缓衰老的机制之一[4 - 9]。机体抗氧化系统
是由一系列抗氧酶和维生素 A、维生素 E、维生素 C
等抗氧化物质组成。SOD 是唯一能够催化超氧阴离
子歧化的生物催化剂;CAT 是专一催化细胞内过氧
化氢分解防止膜脂质过氧化;GSH - Px 主要清除脂
类过氧化并减轻有机过氧化物对机体的损伤;机体清
除自由基的防御体系除了包括 SOD、GSH - Px、CAT
等抗氧化酶,还包括维生素 A、维生素 E、维生素 C 等
抗氧化物质,抗氧化酶与抗氧化物质的抗氧化能力即
为生物体的 T - AOC;MDA 是自由基与脂质生物膜
发生脂质过氧化反应产生的过氧化物,其进一步分解
产生的大量醛、醇和烃类产物对机体具有很强的生物
毒性,在一定程度上反映机体衰老的进程。因此,减
缓生命衰老进程,主要方法之一就是提高体内抗氧化
酶的活性,如中药淫羊藿、熟地等通过有效地清除机
体过剩的自由基,提高老龄动物 SOD、GSH - Px、CAT
的活性,减少肝脏过氧化脂质和心脏、肝脏等组织的
脂褐素的形成从而延缓机体衰老。徐雅琴等[10]通过
测定对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基
(O2
-·)及 DPPH 自由基的清除能力来研究黑穗醋栗
总黄酮的抗氧化活性;戚世媛等[11]通过检测铜、锌超
氧化物歧化酶(Cu - Zn - SOD)、锰超氧化物歧化酶
(Mn - SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - Px)活性
及还原性谷胱甘肽(GSH)含量来测定女贞子提取物
的作用;王瑞雪等[12]即采用 SOD、MDA、GSH - Px、
T - AOC 4 个代表性抗氧化指标来测试复方中药的
抗氧化功能。
随着医学和药学研究的不断发展,中药“毒性”
越来越受到人们的重视,其显著特点之一就是强调中
药“毒 -效 -证”之间的关联关系[13 - 14]。药物与毒
物存在剂量上的关系尤其是治疗剂量与中毒剂量比
较接近的药物。在生理情况下机体对药物具有一定
的耐受性,但超出其限制用量常常是引起中毒的主要
原因。本研究在预试验的基础上,结合民间习俗,探
讨藏药绿萝花抗衰老作用的量效关系,以正常大鼠为
研究对象,将其分为空白组和低、中、高剂量绿萝花组
以及高浓度的大剂量绿萝花组,以 SOD 活性、MDA
含量、T - AOC活性、MAO活性、GSH - Px 活性、CAT
活性为检测指标,结果表明,连续服用绿萝花口服液
(以生药量计算,1. 0 ~ 4. 0 g /d)28 d 后,能引起大
脑、肝脏和心脏 SOD、T - AOC、GSH - Px、CAT活性上
升,并具有随着剂量加大抗氧化酶活性增强的特点。
值得注意的是,MDA是脂质过氧化形成的终产物,具
有很强的生物毒性,动物进入老龄化阶段,其极易与
磷脂蛋白质等发生反应形成老年色素即脂褐素,而
MAO催化生物体产生胺,再氧化脱氨产生过氧化氢,
随着机体的生长 MAO 的活性增强[15 - 16]。本研究表
明,在连续服用绿萝花口服液(1. 0 ~ 4. 0 g /d)28 d
72《黑龙江畜牧兽医》科技版
后,MDA含量、MAO 活性呈下降趋势,表明绿萝花在
一定剂量范围内对大脑、肝脏和心脏的抗氧能力具有
很强的增强作用并具有量效关系。当剂量增加到
10. 0 g /d后则引起大脑、肝脏和心脏 SOD、T - AOC、
GSH - Px、CAT活性下降,MDA 含量和 MAO 活性上
升,说明大剂量绿萝花具有降低大脑、肝脏和心脏的
抗氧化能力,表现出一定的毒性作用。本试验结果表
明:以生药量计算,连续口服绿萝花(1. 0 ~ 4. 0 g /d)
28 d后,具有增强机体抗氧化能力的作用并提示可
能具有延缓机体衰老的作用;连续口服绿萝花
(10. 0 g /d)28 d 具有一定毒性作用。本结果为藏药
绿萝花的临床用药提供了新的参考依据。
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Heilongjiang Animal Science
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