全 文 ：第 41卷 第 5期
2016年 10月
昆明理工大学学报(自然科学版)
Journal of Kunming University of Science and Technology (Natural Science Edition)
Vol． 41 No. 5
Oct． 2016
收稿日期:2015 － 12 － 18．基金项目:国家科技支撑计划项目(2014BAI01B01)．
作者简介:罗丽琳(1976 －)，女，硕士研究生，主治医师． 主要研究方向:肝脏病理组织学． E －mail:lllkmyn@163. com
通信作者:夏雪山(1971 －)，男，博士，教授． 主要研究方向:分子流行病学． E －mail:oliverxia2000@ aliyun． com
doi:10． 16112 / j． cnki． 53 － 1223 /n． 2016． 05． 014
勃氏甜龙竹水对高血脂大鼠肝脏的病理学影响
罗丽琳1，2，3，徐永敏3，钟禄彪3，王晚璞1，2，陈天星1，2，杨 龙1，2，夏雪山3
(1．云南省第一人民医院，云南 昆明 650032;2. 昆明理工大学 附属医院，云南 昆明 650500
3．昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明 650500)
摘要:为从肝脏的病理组织学改变的角度研究甜龙竹水对高血脂大鼠肝脏病理变化的影响，用
高脂饲料饲喂清洁级雄性 SD大鼠，建立高血脂大鼠模型，分别在建模过程中和饲喂 8 周成功建
模后，饲喂甜龙竹水和立普妥，预防和治疗高血脂的发生，并设立空白对照组．取各组大鼠肝脏，
制作冰冻切片及石蜡切片，进行油红 O、HE和 Masson染色，光镜下检查肝脏的脂肪变性分度、炎
症分级、纤维化分期．结果显示:竹水预防高血脂组，比建模成功后饲喂竹水治疗组的肝脏脂肪变
性程度明显减轻，表明甜龙竹水对高血脂相关肝脏病变的发生有预防作用;同时，竹水治疗组比
对照模型组的肝脏病变更轻，表明甜龙竹水对高血脂肝脏病变发生后有一定的治疗作用．本研究
发现为甜龙竹水作为保健功能食品的开发提供了科学依据．
关键词:非酒精性脂肪性肝病;甜龙竹水;大鼠;肝脏;病理组织学
中图分类号:Ｒ256． 4 文献标志码:A 文章编号:1007 － 855X(2016)05 － 0085 － 07
Pathological Effect of Dendrocalamus Brandisii Juice on Liver
Fatty Pathological Changes of Hyperlipemia Ｒat
LUO Lilin1，2，3，XU Yongmin3，ZHONG Lubiao3，WANG Wanpu1，2，
CHEN Tianxing1，2，YANG Long1，2，XIA Xueshan3
(1． First People’s Hospital of Yunnan Province，Kunming 650032;2． Affiliated Hospital of Kunming University of Science
and Technology，Kunming 650032，China;3． Faculty of Life Science and Technology，Kunming University of
Science and Technology，Kunming 650500，China)
Abstract:To investigate the prevention and treatment effects of dendrocalamus brandisii juice on liver fatty pathologi-
cal changes of the hyperlipemia rats，high fat diet is used to feed the Sprague －Dawley (SD)male rats． During the
feeding or after the model establishing，dendrocalamus brandisii juice and lipitor are fed to determine their prevention
or treatment effect on liver fatty pathological changes． The blank control or un － feeding control group is also set up．
The animal model of fatty liver is successfully established by pathological examination after 8 weeks． At 8 weeks of
feeding treatment after model establishment，the liver sample all rats are collected，and then conducted to make the
frozen section and the paraffin section． Subsequently，the oil red O staining，HE and Masson staining are carried out;
the fatty degeneration，inflammatory degree and staging of liver fibrosis are further observed using optical microscope．
It is shown through the results that an obviously pathological relieve effect of juice is observed in juice preventive
group in comparison with that of model group． The same relief effect is also identified in juice treatment group al-
though with milder action． These findings suggest that dendrocalamus brandisii have preventive and some treatment
effects on liver fatty pathological changes of the hyperlipemia rat． This investigation may provide a necessary scientific
basis for the development of dendrocalamus brandisii juice as health protective and functional food．
Key words:nonalcoholic fatty liver disease;dendrocalamus brandisii juice;rat;liver tissue;pathological histology
0 引 言
近年来，随着人民生活水平的提高，高脂食物的过量摄入以及缺乏运动等原因，导致我国高脂血症发
病率逐年上升，而高脂血症可导致肝脏发生非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)． NAFLD 是以脂肪在肝脏内沉
积超过肝重量 5%、弥漫性肝细胞脂肪变性为主要特征，除酒精和其他明确的损肝因素以外所导致的一种
临床病理综合症，是现在全球最常见的肝脏疾病之一［1 － 2］． NAFLD所导致的肝硬化、肝癌发病率和死亡率
明显高于临床预想，约 30%患者可发生肝纤维化、2% ～ 10%患者可发展为肝硬化［3 － 4］． 儿童的发病率也
倍受重视，国内肥胖儿童和青少年 NAFLD检出率高达 23. 3% ～59. 6%［5］．目前临床采用降血脂药治疗高
血脂性 NAFLD，但是使用的胆固醇吸收抑制剂、树脂类、他汀类、烟酸类及贝特类等每类降脂药都有不同
的胃肠道反应、皮疹、肝肾损伤等副作用，使其在临床的应用受到一定限制．天然产物及其相关药物以其对
疾病的治疗有着多靶点、多环节、毒副作用小、疗效持久及价廉等优势而成为研究关注的热点．
勃氏甜龙竹在云南南部自东至西广泛栽培，缅甸、老挝、越南、泰国、印度均有分布，属禾本科竹亚科牡竹
属大型丛生竹类，其笋鲜食甘甜，是我国所有笋用竹中谷氨酸和糖含量最高的竹种．勃氏甜龙竹白天经其发
达的根系及导管将水份输送到顶部，夜间又将水分回流并储于竹腔内形成竹水．目前竹水主要用于制成竹汁
药酒、竹汁饮料等．前期课题研究发现，勃氏甜龙竹水能够使高血脂大鼠的总胆固醇和低密度脂蛋白降低，并
使高密度脂蛋白升高，提高大鼠肝脏 LXＲα mＲNA和ABCA1 mＲNA的表达量，能够在一定程度上降低血脂并
预防高脂血症的发生［6］．但勃氏甜龙竹水对高血脂肝脏病变有无防治作用尚未进行深入研究．
本文通过建立大鼠的高血脂模型，研究勃氏甜龙竹水对高血脂性 NAFLD的肝脏脂肪变性分度、炎症
分级、纤维化分期等病理改变的影响，在前期发现竹水对大鼠降血脂作用的基础上，进一步研究其对高血
脂肝脏病变的防治作用，从而为甜龙竹水作为保健功能食品的开发提供科学依据．
1 实验材料
1. 1 实验动物
选取 42 只雄性清洁级 SD大鼠，体重为 160 ± 15 g，从昆明医科大学实验动物中心购入(实验动物生产
许可证号为 SCXK(滇)2005 － 0008，使用许可证号为 SYXK(滇)2005 － 0004)．
1. 2 饲料
昆明医科大学实验动物中心提供基础饲料;高脂饲料的主要成分为 81. 3 %基础饲料、10 %猪油、5 %
白糖、3 %胆固醇、0. 5 %胆酸钠以及 0. 2 %丙基硫氧嘧啶．
1. 3 勃氏甜龙竹水
云南思茅勃氏甜龙竹开发公司提供本实验用勃氏甜龙竹水，选取普洱郊区的勃氏甜龙竹，在竹茎的下
部凿孔，收集流出的竹水，静置后去除沉淀，留取上清液，用真空保鲜机封装上清液，长期保存于 － 20 ℃，
待用时将其暂存于 4 ℃，融化后使用．
1. 4 药物
立普妥(10 mg /片，Pfizer Ireland生产，生产批号:H20051407)．
1. 5 仪器设备
CM1950 冰冻切片机、PELOＲIS组织脱水机、ＲM2245 转轮切片机、DM750 光学显微镜(LEICA，德国)，
全自动生化分析仪(雅培 Ci1620)，ABM －6L型生物组织石蜡包埋机(湖北安立信医疗实业公司)，Ver3. 0
医学影像图文分析系统(深圳高通影像技术有限公司)．
2 实验方法
2. 1 勃氏甜龙竹水成分分析
使用冷冻干燥机将勃氏甜龙竹水制成冻干物后，在 15 mL离心管中加入冻干物 200 mg，再加入分析纯
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甲醇 2 mL，震荡 2 min，超声萃取 5 min，待离心分层后，将上清液浓缩至 200 μL，由云南省分析测试研究中
心检测竹水成分．
2. 2 建立高血脂大鼠模型
42 只大鼠以基础饲料适应性喂养 2 周后，随机分为空白对照组 7 只、模型组 21 只、竹水预防组 7 只、
立普妥预防组 7 只，后三组在给予饲料前，腹腔注射维生素 D3(VD3)注射液 60 万 IU /kg，对照组注射同体
积(1 mL)生理盐水，每周一次，连续注射 2 周．立普妥预防组予每日 3 mg /kg /d剂量灌喂立普妥，其余各组
以同体积自来水灌喂．自建模开始起，每 4 周采集静脉血一次．将各组大鼠禁食 12 h 后，尾静脉采血，检测
血脂指标，至第 8 周各项指标达到高脂血症诊断标准，高血脂大鼠模型造模成功后，随机抽取空白对照组
1 只和模型组 3 只杀检，病检显示模型组肝脏产生 NAFLD病变．建模期大鼠分组及处理详见表 1．
表 1 建模期分组及处理
Tab. 1 Grouping and treatment of the rats of modeling stage
建模期分组 数量 /只 前 2 周 饲料 给药
空白对照组 7 腹腔注射生理盐水 普通饲料 自来水
模型组 21 腹腔注射 VD3 高脂饲料 自来水
竹水预防组 7 腹腔注射 VD3 高脂饲料 甜龙竹水
立普妥预防组 7 腹腔注射 VD3 高脂饲料 自来水 +立普妥
表 2 建模后分组及处理
Tab. 2 Grouping and treatment of the rats of after modeling
建模后分组 数量 /只 饲料 给药
空白对照组 6 普通饲料 自来水
模型组 6 高脂饲料 自来水
竹水治疗组 6 高脂饲料 甜龙竹水
立普妥治疗组 6 高脂饲料 自来水 +立普妥
竹水预防组 6 高脂饲料 甜龙竹水
立普妥预防组 6 高脂饲料 自来水 +立普妥
建模成功后，将模型组剩余大鼠分为 3 组:
模型组 6 只、竹水治疗组 6 只、立普妥治疗组 6
只．原竹水预防组、立普妥预防组各去除 1 只较
瘦弱的大鼠，对照组不变．立普妥治疗组和立普
妥预防组予立普妥 3 mg /kg /d 灌喂，其余组灌喂
同体积自来水． 建模后具体分组及处理详见表
2．建模后连续饲喂及给药 8 周．
2. 3 肝脏病理学检查
巨检观察肝脏大小、颜色、包膜紧张度及质
地．各组均于肝右叶最大横切面取材四块，两块立即冰冻切片油红 O 染色;两块中性福尔马林固定，乙醇
脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE 染色． 油红 O 切片行光镜下检查脂滴占肝组织总面积的百分比．
HE切片光镜下检察肝细胞变性、炎症坏死、纤维化程度．判断标准如下［1］:(1)脂肪变性分度． F0:＜ 5%无
明显肝脂变;F1:5% ～30%肝细胞脂变;F2:31% ～ 50%轻度脂肪肝;F3:51% ～ 75%中度脂肪肝;F4:＞
75%重度脂肪肝．(2)炎症程度分级． G0:无炎症;G1:腺泡 3 带少数气球样变，腺泡内散在个别点灶状坏
死;G2:腺泡 3 带呈明显气球样变，腺泡内点、灶状坏死增多，汇管区有轻至中度炎症;G3:腺泡 3 带呈广泛
气球样变，腺泡内点、灶状坏死明显，汇管区有轻至中度炎症伴 /或汇管区周围炎．(3)纤维化分期． S0:无
纤维化;S1:腺泡 3 带呈局灶性或广泛的窦周 /细胞周纤维化;S2:纤维化扩展至汇管区，局灶或广泛的汇管
区呈星芒状纤维化;S3:纤维化扩展至汇管区周围，局灶或广泛桥接纤维化;S4:肝硬化．
2. 4 统计分析
用 SPSS 17. 0 统计软件进行数据的比较分析．采用平均值 ±标准差(X ± S)表示实验数据，多组之间
比较平均值采用单因素方差分析(one － way ANOVA)，两两相比较选用最小显著差异法(LSD)．
3 实验结果
3. 1 勃氏甜龙竹水的化学成分
分析检测结果表明:竹水含总糖 25. 3%，总氨基酸 8. 114%，总酚 0. 35%，总黄酮 0. 085%，蛋白质
78第 5 期 罗丽琳，徐永敏，钟禄彪，等:勃氏甜龙竹水对高血脂大鼠肝脏的病理学影响
11. 4% ．含 16种氨基酸，其中异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸及赖氨酸为必需氨基酸．
3. 2 高血脂模型的建立
如表 3所示，高脂饲料饲喂大鼠 4周时，模型组较对照组总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白(LDL － C)极显
著升高(P ＜0. 01)，但高密度脂蛋白(HDL － C)差异不显著． 8周时，模型组较对照组的 TC及 LDL － C有极显
著增高(P ＜0. 01)，且 HDL － C差异显著(P ＜0. 05)．模型组 TC、LDL － C极显著增高，TC ＞5. 72 mmol /L［7 － 8］，
提示大鼠高血脂模型建模成功．建模后即杀检模型组 3 只，肝脏病检示肝脂肪变性面积均大于 30%，并伴明
显炎症、坏死及纤维组织增生，呈 NAFLD病理改变．
表 3 建模期大鼠各项血脂指标检测值
Tab. 3 Blood lipid index of the rats at modeling stages
组别 数量 /只
TC /(mmol·L －1) LDL － C /(mmol·L －1) HDL － C /(mmol·L －1)
4 周 8 周 4 周 8 周 4 周 8 周
对照组 7 1． 18 ± 0． 05 1． 22 ± 0． 12 0． 13 ± 0． 01 0． 09 ± 0． 01 0． 59 ± 0． 07 0． 61 ± 0． 05
模型组 21 4． 80 ± 1． 53 7． 02 ± 2． 27 3． 55 ± 0． 21 3． 06 ± 1． 23 0． 91 ± 0． 01 1． 08 ± 0． 29
3. 3 竹水对肝脏大体改变的防治效果
肝脏巨检示:空白对照组肝色鲜红，边缘锐利，质地柔韧;模型组肝色黄腻，边缘钝厚，被膜紧张伴局
灶被膜下坏死，质软;竹水预防组肝色暗红偏黄，边缘稍钝，质软;立普妥预防组肝色暗红，边缘锐利，质柔
韧;竹水治疗组肝脏色黄，边缘钝厚，质软;立普妥治疗组肝色偏黄，边缘稍钝，质软．提示竹水预防组肝脏
外观及质地较模型组更正常．竹水治疗组与模型组相似，但无被膜下坏死，较模型组改变轻．
3. 4 竹水对肝脂肪变性的防治效果
肝组织经冰冻、切片、油红 O染色．如图 1 所示:空白对照组呈正常肝仅少许肝细胞含细点状粉染脂
质表现;模型组呈弥漫性滴状深橘红色，坏死区小片状深橘红色，提示广泛肝细胞内含大脂滴且坏死处脂
滴融合;竹水预防组呈灶性浅橘、粉色，提示含脂滴的肝细胞数量及脂滴大小较模型组明显减少、减小;立
普妥预防组偶见小灶细点状粉色，提示仅少许细胞含细小脂滴．竹水治疗组呈弥漫点状、小滴状橘色，较模
型组含脂滴细胞数有所减少，脂滴减小;立普妥治疗组呈巢片性点、滴状橘色，脂滴较模型组减少、减小．各
组肝脏脂肪变性分度详见表 4．
表 4 各组大鼠肝脏脂肪变性分度、炎症分级与纤维化分期
Tab. 4 Fatty degeneration，inflammatory degree and fibrosis staging of the livers of the rats
分组 数量 /只
脂肪变性分度 炎症分级 纤维化分期
F0 F1 F2 F3 F4 G0 G1 G2 G3 S0 S1 S2 S3 S4
空白对照组 6 6 0 0 0 0 6 0 0 0 6 0 0 0 0
模型组 6 0 0 0 1 5 0 0 1 5 0 0 2 4 0
竹水治疗组 6 0 0 0 5 1 0 0 3 3 0 0 3 3 0
立普妥治疗组 6 0 0 1 5 0 0 1 4 1 0 1 5 0 0
竹水预防组 6 0 0 6 0 0 0 4 2 0 5 1 0 0 0
立普妥预防组 6 0 6 0 0 0 6 0 0 0 6 0 0 0 0
3. 5 竹水对肝脏炎症的防治效果
肝脏经甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE 染色． 如图 2 所示:空白对照组肝板排列规则，无炎症坏死;模
型组肝细胞排列紊乱，胞质内见数量不等、大小不一的脂变空泡，以大空泡为主，散在较多点灶状坏死，并
见融合坏死及桥接坏死，汇管区较多淋巴细胞浸润;竹水预防组小片状肝细胞含脂变空泡，空泡小，偶见点
状坏死，个别汇管区少许淋巴细胞浸润;立普妥预防组偶见少许肝细胞含小脂泡，无炎症坏死．竹水治疗组
广泛肝细胞含脂变空泡，但较模型组减轻，以大、小脂泡混合为主，少量点灶状坏死，汇管区中等量淋巴细
胞浸润;立普妥治疗组含脂肪空泡肝细胞较竹水治疗组减少，脂泡小，点灶状坏死少，汇管区少量淋巴细胞
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浸润．各组肝脏炎症分级详见表 4．
3. 6 竹水对肝纤维化的防治效果
如图 3 所示，空白对照组无纤维化．模型组见蓝染的纤维组织显著增生致汇管区扩大及桥接纤维化形
成，灶性窦周及坏死区纤维化，部分小叶结构紊乱．竹水预防组偶见点状坏死处少许纤维增生．立普妥预防
组无纤维化．竹水治疗组汇管区及坏死周纤维化较模型组减少，局灶伴桥接纤维化．立普妥治疗组部分汇
管区及局部窦周纤维化，无桥接纤维化．各组纤维化分期详见表 4．
98第 5 期 罗丽琳，徐永敏，钟禄彪，等:勃氏甜龙竹水对高血脂大鼠肝脏的病理学影响
各组大鼠肝组织经油红 O、HE、Masson染色检查肝脏脂肪变性、炎症和纤维化程度，结合表 4 各组病
变程度评分，结果显示竹水预防组比建模成功后饲喂竹水的竹水治疗组的各项病变程度明显减轻，表明甜
龙竹水对高血脂肝脏病变的发生有预防作用;竹水治疗组较模型组的各项病变有所减轻，表明甜龙竹水对
高血脂肝脏病变发生后有一定治疗作用．
4 讨 论
高血脂 NAFLD的主要机制是胰岛素抵抗引起肝内脂肪过度聚积和肝细胞对损害因子的敏感性增加．氧
应激诱导脂质过氧化物和细胞因子介导损伤、肠道细菌产生内毒素、肝脏铁负荷超载、遗传易感性、包含多种
激素、酶类、TNF － a及 IL －6等炎症免疫相关细胞因子的脂肪因子作用失衡等因素亦可导致肝脏病变，乃至
发生肝纤维化［1］．竹水既可入药，又能制成天然保健饮料，提取物中含有铜、铁、锰、锌、镁、钙等 6 种无机元
素［9］． Koide等［10］研究显示，竹提取物对肝生物转化酶及其在体内的交互作用有显著影响，提示竹天然产物
对治疗肥胖和糖尿病有明显的药用活性． Higa等［11］研究证明竹提取物能够抑制 IL －6，明显减少因肥胖而导
致代谢细胞中 IL －6过剩引起的毒性作用．勃氏甜龙竹水中还含有总糖、总蛋白、总黄酮、总酚以及 16种氨基
酸(其中 7种为人体必需氨基酸)．多糖可与血清脂类物质结合并促进其排出;黄酮可调节血液中脂蛋白，抑
制血小板聚集，调节酶类;总糖、总黄酮、总酚均可增加抗氧化酶活性，增进脂质的代谢;必需氨基酸与总蛋白
可以维持人体氨基酸的代谢和平衡，并调节生理功能．故勃氏甜龙竹水可通过促进体内及肝内脂质代谢、调
节酶类、抑制 IL －6、提高抗氧化能力等达到预防减轻肝脏的炎症损伤，延缓纤维化．
本实验通过饲喂高脂饲料结合维生素 D3 注射，定期检测模型组的血清 TC、LDL － C、HDL － C含量，待
值均明显高于空白对照组(P ＜ 0. 05)，高脂血症建模成功后再行肝脏病检明确形成脂肪性肝病，此方法建
立的高血脂肝脏病变 NAFLD有效．因血脂检测的辅助，该方法减少了建立 NAFLD 过程中杀检大鼠的数
量，并提示造模时间为 8 周即可很好地引发 NAFLD，与周永刚等［12］文献报道相符．
根据肝脏病理改变获得的各组大鼠肝脂肪变性分度、炎症分级与纤维化分期统计计数(见表 4)提示:
(1)肝脂变分度:模型组主要为重度脂肪肝，竹水治疗组为中度脂肪肝，个别重度脂肪肝;立普妥治疗组为
中度脂肪肝，个别轻度脂肪肝;竹水预防组均为轻度脂肪肝;立普妥预防组均为肝细胞脂变． (2)肝脏炎
症:模型组以重度炎症 G3 级为主，竹水治疗组呈中重度 G2G3 级炎症反应，立普妥治疗组以中度炎症 G2
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级为主，竹水预防组以轻度炎症 G1 级为主，立普妥预防组无炎症均为 G0 级．(3)肝纤维化:模型组广泛桥
接纤维化致小叶结构紊乱，以 S3 期为主．竹水治疗组部分汇管区纤维化为 S2 期，部分小叶结构紊乱为 S3
期．立普妥治疗组以 S2 期为主．竹水预防组大部分无纤维化为 S0 期，个别 S1 期．立普妥预防组无纤维化
均为 S0 期．结果表明:开始吃高脂饲料时即饮用竹水的竹水预防组肝脂肪变性分度、炎症分级、纤维化分
期均较模型组明显减轻，提示竹水对 NAFLD有较好的预防作用;建模成功后才采取干预措施的竹水治疗
组虽然肝脂变、炎症坏死及纤维化较模型组有所减轻，但改变不显著，提示竹水对 NAFLD 有一定疗效，但
效果欠佳．立普妥治疗组较竹水治疗组，立普妥预防组较竹水预防组的肝脂变、炎症、纤维化均明显减轻，
提示甜龙竹水系一种功能型的保健饮料，而非一种强效治疗性药物．
本实验中 HE和油红 O切片均可见越接近中央静脉和肝被膜处，肝细胞脂肪变性越显著，考虑系因该
区域的肝细胞血供欠佳，肝细胞更容易变性所致，并且各组大鼠肝脂变均以大泡性脂肪变性为主．上述两
种脂肪变性的特点与人 NAFLD相符．有研究也证实鼠非酒精性脂肪肝与人类患者的超微结构改变相一
致［13］．因此，本实验结果亦可为竹水对人 NAFLD的防治作用提供参考．
5 结 论
综上所述，大鼠高血脂产生的肝脏 NAFLD病变与人 NAFLD的病理改变相同．勃氏甜龙竹水可以有效
预防并减轻实验大鼠肝脏细胞脂肪变性和肝脏组织炎症、坏死，预防和延迟肝纤维化的发生．
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