全 文 ：乌拉草挥发油的含量测定和抑菌
作用
余克娇 , 陈晓辉 , 毕开顺(沈阳药科大学 , 辽宁 沈阳
110016)
摘要:目的　采用高效毛细管气相色谱法同时测定乌
拉草挥发油中主要成分月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸的
含量 ,并研究其体外抗菌作用 。方法　色谱条件:SE-
30毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.6 μm);程序升温;
进样温度 280℃;检测器温度 280℃;载气:N 2;流量:
40 mL·min-1;FID 检测器;内标物正十六烷 。采用
试管稀释法测定挥发油对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌
和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果　月桂
酸在 0.226 ～ 2.26 g·L-1 ,肉豆蔻酸在 0.332 ～ 3.32
g·L-1 ,棕榈酸在 1.79 ～ 17.90 g·L-1范围内呈良好
的线性关系;平均回收率为(n =9)98.3%, 98.5%和
98.0%(RSD 为 1.4%, 2.7%和 2.2%)。挥发油对
实验菌的 M IC 分别为 0.6 ,1.2和 1.2 g·L-1 。结论
　该法简便 、准确 ,可作为控制乌拉草挥发油质量的
方法 。同时挥发油对上述菌株有较强的抑制作用 。
关键词:乌拉草;高效毛细管气相色谱;最小抑菌浓度
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A
文章编号:1004-2407(2005)05-0204-03
　　乌拉草(Carex meyeriana Kunth)是莎草科
(Cyperaceae)薹草属(Carex)多年生草本植物 ,灰绿
色 ,主要产于黑龙江 、吉林 、内蒙古 、四川等地〔1〕 ,与人
参 、貂皮并称为“东北三宝” 。用乌拉草为主要原料制
成的鞋垫 、床垫 ,具有祛寒除湿 、活络止痛 、抗菌等作
用〔2〕 ,适于足部疾患如脚癣 、脚气等的预防和治疗〔3〕 。
长期使用对风湿 、关节痛有辅助治疗的作用。乌拉草
化学成分主要是挥发油和黄酮类成分 ,挥发油具有较
强的生理活性 ,其中脂肪酸为其主要成分之一 ,具有
抗菌和抗真菌作用〔4〕 。目前 ,有关乌拉草挥发油化学
成分的研究很少报道 ,本文首次对其挥发油中主要成
分脂肪酸类化合物进行分析 ,建立了气相色谱法同时
测定月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸的含量 ,为乌拉草挥
发油的质量控制提供了准确可靠的测定方法。同时
首次考察了该挥发油的抗菌活性。
1　仪器 、试剂与材料
1.1　仪器与试剂　GC-9A型气相色谱仪(日本岛津
公司);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研
究所);正十六烷(色谱纯 ,上海试剂一厂);氯仿(分析
纯 ,天津市博迪化工有限公司)。
1.2　材料　乌拉草采自东北三省 ,经沈阳药科大学
孙启时教授鉴定为 Carex meyeriana Kunth 的全草;
月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸对照品(上海试剂一厂);
试验菌株金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌和白色念珠菌由
北京微生物所菌种中心提供。
2　方法与结果
2.1　乌拉草挥发油的提取　取经粉碎 、过 2号筛的
乌拉草药材约 80 g ,精密称定 ,置 1 000 mL 圆底烧瓶
中 ,加 10倍量蒸馏水 ,浸泡 1 h ,按 2000年版《中国药
典》(一部)附录 Ⅹ D挥发油测定法进行 ,连续蒸馏 9
h 。放冷 ,将提取液以氯仿萃取 3次 ,每次 15 mL ,合
并氯仿液 ,减压除去溶剂 ,加入适量无水硫酸钠脱水 ,
得 26.4 mg 乌拉草挥发油 ,呈淡黄色油状物 ,具有芳
香气味 。
2.2　色谱条件　SE-30石英毛细管柱(30 m ×0.32
mm×0.6 μm),程序升温 ,初始温度 180℃,保持 5
min ,以 6℃·min-1升至 230℃,保持 7 min;进样器温
度2 80℃, 检测器温度28 0℃,载气:N2 ,流量 :4 0
mL·min-1 , FID检测器 ,内标物正十六烷 ,进样 2 μL。
2.3　系统适用性试验 　在上述色谱条件下进样分
析 ,以月桂酸色谱峰计算理论板数 ,其不低于 25 000 ,
与相邻色谱峰的分离度均大于 1.5 ,拖尾因子在 0.95
～ 1.05之间。
2.4　含量测定
2.4.1　内标溶液的制备　取正十六烷适量加氯仿配
成每 1 mL 含 6 mg 的溶液作为内标溶液。
2.4.2　对照品溶液的制备　分别精密称取月桂酸 、
肉豆蔻酸和棕榈酸对照品适量 ,置 5 mL 量瓶中 ,精
密加入内标溶液 0.5 mL ,用氯仿稀释至刻度 ,摇匀 ,
配成每 1 mL 含月桂酸 0.7 mg ,肉豆蔻酸 1 mg ,棕榈
酸 5 mg 的混合溶液 ,作为对照品溶液。
2.4.3　供试品溶液的制备　取 2.1项下提取的乌拉
草挥发油 ,以氯仿溶解并定容至 1 mL 量瓶中 ,精密
加入内标溶液 0.1 mL ,摇匀 ,作为供试品溶液 。
2.4.4　测定法　在上述色谱条件下 ,分别吸取对照
品溶液和供试品溶液各 2 μL ,注入气相色谱仪 ,记录
色谱图 ,按内标法计算 ,即得。气相色谱图见图 1。
2.5　标准曲线的制备　精密称取月桂酸 28.2 mg 、
肉豆蔻酸 41.5 mg 和棕榈酸 223.5 mg 置同一 5 mL
量瓶中 ,氯仿溶解并稀释至刻度 ,摇匀。精密量取上
述溶液 0.2 ,0.4 ,0.6 ,1.0和 2.0 mL 分别置 5 mL 量
瓶中 ,精密加入内标溶液 0.5 mL ,氯仿溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 。按上述色谱条件进行分析 ,得线性回归方
程为:月桂酸 Y =0.905 0X-0.010 1(r=0.999 9);肉
豆蔻酸 Y =0.614 2X-0.008 6(r=0.999 3);棕榈酸
204 西北药学杂志　2005 年 10月　第 20 卷　第 5 期
Y =0.362 5X -0.012 6(r=0.999 5)。表明月桂酸在
0.226 ～ 2.26 g·L-1 , 肉豆蔻酸在 0.332 ～ 3.32 g·L-1 ,
棕榈酸在 1.79 ～ 17.90 g·L-1范围内呈良好的线性关
系(n=5)。
图 1　GC色谱图
A-对照品;B-供试品;1-月桂酸;2-正十六烷(内标);
3-肉豆蔻酸;4-棕榈酸
2.6　校正因子的测定　照 2.5 项下操作 ,重复测定
3次 ,计算校正因子 ,月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸的平
均校正因子为 1.816 , 2.652和 4.468 。
2.7　仪器精密度　取同一供试品溶液 ,在上述色谱
条件下测定含量 ,重复进样 6次 ,计算得月桂酸 、肉豆
蔻酸和棕榈酸 RSD 为 4.0%, 2.7%和 2.1%。
2.8　重复性试验　取同一批乌拉草药材 6份 ,分别
精密称定 ,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测
定含量 ,计算得月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸 RSD 为
1.5%,2.7%和 2.9%。
2.9　稳定性试验　将供试品溶液在室温下贮存 ,分别
于0 ,2 ,4 ,6 ,8和24 h在上述色谱条件下测定含量 ,计
算得月桂酸 、肉豆蔻酸和棕榈酸 RSD 为 1.8%,3.2%
和1.7%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2.10　加样回收率试验　精密称取乌拉草药材粉末
共9 份 ,分别精密加入高 、中 、低浓度的对照品各 3
份 ,按 2.4项下方法和上述色谱条件测定 ,得月桂酸 、
肉豆蔻酸和棕榈酸的平均回收率为 98.3%, 98.5%
和 98.0%, RSD 为 1.4%,2.7%和 2.2%。
2.11　样品含量测定　取不同产地乌拉草药材 ,按
2.4 项下方法操作 ,在上述色谱条件下测定 ,计算含
量 ,结果见表 1。
表 1　乌拉草挥发油含量测定结果(n=2 , mg·g-1)
产地 月桂酸 肉豆蔻酸 棕榈酸
吉林长白山 0.009 0.012 0.072
黑龙江 0.009 0.011 0.065
丹东 0.009 0.014 0.074
3　体外抗菌试验
以常见的食品污染菌金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌
和深部感染真菌白色念珠菌为菌株 ,以观察挥发油对
消化道致病菌和脚癣致病菌的抑菌作用 。
3.1　制备种菌液　取金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 2
个菌株 ,分别在肉汤琼脂斜面 37℃下培养约 24 h后 ,
经振荡 、搅匀 ,作为种菌液 。另取白色念珠菌 1 个菌
株 ,用 0.5 mL 沙保液体培养基溶解冻干菌体 ,使成
悬浮状 ,吸取菌体悬浮液 ,移植于沙保琼脂培养基斜
面上 ,置 37℃保温箱中活化 48 h ,用无菌水洗脱菌
落 ,制成菌悬液备用。
3.2　中药原液的制备　取水蒸汽蒸馏提取的乌拉
草挥发油 ,用 1%羧甲基纤维素钠溶液溶解 ,得中药
原液。
3.3　方法　采用试管稀释法〔5〕 。
(1)稀释药液:取中药原液分别以普通肉汤倍比
稀释成 1∶2 , 1∶4 ,1∶8 , 1∶16 ,1∶32 和 1∶64 各 6 个浓
度 ,即含中药浓度分别为10 , 5 , 2.5 ,1.2 ,0.6和0.3
g·L-1 。每个浓度设 3 个平行管 ,并分别设不含中药
的肉汤培养基为对照管。白色念珠菌的操作用沙保
液体培养基稀释 。流通蒸汽灭菌 30 min ,冷却备用。
(2)加入菌液:每支试管内分别加入备用的实验
菌 50μL ,置 37℃保温箱培养 24 h 。白色念珠菌置
28℃保温箱培养 1周 。
(3)结果判断:除白色念珠菌可直接观察外 ,分别
从其余试管中各取一接种环液体点种于营养琼脂平
板 ,24 h 后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测
菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(Minimal inhibi-
tory concentration ,M IC)。
3.4　结果　挥发油对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌和
白色念珠菌均有较强抑菌作用 ,分别被稀释至 1∶32 ,
1∶16和 1∶16仍完全抑菌(即 M IC=0.6 , 1.2和 1.2
g·L-1)(见表 2)。
表 2　挥发油不同稀释度抑菌效果测定
菌株 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - - + +
大肠杆菌 - - - - + + +
白色念珠菌 - - - - + + +
　　注:“ +”为有细菌生长 , “ -”为无细菌生长
4　讨论
本文建立了乌拉草挥发油中月桂酸 、肉豆蔻酸和
棕榈酸的毛细管气相色谱法 ,操作简单 、准确 ,可作为
控制其质量的方法。此外 ,该挥发油对金黄色葡萄球
菌 、大肠杆菌和白色念珠菌有较强的抑制作用 ,为乌
拉草挥发油进一步开发利用提供了实验基础。
参考文献:
〔1〕　深松筠 , 戴伦凯 , 汤彦承.中国植物志[ M] .第 12 卷.北
京:科学出版社 , 2000.103.
205西北药学杂志　2005 年 10 月　第 20 卷　第 5 期
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〔3〕　李雪枫.春天治脚气事半而功倍[ J] .药物与人 , 2003 , 16
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〔4〕　黄文诚.花粉中的脂肪酸及其在蜂群中的作用[ J] .蜜蜂
杂志 , 2002 , 22(1):5-6.
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社 , 1993.261.
(收稿日期:2005-03-31)
薄层-紫外法测定补骨脂酊中补骨
脂素的含量
张红旭 ,郭　辉(江苏省徐州市第三人民医院 , 江苏 徐州
221005)
摘要:目的　建立补骨脂酊中补骨脂素的含量测定方
法。方法　采用薄层法从补骨脂酊中分离补骨脂素 ,
采用紫外法测定补骨脂素含量 。结果　补骨脂素在
0.1 ～ 0.3 μg 范围呈良好线性关系(r=0.999 1),平
均加样回收率为 97.8%, RSD 为 1.6%(n=5)。结
论　本法可用于补骨脂酊的质量控制。
关键词:补骨脂酊;补骨脂素;薄层-紫外法;含量测定
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A
文章编号:1004-2407(2005)05-0206-02
　　补骨脂酊是由豆科植物补骨脂的果实经科学提
取加工而制成的酊剂 ,外用治疗白癜风 、斑秃 ,疗效确
切。制剂中含有多种呋喃香豆素 ,如补骨脂素 、补骨
脂里定 、异补骨脂素 ,并含有查耳酮类成分 、豆甾醇 、
挥发油 、棉子糖 、脂肪油及树脂等。现已证明 ,治疗白
癜风的有效成分是呋喃香豆精类化合物 ,其中以补骨
脂素的光敏性最强 ,有吸收紫外线作用 ,可使动物色
素加深。为有效控制补骨脂酊质量 ,本文建立了其有
效成分补骨脂素的含量测定方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器　UV-2401紫外分光光度仪(日本 岛津);
硅胶G 预制板(青岛海洋化工厂分厂);微量进样器
(上海医用激光仪器厂)。
1.2　试药　补骨脂素对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号 110739-200310);补骨脂酊(本院制剂室
自制);其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　测定波长的选择　精密称取补骨脂素对照品适
量 ,以无水乙醇制成 20.0 g·L -1溶液 ,以无水乙醇为
空白 ,在 200 ～ 400 nm 波长范围内扫描 ,可知补骨脂
素在 246 nm 波长处有最大吸收 ,故以 246 nm 为测
定波长 。
2.2　补骨脂素对照品溶液的制备　精密称取补骨脂
素 ,以无水乙醇制成 20.0 g·L-1溶液 ,即得 。
2.3　标准曲线和线性范围考察　精密吸取对照品溶
液 5 , 8 ,10 ,12 , 15μL于 5 mL 量瓶中 ,加无水乙醇至
刻度 ,摇匀 ,以无水乙醇为空白 ,在波长 246 nm 处测
定吸光度 ,以对照品溶液的吸光度为纵坐标 ,浓度为
横坐标 ,绘制标准曲线 ,并进行回归分析 ,得回归方
程:A=0.206 0C-0.002 89 , r=0.999 1 (n =5)。
结果表明 ,补骨脂素在 0.1 ～ 0.3 μg 范围呈良好线性
关系。
2.4　精密度考察　精密吸取对照品溶液 50 μL 共 5
份 ,照“样品测定”项下方法 ,自“吸取补骨脂素对照品
溶液 50 μL 点于同一硅胶 G 薄层板板上”起 ,测定吸
光度 ,测得 5份对照品溶液的浓度 , RSD =1.6%(n
=5)。
2.5　稳定性考察　同一样品溶液在 24小时内不同
时间照“样品测定”项下方法操作 ,测定 5 次 ,其含量
的 RSD =2.1%(n=5),表明在 24小时内具有良好
的稳定性(样品批号 031001)。
2.6　重复性考察　精密吸取同一批号样品 5份(批
号 031101),分别照“样品测定”项下方法操作 ,测定 ,
其含量的 RSD =1.7%(n=5)。
2.7　加样回收率考察 　精密吸取取供试液(批号
031101 ,现已知含量)10 mL 共 5份 ,每份精密加入补
骨脂素对照液 100 μL ,按“样品测定”项下方法操作 ,
测定 ,结果平均加样回收率为 97.8%, RSD =1.6%
(n=5)。
2.8　样品测定　取本品 10 mL ,置水浴上蒸干 ,残渣
以无水乙醇溶解 、转移于 10 mL 量瓶中并稀释至刻
度 ,摇匀 ,吸取该溶液和补骨脂素对照品溶液各 50
μL 点于同一硅胶 G 薄层板板上 ,以苯-醋酸乙酯(9∶
1)展开 ,取出 ,晾干 ,紫外灯(365 nm)下刮取与补骨
脂素对照品色谱相应位置的蓝色斑点 ,置 10 mL 具
塞试管中 ,加氯仿至刻度 ,强烈振摇 ,使提取完全 ,离
心 10 min(2 000 r·min-1),吸出上清液 ,挥尽氯仿 ,以
5 mL 无水乙醇定容 ,以无水乙醇为空白 ,测定吸光
度 ,由标准曲线计算含量 ,结果见表 1。
表 1　补骨脂酊含量测定结果(n=5)
批号 补骨脂素 (g·L-1) RSD(%)
030701 2.12 1.6
030702 1.93 1.9
030801 2.20 1.8
030802 2.18 1.8
030901 1.84 1.6
206 西北药学杂志　2005 年 10月　第 20 卷　第 5 期