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〔2015-08-10修回〕
(编辑 袁左鸣 /滕欣航)
金丝草提取物对急性肾衰竭大鼠肾组织中载脂蛋白 M的表达及
NF-κB抑制剂的干预作用
李元宁 (青海省红十字医院肾内科，青海 西宁 810000)
〔摘 要〕 目的 金丝草提取物对急性肾衰竭(AＲF)大鼠肾组织中载脂蛋白(Apo)M的表达及核转录因子(NF)-κB抑制剂的干预作用。方法
雄性 Wistar大鼠 76只，7～10周龄，体重(200±30)g，分为模型组 18只、金丝草组 19只、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTF)组 19只及对照组 20只。
以摘除右肾，结扎左肾动脉血流建立 AＲF模型，从造模成功后第 2天开始，金丝草组按 80 mg /kg腹腔注射金丝草水提物;PDTF组腹腔注射 NF-κB抑
制剂 PDTF 100 mg /kg，模型组和对照组均腹腔注射等体积的蒸馏水，1次 /d，连续 8 w。模型组和对照组均以等体积的蒸馏水灌胃，1 次 /d，连续8 w。
观察肾组织病理改变并测定血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量，Western印迹法检测 ApoM、NF-κB蛋白表达水平。结果 治疗后各组 SCr、BUN水平、
ApoM、NF-κB蛋白除模型组的外均明显下降(P＜0. 05) ，与 PDTF组相比金丝草组下降更为明显(P＜0. 05) ，且 ApoM与 NF-κB 的表达符合直线正相
关(r= 0. 838，P＜0. 01)。病理切片显示金丝草组可见极少炎性细胞，肾脏病变比 PDTF组明显减轻。结论 金丝草提取物及 NF-κB 抑制剂能够明显
降低 AＲF大鼠肾组织中 ApoM的表达水平。
〔关键词〕 金丝草提取物;急性肾衰竭;载脂蛋白 M;核转录因子-κB抑制剂
〔中图分类号〕 Ｒ692. 5 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)11-2619-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 11. 023
第一作者:李元宁(1976-) ，男，主治医师，主要从事肾病内科研究。
急性肾衰竭(AＲF)发病率呈上升趋势〔1〕，且死亡率高，目
前主要靠早期血液透析治疗，但给患者造成痛苦且仪器设备昂
贵〔2〕。有研究显示金丝草对 AＲF 确有相应的辅助治疗作
用〔3〕，能够有效降低 AＲF大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含
量，延缓肾脏衰竭病程进展〔4〕，但相关报道尚少。本文通过观
察 AＲF大鼠肾组织中载脂蛋白(Apo)M 的表达及核转录因子
(NF)-κB抑制剂的干预作用来探究金丝草提取物对 AＲF的治
疗作用。
1 资料与方法
1. 1 实验动物 雄性 Wistar 大鼠 80 只，7 ～ 10 周龄，体重
(200±30)g，由北京维通利华实验动物中心提供。
1. 2 仪器及试剂 金丝草水提物、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐
(PDTF) (Sigma公司) ，BUN、SCr血清生化检测试剂盒(生化试
剂公司) ，自动生化分析仪(日立 750 日本) ，ApoM 兔抗人多克
隆抗体(瑞典隆德大学临床化学研究所) ，NF-κB兔抗大鼠多克
隆抗体(Santa Cruz)。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 模型的建立 随机选取 60 只大鼠，用 1%戊巴比妥钠
(3 ml /kg 体重)腹腔注射麻醉，剪毛，消毒后腹部正中切口，分
离双侧肾脏，摘除右肾，暴露左侧肾脏，结扎左上支和中支肾动
脉血流 45 min，灌注 24 h 复制 AＲF 模型大鼠。对照组只切除
右肾，对左肾不做处理，缝合切口。腹腔注射青霉素，连续3 d，
预防感染。
1. 3. 2 分组和用药 60 只造模大鼠因麻醉死亡 1 只，由于
AＲF死亡 3 只，余下 56 只大鼠随机分为模型组 18 只、金丝草
组 19只及 PDTF组 19只。从造模成功后第 2 天开始，金丝草
组按 8 mg /kg腹腔注射金丝草水提物;PDTF 组腹腔注射 NF-
κB PDTF，模型组和对照组均腹腔注射等体积的蒸馏水，1 次 /
d，连续 8 w。
1. 4 检测指标及观察方法
1. 4. 1 SCr、BUN 含量测定 各组大鼠开腹，下腔静脉取血
3 ml，使用自动生化分析仪检测各组大鼠的 SCr、BUN水平。
1. 4. 2 Western印迹法检测 ApoM、NF-κB 蛋白表达 切除左
肾，迅速分离 60 mg 肾皮质，冰上匀浆，抽提胞质蛋白和核蛋
白，BCA法定量，分离胶浓度 12%，浓缩胶浓度 6%，电泳后将蛋
白电转移至 PVDF 膜，Ⅰ抗(ApoM 兔抗人多克隆抗体，浓度
1 ∶10 000、NF-κB兔抗大鼠多克隆抗体，浓度 1 ∶800) ，Ⅱ抗(辣
根过氧化物酶标记的羊抗兔，浓度 1 ∶2 000) ，孵育 1. 5 h 后洗
膜，按照化学增强发光试剂盒说明进行化学发光，最后用凝胶
成像系统自动曝光、扫描。
1. 4. 3 肾组织病理学检查 取各组大鼠肾组织，10%中性甲
·9162·李元宁 金丝草提取物对急性肾衰竭大鼠肾组织中载脂蛋白 M的表达及 NF-κB抑制剂的干预作用 第 11期
醛固定 24 h，脱水、透明、浸蜡、常规石蜡包埋，制备石蜡切片，
苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察肾脏病理改变。
1. 5 统计学方法 采用 SPSS19. 0软件进行 t检验、χ2 检验。
2 结 果
2. 1 模型验证 造模后第 3天开始造模大鼠出现进食量逐渐
减少，精神萎靡不振，眯眼，竖毛拱背，眼睑浮肿，畏寒怕冷，活
动量减少，毛色干枯;第 6 天开始尿量减少，体重明显减轻，出
现个别死亡如生命质量下降。尾部取血 3 ml，离心后检测其
SCr〔(90. 93±12. 45)μmol /L〕、BUN〔(38. 82±9. 81)mmol /L〕含
量与对照组〔(62. 73±11. 32)μmol /L、(7. 43±2. 38)mmol /L〕相
比有明显差异(P＜0. 05) ，证明造模成功。
2. 2 各组大鼠 SCr、BUN水平比较 与对照组相比，AＲF 模型
组大鼠的 SCr、BUN 水平明显升高，治疗后治疗各组 SCr、BUN
水平均下降，与模型组相比差异有统计学意义(P＜0. 05) ，与
PDTF组相比，金丝草组 SCr、BUN 水平下降更为明显(P ＜
0. 05) ，见表 1。
表 1 治疗前后各组大鼠 SCr、BUN水平比较(x±s)
组别 n 时间 SCr(μmol /L) BUN(mmol /L)
金丝草组 19 治疗前 93. 21±11. 36 42. 37±14. 19
治疗后 71. 23±14. 431)2) 15. 13±5. 711)2)
PDTF组 19 治疗前 88. 54±14. 57 36. 18±9. 66
治疗后 78. 91±11. 791) 20. 59±9. 271)
模型组 18 治疗前 92. 74±13. 83 38. 86±12. 32
治疗后 98. 38±10. 72 41. 87±13. 66
对照组 20 治疗前 62. 73±11. 32 7. 43±2. 38
治疗后 61. 78±12. 41 6. 94±1. 98
与模型组相比:1)P＜0. 05，与 PDTF组相比:2)P＜0. 05;下表同
2. 3 各组大鼠 ApoM、NF-κB蛋白表达水平及相关性分析 与
对照组相比，AＲF模型组大鼠的 ApoM、NF-κB蛋白表达明显升
高，治疗后治疗各组 ApoM、NF-κB 蛋白水平均下降，与模型组
相比，差异显著(P＜0. 05) ，与 PDTF 组相比，金丝草组 ApoM、
NF-κB蛋白表达下降更为明显(P＜0. 05) ，见表 2。且 ApoM 与
NF-κB的表达符合直线正相关(r= 0. 838，P＜0. 01)。
表 2 各组大鼠 ApoM、NF-κB蛋白表达水平比较(x±s)
组别 n ApoM NF-κB
金丝草组 19 2. 26±0. 921)2) 40. 42±10. 321)2)
PDTF组 19 2. 98±1. 121) 65. 36±13. 681)
模型组 18 3. 73±0. 93 116. 72±31. 98
对照组 20 2. 08±0. 73 35. 59±9. 77
2. 4 肾组织病理学改变 肾组织学检查可见，对照组肾脏组
织结构正常，模型组镜下见肾小管上皮细胞空泡变性、坏死，管
腔内各种管型，肾间质有炎性细胞浸润，PDTF组有少量炎性细
胞;金丝草组可见极少炎性细胞，肾脏病变比 PDTF 组明显减
轻。见图 1。
图 2 各组大鼠肾组织病理图片
3 讨 论
AＲF是以急性肾小管坏死为特征的临床重危病症，死亡率
极高。中医学中虽无“急性肾功能衰竭”一词，但《黄帝内经》
就有“关格”、“瘾闭”、等近似病证〔5〕。从大量的古代文献中，
可找到类似肾功能衰竭的描述。《素问·宣明五气篇》就有
“膀肤不利为瘾”的记载〔6〕。《素问·奇病论》中的“有病庞然
如有水状，切其脉大紧，身无痛者，形不瘦……，病生在肾，名为
肾风，肾风而不能食，善惊，惊己，心气萎者死。”类似于肾衰的
消化、心血管和神经系统症状〔7〕。现代研究显示，ApoM是最近
发现的一种新型 Apo，在 1999 年首次被鉴定和分离，在血浆中
主要存在于高密度脂蛋白(HDL) ，也存在于低密度脂蛋白
(LDL)和脂肪餐后的富含甘油三酯脂蛋白(TＲL)〔8〕，其生理功
能尚未完全阐明。ApoM仅在肝脏和肾脏，肾脏近曲小管 ApoM
的高表达，提示 ApoM在分泌和重吸收尿液过程中的物质代谢
方面具有一定的生理学作用，因此其表达水平的高低可以反映
肾衰程度〔9〕。核转录因子(NF)-κB 是真核细胞中普遍存在的
一种转录因子。一般以非活化的状态存在，当细胞受到刺激因
子刺激时，NF-κB被激活，转位至细胞核，与细胞因子、细胞黏
附分子等反应基因位点结合〔10〕，因此在调节免疫应答、细胞增
殖、凋亡等方面起到了关键作用〔11〕。因此，NF-κB 已成为肿
瘤、炎症等疾病新的治疗策略。
本研究表明金丝草提取物和 NF-κB 抑制剂均能改善 SCr、
BUN水平，且 PDTC能够通过降低肾脏的 NF-κB水平改善肾组
织的 SCr，BUN水平，缓解 AＲF症状，达到治疗 AＲF的目的。
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〔2015-08-11修回〕
(编辑 李相军)
新型蛋白酶体抑制剂 MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响
郭 锰 万里新 张成辉 徐 赟 (南阳市中心医院肿瘤内科，河南 南阳 473000)
〔摘 要〕 目的 探讨新型蛋白酶体抑制剂MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 取对数生长期胃癌细胞系 BGC-823和
SGC-7901，按照 MLN2238终浓度 0、25、50、75、100 nmol /L分为 5组，处理 24、48、72 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各孔吸光值并计算存
活率以评价 MLN2238对胃癌细胞的增殖抑制作用;处理 48 h后经膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双标或 PI标记后，
采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果 相同作用时间(24、48 或 72 h)下，随着 MLN2238 浓度的增加，MLN2238 处理后
BGC-823、SGC-7901细胞的存活率降低(P＜0. 05) ;相同 MLN2238浓度(25、50、75或 100 nmol /L)情况下，除 100 nmol /L MLN2238作用 24 h和 48 h的
BGC-823细胞存活率间无统计学差异外(P＞0. 05) ，随 MLN2238作用时间的延长，MLN2238对 BGC-823、SGC-7901细胞的增殖抑制作用也基本呈递
增趋势(P＜0. 05) ;MLN2238处理 BGC-823、SGC-7901细胞 48 h后，除 75、100 nmol /L MLN2238 作用 BGC-823细胞各周期细胞比例的差异无统计学
意义外(P＞0. 05) ，随 MLN2238浓度的增加，BGC-823、SGC-7901细胞的凋亡率、G0 /G1 期细胞比例均升高，S、G2 /M期细胞比例降低，且 MLN2238的
促凋亡效应和促细胞周期 G0 /G1 期阻滞作用呈浓度依赖性(P＜0. 05)。结论 MLN2238可抑制胃癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡及 G0 /G1 期阻滞，
MLN2238的以上作用与作用时间和作用浓度有关。
〔关键词〕 MLN2238;胃癌细胞;增殖;凋亡;细胞周期
〔中图分类号〕 Ｒ73 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)11-2621-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 11. 024
第一作者:郭 锰(1981-) ，男，副主任医师，硕士，主要从事恶性肿瘤的
介入治疗研究。
目前蛋白酶体已成为一个有效的抗癌治疗靶点〔1，2〕。
MLN2238是一种口服活性蛋白酶体抑制剂，为第二代蛋白酶体
抑制剂〔3〕。有研究表明，MLN2238 有较为广谱的强抗肿瘤作
用，不仅在体外可抑制肿瘤细胞株，而且在前列腺癌裸鼠移植
瘤上亦有较好的抗癌效果〔4〕。目前 MLN2238对胃癌细胞是否
有抑制作用尚不清楚，本研究旨在探讨 MLN2238 对胃癌细胞
增殖、凋亡及细胞周期的影响。
1 材料与方法
1. 1 主要试剂 胃癌细胞系 BGC-823、SGC-7901 购自中国
科学院上海生命科学研究院细胞库，新型蛋白酶体抑制
剂 MLN2238购自美国 Selleck 公司，青霉素、链霉素购于北
京索莱宝科技有限公司，胰蛋白酶、胎牛血清均购自美国 Hy-
clone公司，ＲPMI-1640 培养基购自美国 Gibco BＲL 公司，二
甲亚砜 (DMSO)、四甲基偶氮唑盐 (MTT)及碘化丙锭
(PI)购自美国 Sigma 公司，膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素
(Annexin V-FITC) /PI凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技
术有限公司。
1. 2 细胞培养 常规方法复苏于液氮中保存的 BGC-823、
SGC-7901细胞，培养于含 10%灭活胎牛血清、100 U /ml 青霉素
和 100 μg /ml 链霉素的 ＲPMI-1640培养液中，将 CO2 细胞培养
箱的温度设置为 37℃、CO2 体积分数设置为 5%，每 2 ～ 3 天换
液一次，待培养至对数生长期时，收集细胞进行实验。
1. 3 MTT法检测细胞增殖情况 采用 0. 25%胰蛋白酶消化对
数生长期 BGC-823、SGC-7901细胞后加入新鲜 ＲPMI-1640培养
基配制单细胞悬液，以每孔 1×104 个细胞接种于 96孔板中，每
孔体积 200 μl，常规条件培养 24 h 后按照 MLN2238 终浓度 0、
25、50、75、100 nmol /L分为 5组，每组设 3个复孔，处理 24、48、
72 h后向每孔加入 MTT 溶液，避光反应 4 h 后，采用 150 μl
DMSO溶液替换 MTT溶液，在 490 nm 波长下检测各孔吸光值
(A490)并计算存活率以评价 MLN2238对胃癌细胞的增殖抑制
作用。存活率(%)=(加药组 A490 /对照组 A490)×100%。实
验重复 3次。
1. 4 细胞凋亡率及细胞周期检测 将密度为 3×106 /ml 的细
胞悬液接种于 6 孔板中，按照 MLN2238 终浓度 0、25、50、75、
100 nmol /L分为 5组，每组设 3 个复孔，常规培养 48 h 后收集
·1262·郭 锰等 新型蛋白酶体抑制剂 MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 第 11期