全 文 ：第 3 0卷 第 4期
2 0 0 8年 12月
集 宁 师 专 学 报
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从〕 1. 3 0, N o . 4
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20 0 8
文章编号 lX() 9一 7 17 1(2X() 8 )04 一 X() 35一 0 3
筱麦中维生素 B Z 的分子荧光法测定
张淑云 ’ , 王志平 2 , 张继征 2
(l
.乌兰察布市卫生局 , 内蒙古 乌兰察布 01 2 0 X[ ) ; 2 . 集宁师专化学系 , 内蒙古乌兰察布 01 2 (x x〕)
摘 要 : 文用分子荧光法测定了内蒙古卓资县灰腾梁地区筱麦中维生素 B Z 的含量 , 测定结果与
标准值祛近 . 讨论了溶剂 、 时间 、 酸度及温度对测定结果的影响 , 结果表明 , 当光照时间为 1 m i n,
P H=4 .5
, 温度在 so C 左右时 , 测定结果较为适宜 .
关键词 : 维生素 B气 荧光强度 ; 标准曲线 ; 波长 ; 分子荧光法
中图分类号 : 0 657 .3 9 文献标识码: A
1 引言
筱麦也称裸燕麦 , 是燕麦的一种 。 内蒙古是
中国筱麦的主要产区 , 种植面积占全国筱麦总
面积的 4 0% , 其中又以乌兰察布最多 。 有 ’ `内蒙
三件宝 , 筱麦 、 土豆 、 羊皮袄 ” 之说 。
筱麦的营养价值在禾谷类作物中居首位 , 蛋
自质含最可达 14 % 、 19 % , 氨基酸的含量多而种
类齐全 , 人体必需的八种氨基酸的含量是小麦
和稻米的 :’. 倍多 , 且含有儿童发育不可缺少的
组氨酸 、 赖氨酸 。 筱麦的脂肪含最也较高 , 大约
为 6% 、 9% 。 铁的含最高出小麦 25 % , 磷脂的含
量也较高 。 维生素 B I 和 B Z 的含最与小麦相当 。
维生素 B Z 有多种测定方法 1 2} , 本文采用分子
荧光法对筱麦中维生素 B Z 含量进行了测定 。
2 方法原理
维生素 B Z 又称核黄素 , 溶于水 , 在 5% 的
乙酸溶液中是一个张炙光物质 。 在中性和酸性
溶液中对热稳定 , 在碱性溶液中较易被破坏 。 一
定激发波 长和发射波 长时 , 在一定浓度范围内 ,
其荧光强度与核黄素浓度成正比 。 通过实验确
定它的最佳激发波长 (3 7 0 、 4 4 0 n m )和发射波长
(5 6 On m 左右 ) , 在所确定的波长条件下 , 测定系
列核黄素标准溶液的荧光弧度 , 做荧光弧度和
浓度的标准曲线 , 用标准曲线法测定样品中维
生素 B Z 的含量 13 ]。
3 实验
.3 1 主要仪器和试剂
3
.
1
.
1 主要仪器
T -G 犯 SB 分析天平 (上海分析仪器厂;)
W G丫 10 型荧光分光光度计 (天津港东科技发
展有限公司 ;) 电热恒温水浴箱
3
.
1
.
2 主要试剂
核黄素贮备液 I : 核黄素于 P ZO S 干燥器中
干燥 24 h , 称取 0 . 0 5 0 0 9 , 溶解于 0 0 2 m o l几 乙
酸溶液中 , 在蒸汽浴上恒速搅动至溶解 , 冷却后
定容至 5 0 m L , 盛入棕色瓶加 甲苯覆盖 , 低温
(4
。
C ) 保存 ; 该溶液每毫升含 0 . 1 m g 核黄素 。
核黄 素贮 备液 1 : 取 核 黄素 储备 液
( I ) 10 m L
, 用 0 . 0 2 m o l几 乙酸溶液定容至 一0 0
m L
, 盛入棕色瓶中加甲苯覆盖 , 低温 (4o C ) 保
存 : 该溶液侮毫升 10 拼g 核黄素 :
核黄素标准工作液 : 取核黄素储备液 (1 I )5
m L
, 用水定容至 10 m L , 现用现配 ; 该溶液每
毫升含 .0 5 井g 核黄素 ;
收稿日期 : 20 8 年 05 月 30 日 .
作者简介 : 张淑云 ( 1963 一 ) , 女 , 内蒙古卓资县人 , 主管检验师 .
集 宁 师 专 学 报 第 30卷
0
.
1m ol几 盐酸溶液 : 将 8. 5 m L浓盐酸用水
稀释至 10 0 0 m L;
. 0 0 2 m ol几 乙酸溶液 : 将 1. 8 m L 冰乙酸用
水稀释至 IO 0 0m L O
. 3 2 样品的选取 、 制备
. 3 2
.
1 样品的选取
选取 一卓资县灰腾梁地区具有代表性的新鲜
筱麦样品 , 拣净杂质 , 按四分法缩分取样 。 将样
品在 5 0、 60o C 烘干后粉碎 , 过 60 目筛 , 装入磨
日瓶中备用 。
.3 .2 2 样品溶液的制备
称取筱麦样品 4 9 左右 (准确至 .0 0 0 0 1 9) ,
将待测样品置 一于 25 0 m L 烧杯中 , 加入 35 m L 盐
酸溶液 , 于沸水浴中加热 30 m in 。 开始加热 5
、 10 m in 时经常摇动烧杯 , 以防样品结块 。 冷却
至室温后 , 加 .2 5 m L 乙酸钠溶液摇匀 , 定最转
移至 50 m L 容录瓶中 , 加水定容 , 此时溶液 P H
值约为 .4 5 。 溶液通过中速干滤纸过滤 , 弃去最
初的 2 、 5 m L 滤液 , 收集滤液于 SO m L 容最瓶
中 。
.3 3 测定步骤
.3 3
.
1 准备工作
打开氛灯 , 再打开主机 , 然后打开计算机启
动工作站并初始化仪器 。 初始化完毕后 , 在工作
界血上选择测最项目 , 设置适当的仪器参数 : 激
发波 长科 0 n m , 发射波 长 5 6 0 n : n 。
.3 .3 2 标准曲线的制作
在 五个 5 0 m L 容最瓶中 , 分别加入
4
.
0 0
、
8
.
00
、
12
.
0 0
、
16
.
0 0
、
2 0
.
0 0 m L 核黄素标
准工作液 , 用 .0 02 m o l几 乙酸溶液稀释至刻度 。
3
.
3
.
3 筱麦样品溶液的测定
与测定标准系列溶液条件相同 , 测定其荧
光强度 , 平行测定三次 。
.3 4 数据处理
3
.
4
.
1 用标准系列溶液的荧光强度和浓度绘制
标准曲线
实验数据见表 l , 标准 一「作曲线见图 l 。
表 1 标准系列溶液的 荧光强度和浓度
! 一 2 3 4 5
C (拜g/ m L )
荧光强度 I
.0 04
1 7
.
6 0
0
.
0 8
35
.
24
0
.
12
52
.
86
0
.
1 6
7 0
.
5 0
0
.
2 0
88
.
7 0
3点 2 样品溶液的荧光强度测定
根据待测液的荧光强度 , 从标准工作曲线
上求得其浓度 , 三次平行测定结果见表 2 。
表 2 待测溶液荧光强度与浓度测定值
} 一 2 3
荧光强度 I
C x ( p岁m L )
4 4
.
00
0
.
10
科 . 04
0
.
10
科 . 02
0
.
10
.3 .4 3 结果计算
称取筱麦样品质最 m 、 = 4 . 0 0 0 0 9 , 筱麦样品
中维生素 B Z 含最为
xC x 5 0
4
.
0 0 0 0
x 10 0 (拜g八 0 0 9 )
用 Q 检验法检验数据 , 没有可疑值弃去 。 筱
麦中维生素 B Z ’ }元均含量为 12 5 井g八 0 0 9 , 该作
物一般含量 130 杯9 2 10 0 9 , 两者非常接近 。
4 讨论
溶剂能够影响荧光效率 , 改变荧光强度 。 测
定时必须采用同一溶剂 , 实验标准溶液和样品
溶液都采用水作为溶剂 。
在较浓的溶液中 , 荧光张度与浓度之间
并不存在线性关系 , 我们通过实验发现在 O、
.0 6拼g/ m L 之间有很好的线性关系 。 碎灭和白吸
效应较小 , 有效避免了激发光源的干扰 。
荧光光谱和荧光效率与溶液酸度有关 , 维生
素 B Z 在 P H = 6 、 7 时荧光鼓弧 , 但此时经光线
照射 , 会分解转化为光黄素 , 它的荧光强度较维
生素 B Z 强得多 , 因此在测定时 , 用 住 02 m ol 几
乙酸控制酸度 , PH二 .4 5 。 且避光条件下进行 。
荧光强度一般随温度升高而降低 , 本实验控
制温度约为 so C 。 有些荧光化合物需要一定时间
才能形成 , 而有些荧光物质在激发光较长时问照
射下会发生分解 , 因此 , 过 一早或过晚测定荧光强
度均会带来误差 。 必需通过条件试验确定最适
宜时间 , 使荧光强度达到最大且稳定 , 经试验 ,
选择时一 l朴J约 I ,刀 i n 。
第 4 期 张淑云 , 王志平 , 张继征 : 筱麦中维生素 B Z 的分子荧光法测定
5 0
四未哄瞩
口1一
0
.以 0 . 06 0 . 0 8 0 . 1
图 l
0
.
1 2 0
.
14 0
.
1 6 0
.
18 0
.
2
标 ;韶熟曲线
参考文献
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T h e M o l e c ul a
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.
B e e a u s e i n e e rt a i n e o n e e n tar t i o n r a n g e
,
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o re s e e n e e in t e n s i t y i n d i re e t P r o P o rt i o n to ir b o fl va i n d e n s i ty
, 5 0 t he s P e e i if e a t i o n e u r v e 15 th e z e r o P o i n t
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.
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,
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