全 文 ：第 15卷第 8期
2008年 8月
现代农业科学
ModernAgriculturalSciences
Vol.15 No.8
Aug.2008
土沉香增殖培养适宜培养基的研究
黄 赛 ,吕德任
(海南省农业科学院花卉所生物室 , 海南 571100)
摘 要:以中国特有的珍贵药用植物———土沉香为对象 ,分析了增殖培养的含义和培养基的配制 ,
并且指出了培养的方法和材料。
关键词:土沉香;增殖培养;培养基
中图分类号:S567.19 文献标识码:A 文章编号:1005-4650(2008)08-0014-02
StudyonAppropriateCultureMediumofMultiplication
CulturefortheAquilariasinensis
HUANGShai, LVDe-ren
(DepartmentofBiology, InstituteofFlower, HainanAcademyofAgriculturalSciences, Hainan571100, China)
Abstract:Aquilariasinensis, akindofchinasspecialandraremedicinalplant, wastakenastheresearchobjectinthisarticle,
themeaningofmultiplicationcultureandpreparationofcuturemediumwereanalyzed, themethodsandmaterialsofculturewere
pointedout.
Keywords:Aquilariasinensis;multiplicationculture;cuturemedium
收稿日期:2008-07-25
土沉香{Aquilariasinensis(cour)Gilg}又称白木香 , 属瑞
香科沉香属植物 , 是一种热带及亚热带常绿乔木 ,以其含树
脂的木材入药 , 是我国特有的珍贵药用植物 , 1987年被列为
国家珍稀濒危三级保护植物 , 1999年又被国务院批准为国
家二级重点保护野生植物。利用组织培养快繁对保护土沉
香的野生资源有一定的意义。
1 增殖培养的含义和培养基的配制
1.1 增殖培养
增殖培养基使混合微生物群体中某特定微生物比例激
增的培养方法。其一可用促进某特定微生物生长繁殖的选
择性培养基或培养条件 ,其二可用抑制其他微生物生长繁殖
的选择性培养基或培养条件。其三可用连续培养法 ,在一定
稀释率下 , 使比生长速率小的细胞溢出培养器 , 而比生长速
率大的细胞留在培养器中。
1.2 培养基及其配制
培养基是植物组织培养的重要物质。培养基好比土壤 ,
是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。培养基的
成分是根据植物生长发育所需的营养而设计的。它既有植
物所需的氮 、磷 、钾及锌 、铜 、钼 、铁等元素 , 同时也包含了对
生长发育起促进和调节作用的有机物质及植物激素等 。在
离体培养条件下 , 不同种植物的组织对营养有不同的要求 ,
甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同 , 只
有满足了它们各自的特殊要求 , 它们才能很好地生长。 因
此 , 没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官 ,
在建立一项新的培养系统时 , 首先必须找到一合适的培养
基 , 培养才有可能成功。
(1)母液的配制与保存。由于组培的植物不同 , 需要配
制不同的培养基 ,为减少工件量 , 可把药品配成浓缩液 , 一般
为 10 ～ 100倍 , 其中大量元素倍数略低 , 一般为 10 ～ 20倍 ,
微量元素和有机成分等一般为 50 ～ 100倍 , 母液的配制及保
存应注意以下几个方面。①药品称量应准确 , 尤其微量元素
化合物应精确到 0.0001 g,大量元素可精确到 0.01 g。 ②配
制母液的浓度适当 ,一是长时间保存后易沉淀 ,二是浓度大 ,
用量少 ,在配制培养基时易影响精确度。③母液贮藏不宜过
长 ,一般几个月左右 , 要定期检查 , 如出现浑浊 、沉淀及霉菌
等现象 ,就不能使用。 ④母液应放在 2 ～ 4 ℃的冰箱中保存。
(2)培养基的配制。根据培养基配方 , 算好母液吸取
量 ,并按顺序吸取 , 然后加入蔗糖溶液 , 并加入蒸馏水定容 ,
并用 0.1 ～ 1 mol/L的 HCl或 NaOH调整 pH值 ,加入琼脂加
热熔化 ,配制好的培养基要趁热分注 , 倒入三角瓶等培养器
皿中 ,封口准备消毒。
(3)培养基的消毒。由于培养基内有丰富的营养物质 ,
极利细菌和真菌繁殖 ,造成污染 , 影响组培的成功 , 一般有高
温高压消毒和过滤消毒两种方法。①高温高压消毒 一般用
消毒锅消毒 ,注意消毒锅不能装的过满 , 锅内保持 1.1 Kg/
cm2的压力 ,温度 120 ℃左右 , 大约 15 ～ 20 min即可 。 ②过
滤消毒 一些易受高温破坏的培养基成分如 IAA、IBA、ZT等 ,
不宜用高温高压法消毒 ,可用过滤消毒 ,可过滤消毒后再加入
已高温高压消毒的培养基中 ,过滤消毒应在无菌室或超净工
件台上进行 ,以避免污染培养基。
2 材料和方法
2.1 材料
土沉香(Aquilariasinensis)中间繁殖体由海南省农业科
学院花卉所生物室提供 ,已继代 2次。
2.2 方法
基本培养基试验:采用 MS、1/2MS、 1/3MS、N6、WPM, 6
种培养基。
MS培养基是 1962年由 Murashige和 Skoog为培养烟草
细胞而设计的。 MS培养基组成是在配制 1 L(1000 mL)培
养基时 , 加硝酸铵 1.65 g、硝酸钾 1.9 g、氯化钙 0.44 g、硫酸
镁 0.37g、磷酸二氢钾 0.17 g、碘化钾 0.83mg、硼酸 5.2mg、
硫酸镁 22.3 mg、硫酸锌 3.6 mg、钼酸钠 0.25 mg、硫酸铜
0.025mg、氯化钴 0.025mg、硫酸铁 27.8 mg、蔗糖 30 g和琼
脂 7 g。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而
确定。 MS培养基中大量元素浓度过高 , 为此常采用 1/2、 1/
4大量元素浓度作培养用 , 这样生长效果列好。 1/2MS培养
基就是大量元素减半 , 用量是 MS的一半。 N6培养基是
1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。
其特点是成分较简单 , KNO3和(NH4)S2O4含量高。在国内
已广泛应用于小麦 、水稻及其它植物的花药培养和其它组织
培养。 WPM(WoodyPlantMedium)木本植物培养基较少形
成愈伤组织 ,不定芽可从叶片直接发生。木本植物用培养基
(WPM, WoodyPlantmedium)
参考文献
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(上接第 13页)
表 3 根据吸光度计算所得的抑制率对时间的变化
时间
/min 1 2 3 4 5 6 8 10 12
制率/%
22.58 23.91 24.79 25.53 26.97 27.45 28.21 28.79 29.45
34.48 36.96 39.34 41.33 43.82 45.68 47.51 49.44 52.05
48.39 52.17 55.74 58.67 60.67 61.76 63.25 64.40 65.07
58.06 63.04 67.21 69.33 70.79 72.55 74.36 75.76 77.40
将以上数据进行归纳见图 2。
图 2 抑制率对时间的变化
表 3、图 2向我们展示了抑制率与时间的关系 , 在这里可
以更清晰的看到 , 抑制率不仅随着黄酮提取物浓度的增大而
升高 , 更重要的是 ,抑制率随时间的增长不断变大 , 且随黄酮
提取物浓度的增大 , 这种趋势变得更明显。
4 结论
本实验结合传统的碱提酸沉法和方便快捷的微波法 ,对
槐豆中黄酮类物质进行了提取和初步分离 , 研究了黄酮提取
物对酪氨酸酶活性的影响。实验发现 ,槐豆中黄酮提取物对
酪氨酸酶的活性存在一定抑制作用 ,且随浓度的增加和时间
的增长 ,对酶活性的抑制作用显著增强。在对槐豆中的黄酮
物进行了初步探索后得知 , 当黄酮提取物浓度为 8.46 g/L
时 ,得到最高抑制率可达到 77.40 %。由于 “增白”是女性美
容不可缺少的内容之一 ,而酪氨酸酶又是影响皮肤色素的关
键酶 ,因此根据本文的结论 “槐豆中黄酮提取物对酪氨酸酶
的活性存在一定抑制作用” 提示槐豆除了文献中记述的功
效外 ,尚有一定的增白作用 , 可进一步开发应用于皮肤美容
和医学研究。
参考文献
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