全 文 ：应 用 生 态 学 报 年 月 第 ! 卷 第 期
∀#’∃ % & ∋ & () ∗ + % , − ) . ,//− ∃& 0 & ∀) −) 1 2 , (3 4 5 , ! 6 7 8 9 :一: !
凤眼莲根分泌物对 & 4; < = 口>3? ;≅ Α ΒΧ 5
酚代谢的影响 ‘
4 < Δ 5 苯
吴 辉” 郑师章 嘎旦大学环境与资源生物系止海 ’Ε ! 7
【摘要】 本文利用从含酚废水中筛选出新的高效降酚菌株 6& 4; ≅= <> 3 ? ;≅= Β/ 5 4 <Δ 5 7和凤眼莲根分泌
物来探讨凤眼莲与细菌之间松散的 、非特异性的降酚机理 5 研究了风眼莲分泌物及其不同的组分对
&4 ;Φ >3 “≅= Β/ 5 4< Δ 5 生长 、降酚酶活性和降酚效率的影响 5 结果表明 , 低浓度的根分泌物 66 Γ Η ΙΗ 7促进细菌生长 , 提高降酚效率 , 而高浓度的根分泌物 67 Ε Γ Η Ι Η 7 虽能促进细菌生长 , 但会抑制
细菌降酚酶的诱导 , 降低降酚效率 5 凤眼莲根分泌物各组分中还原糖是影响 & 4; ≅ϑ< >3 ?; ≅ Α ΒΧ 5 4 <Δ 5 降酚的关键因子 5 提出了人工组建凤眼莲和 & 4; ≅ =<> 3 ?; ≅= Β Χ 5 4< Δ 5 系统 , 提高降酚效率的可能性 5
关键词 凤眼莲 根分泌物 & 4; ≅犷)> 3 ? ;≅= Β/ 5 4< Δ 5 降酚
& ΚΚ≅? ; < Κ =< ; ≅ Λ Μ Ν3 ;≅ Β Κ= < Ο & Π?ΘΘ< =4 Π3 ≅ =3 ΒΒΠ/≅Β < 4 /Θ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Σ = 3Ν Π4 Σ &4 ;≅=< >3 ? ;≅= Β / 5 4 < Δ 5 Τ Μ#Μ Π 3 4 Ν Υ Θ≅ 4 Σ ∋ Θ ΠςΘ 3 4 Σ 60≅ Χ 3 = ;Ο ≅ 4 ; < Κ & 4 Δ Π= < 4 Ο ≅ 4 ;3Ρ 3 4 Ν + ≅ Β< Μ = ≅≅ Β Ω Π< Ρ< Σ Ξ , .Μ Ν 3 4 ∗ 4 ΠΔ ≅ = ΒΠ;Ξ ,
∋ Θ 3 4 Σ Θ3 Π Ψ Ε Ε ! 7一 ∀ ΘΠ4 , (5 , Χ Χ Ρ5 & ≅ < Ρ5 , , ! 6 7 , 9 : 一 : ! 5
ϑ ΘΠΒ Χ 3 Χ ≅ = Β ;Μ Ν Π≅ Β ;Θ≅ ≅ ΚΚ≅≅ ; < Κ = < < ; ≅ Λ Μ Ν 3 ;≅ Β 3 4 Ν ;Θ≅ Π= Κ= 3 ≅ ;Π< 4 Β 63 Ο Π4 < 3 ≅ ΠΝ , < = Σ 3 4 Π≅ 3 ≅ ΠΝ 3 4 Ν = ≅ Ν Μ ≅Ζ
Π4 Σ Β Μ Σ 3 = Β 7 Κ= < Ο & Π? ΘΘ < < Π3 ?=3 Β ΒΠ/ ≅ Β < 4 ;Θ ≅ Σ = < [ ;Θ , ≅ 4 ς Ξ Ο ≅ 3 ≅;ΠΔ Π;Ξ 3 4 Ν ΧΘ ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Σ = 3Ν Π4 Σ ≅ ΚΚΠ≅Π≅4 Ζ
≅ Ξ < Κ & 二;≅ =<> 3 ? ;≅ = Β Χ 5 4 < Δ 5 ϑ Θ≅ = < < ; ≅ Λ Μ Ν 3 ;≅ Β 3 4 Ν ; Θ≅ Π= Κ= 3 ≅ ;Π< 4 Β 3 ; Ρ< [ ≅ < 4 ≅ ≅ 4 ;= 3 ;Π< 4 Β 6簇 Γ 7 ∋ Θ< [
3 Β ;ΠΟ Μ Ρ3 ;< = Ξ ≅ ΚΚ≅ ≅ ; , > Μ ; 3 ; Θ ΠΣ Θ ? < 4 ≅ ≅ 4 ; = 3 ;Π< 4 Β 67 Ε写7 , ;Θ≅ Ξ Π4 ΘΠ>Π; ; Θ≅ Π4 Ν Μ ≅ ;Π< 4 < Κ Χ Θ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Ζ
Σ = 3 Ν Π4 Σ ≅ 4 ς ΞΟ ≅ Β 3 4 Ν = ≅Ν Μ ≅≅ ;Θ ≅ ≅ ΚΚΠ≅Π≅ 4 ≅ Ξ < Κ Χ Θ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Σ = 3Ν 3 ;Π< 4 [ Θ ΠΡ≅ Β ;ΠΟ Μ Ρ3; ≅ ; Θ≅ Σ = < [ ;Θ < Κ & 4 Ζ
;≅= <> 3 ≅ ;≅ = ΒΧ 5 4 < Δ 5 ∃; ∴ Ν ≅ Ο < 4 Β ;= 3 ;≅ Ν ;Θ 3 ; Β Μ Σ 3 = Κ= 3 ≅;Π< 4 Β < Κ = < < ; ≅ Λ Μ Ν 3 ;≅ Β 3 = ≅ ≅ΚΚ≅ ≅ ;ΠΔ ≅ < 4 Χ Θ ≅ 4 < Ρ Ζ
Ν ≅ Σ = 3 Ν 3 ;Π< 4 , 3 4 Ν Θ≅ 4 既 , Π; ∴ Χ < ΒΒ Π>Ρ≅ ; < ≅ Β ; 3> ΡΠΒΘ 3 ΧΘ ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Σ = 3 ΝΠ4 Σ Β ΞΒ ;≅ Ο [ Π; Θ & 5 ≅ = 3 ΒΒ艺/≅Β 3 4Ν
& 4 ; ≅=< 加? ; ≅ = Β / 5 4 < Δ 5
] ≅ Ξ [ < = Ν Β & Π? ΘΘ <阴Π3 < =3 ΒΒΠ/≅ Β , + < < ; ≅ Λ Μ Ν 3 ;≅ Β , & 4 ;≅ =< >3 ? ;≅ = Β Χ 5 4 < Δ 5 , /Θ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅Σ = 3 Ν 3 ;Π< 4 5
引 言
近年来 , 凤 眼莲 6&Π ?Θ Θ <= 4Π 3 。=3 Β Π/ ≅Β 7被
广泛地应用于污水治理 , 尤其是在处理含酚废
水方面 , 国内外均有报道 ⊥, ’ , ‘ , ’, “ · ’_〕5 但这些工
作很少从生物共生系统的角度来讨论 , 特别对
根际微生物的作用缺乏深入的研究 5 水生高等
植物虽然能代谢环境中的有机污染物 , 可是同
与其共栖的微生物相比 , 它们的降解能力要逊
色得多〔Ψ , 〕5 乐毅全等 ⊥ 5 ‘〕首先把凤眼莲和根际
微生物联系起来 , 作为共生系统 , 发现凤眼莲的
降酚作用是有限的 6Ε Θ 平均降酚率为 5 Γ 7 ,
细菌 6假单胞菌 % < 5 ∴ 7起 主 导作 用 6 ΕΘ 为
· 国家自然科学基金资助项 目 5
二现在工作地址 8中国科学院上海植物生理研究所 5
本文于 Ψ 年 ! 月 _ 日收到 , 9 月 Ψ 9 日改回 5
9 5 纬7 , 而凤眼莲和细菌相互作用能大大提高
降酚效率 6Ε Θ 为 9 5 ∴ Γ 7 , 并提出凤眼莲和细
菌之 间具有松散的 、非特异性的关系 5 郑师章
等⊥Δ5 “二就凤眼莲根分泌物对若干细菌的作用以
及根分泌物中还原糖及其化学信息作用做了一
定的研究 , 然而对系统降酚效率提高的机理没
有作深入的研究 5 本文就凤眼莲根分泌物及其
各个分离组分对含酚废水中筛选出的新的高效
降酚菌株 & 4 ;≅=< >3 ? ;≅ = Β Χ 5 4 < Δ 5 的生长 、降酚酶
活性和降酚效果等方面进行研究 , 为人工组建
高效降酚系统提供依据 5
Ψ 材料与方法
Ψ 5 无菌凤眼莲及其根分泌物
利用组织培养法得到无菌苗 ,接入无机培养液 , Ψ∴
士 Ψ ℃ , Ψ Ε。。− Λ , ΨΘ 光照培养 , 培养过程中 , 凤眼莲根
期 吴 辉等 8凤眼莲根分泌物对 & 4; < =<> 3? ‘≅= 8 Χ 4 <Δ 5 苯酚代谢的影响
进行活性染色 5
试验重复 次 , 根分泌物及其分离组分均经过滤
灭菌5
实验结果
5 凤眼莲根分泌物对 肠;≅ 几洒3 ?; ≅= Β/ 5 4 <Δ 5
生长动态的影响
把不同量的凤眼莲根分泌物加入细菌含酚
合成培养液中 , 接菌培养 , 每隔 ΨΘ 测定细菌浊
度 )0Β ! 。 , 制作细菌生长曲线 6图 7 5
‘让手口
!、八直门目∀四铡柳长油名界
系分泌物就会释放到培养液 中 , 收集的风眼莲培养液
可视为根分泌物〔‘# , , ,〕∃
%∃ % 凤眼莲根分泌物成分的分离
取培养 & 个月的根分泌物 &∋ ∋( )加入等量的乙醚
萃取 , 取水溶性部分再用乙醚萃取 & 次 ,合并两次萃取
物 , ∗∋ ℃水浴燕干 , 用乙醚定容到 俪&即为黄色的乙醚
提取液备用 , 把已抽提了乙醚提取液的风眼莲根分泌
物 +∋( ) 加到处理成 , 十的 −.% 阳离子交换树脂柱内 ,
重蒸水洗脱 , 洗脱速度为 )( )/( 0∀ , 直到流出掖中无
糖1)23 ,把流出液通入处理成 45 一型的 −& − 阴离子交换
树脂内 , 同 6 7洗脱 , 检测流出液无糖时停止洗脱 , 收集
流出液 , 浓缩到 #2 ( 一, 此为糖组分 , 用 & ( 2 )/ 7 8 , ‘ ,
洗脱 − .% 阳离子交换树脂 9流速为 )( )/ ( 0∀ ∃ : , 流出液
4 为氨基酸组分 ; 再用 % ∃ #(2 )/ 7 , < , 洗脱 −& − 阴
离子交换树脂 , 流出液 ! 是有机酸组分 ∃ 蒸干 4 、! , 用
重蒸水定容到 + ∋( )备用 1)# 3∃% ∃ . 高效降酷菌株的筛选及其培养
以 +。。拌= / ( )酚为唯一碳源的培养基从煤气厂曝
气池废水中筛选分离和纯化后获得新的降酚菌株 >∀ ?
≅Α Β2 加5≅ ΑΒ #Χ · ∀2 Δ ∃ &3 ∃ 细菌的液体培养在 %+ ∋Β∀ )的三
角瓶中进行 ;培养含酚 + ∋即= / 词 , 终体积为 #2( ) , 接菌
量 ∗( )9 Ε 。一。Φ ∋ ∃ + : , . ∋ ℃ , % % ∋印( 振荡培养 ∗ +卜∃
% ∃ ∗ 细菌降酚效率的测定
以酚为唯一碳源的含酚合成培养液在 % −∋∀ ( 处
有最大吸收峰 , 所 以可通过测定培养液 Ε 二∋值的变化
来确定降酚效率( 3∃
% ∃ + 细菌降酚酶活性的测定
实验菌株以 Γ> Η 4 途径降解苯酚 ,降酚的关键酶
是邻苯二酚 % , . 加氧酶 9另文报道 : ∃ 把液体培养的细
菌液 # 2 2 2Β Ι ( 下离心 ϑ2( 0∀ , 收集菌体 , 用 ∋ ∃ 2 #(2 )/ 7
Ι, − ∃ ∗ 的 Χ!Κ 洗涤两次后 , 再用含 &。Λ丙酮的 Χ!Κ 悬
浮菌体 , 便细菌浊度 Ε晰 Μ & , + ,接着用 ΧΒ ΑΧ #2 ∀0 5 超
声波 仪破细 胞 & +∋ + , 然后 在 一− ∋ ∋ ∋Β Ι ( 下 。℃离心
. 2( 0∀ , 除去细胞碎片 , 得无细胞抽提液 <Ν> 用于酶活
性测定∃ 反应系统中加 &∋ ( ( 2) / 7 邻苯二酚和 <Ν> 各
& ∋川, 再 用 Χ!Κ 补 足 .( ) 混 匀 , 立 即 在 ΚΟ 0( Π Θ ΡΣ
Δ %∗ ∋ 分光光度计 . − +∀ ( 处进行时间扫描 ∃ 以每分钟
∋ ∃ Τ Ε Π , #值变化作为一个活力单位 比〕∃ 比活力以
<Ν > / ( )9 蛋白含量相似 :中的活力单位9 / ( Ε 表示 ∃
% ∃ ‘ <Ν> 的聚丙烯酞胺凝胶电泳
电泳采用 Ι , Κ ∃ . 的电极缓冲系统 , 浓缩胶 ∗ ∃ ∗ Λ ,
分离胶 &∋ Λ , 上样量为 +。闪 , 稳流 % +( 4 , 电泳 ∗Ο , 染
色 Υ一半的凝胶用考马斯亮蓝 ς , 。染色 , 另一半凝胶浸
入含 &∋( 2 )/ 7 邻苯二酚的 。∃ 。。( 2) / 7 Ι , − ∃ ∗ Χ妇Κ 中
&% &石
时间 Η Υ Β∀ Α 9 Ο :
图 & 凤眼莲根分泌物对 > 耐。阳 Ω口5≅ ΑΒ #Χ ∃ ∀2 Δ ∃ 生长动态的影
响
Β 0= ∃ & > ΞΞΑ 5 ≅ 2 Ξ Υ2 ≅ Α Ψ Σ Ρ Π≅Α 2 ΞΒ2 ( > ∃ 湘# # 0Χ 2 # 2 ∀ Ζ 0∀ Α ≅ 0Α= Β 2 [ ≅Ο 2 Ξ > ”‘盯。加山 Β # Ι ∃ ∀ 2Δ ∃细 菌分别生长在 以酚 9 &∋ ∋ 拼= / ( ): 为唯一碳深 9 4 :及加有 % Λ
9! : 和 %∋ Λ 9 < :的根分泌物的含酚 9) 。即盯( ): 合成培养液中∃
Α Α )) = Β2 [ ∀ 2 ∀ ( Α Ρ 0Π 2 2 ∀ ≅ Π 0∀ 0∀ = % ∋ ∋户= / ( ) Ι Ο Α ∀ 2 ) 94 : , & ∋ ∋尸= /
( ) Ι Ο Α ∀ 2 ) ∴ % Λ 9 ! : ; ∴ % ∋ Λ 9 < : Β 2 2 ≅ Α Ψ Σ Ρ Π ≅ Α # ΞΒ2 ( > ∃ 5 阳#?
#0Χ亡车∃
从图 & 的生长曲线看 , 在以酚为唯一碳源
培养时 , > ∀ ≅产八沽Π 5≅Α Β # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃ 种群 生长缓慢 ,
最大生长量 ] 只有 ∋ ∃ − Ε# ‘。 , 当培养液中凤
眼莲根分 泌物浓度为 % Λ 9 ⊥ / ⊥ : 时 , 细菌生长
加快 , ] 值也增加 , 而当培养液中凤眼莲根分泌
物浓度为 %∋ Λ时 , 细菌生长明显地分为两步 ,
开始细菌生长很快 , %Ο 后就进入对数生长 , _Ο
后细菌生长出现时滞 , 一直到达 &∗ Ο 时 , 细菌又
进 入 对数生 长 , 细 菌种群 ] 值 达 到 ∋ ∃ & ⎯%
Ε 。一‘ ∃
. ∃ % 不同浓度的风 眼莲根分泌物对> ∀≅ ΑΒ2 ?
αΠ 5 ≅ Α Β # Ι · ∀ 2 Δ ∃ 降酚的影响
当凤眼莲根分泌物浓度为 ∋ ∃ & Λ 、 &Λ时 ,
细菌生长量增加 , 降酚酶活性和降酚效率都有
提高 ∃ 但当凤眼莲根分泌物浓度达 % Λ时 , 细菌
: Ε 应 用 生 态 学 报 ! 卷
生长量却减少 Ε 5 ∃) 0 值 , 降酚酶活性也下降 , 递增 5 加入培养 Ε 、 ΨΕ 夭的凤眼莲根分泌物 , 细
降酚百分率减小 !Γ 5 而培养液中根分泌物浓 菌降酚酶活性有所提高 , 降酚能力增强 5 但当加
度为 Ε Γ 、 Ψ。Γ时 , 尽管细菌生长大大加快 , 它 入培养 Ε 夭的凤眼莲根分泌物 6还原糖含量
们的降酚酶活性却下降了 Ψ 、 Ψ: ∗ Ι Ο Ρ, 降酚效 Ψ∴ Χ Χ Ρ4 7时 , 细菌的降酚酶活性和降酚能力都
率下降了 9 : Γ 、:∴ 5 : Γ 5 另外从电泳图谱 6图 Ψ7 骤减 5 尤其是加入培养 !Ε 天风眼莲根分泌物
可 见 , ΨΕ Γ的凤眼莲根分泌物影 响下的细菌 后 , 细菌降酚能力几乎完全丧失 , 电泳结果 6图
∀. & 的谱带比对照和 ΨΓ根分泌物作用下 ∀.& !7 也证实 8 此时细菌 ∀.& 缺少一条 !⎯ 0 的降
的谱带少一条 ! ⎯ 0 的降酚酶带 5 酚酶谱带 5
表 不同浓度的根分泌物对众“ , 翻州 5= , 5 Φ 5 的形响ϑ 5 > 5 & Κ=5 ≅ ;Β < Κ Ν ΡΚΚ≅ = 5 ) ; ? < 5 ? ≅以= 5 ;Ρ<山 <Κ = < < ; ≅Λ 5 Ν 3; ”
介。Ο & 5 ?Φ Ρ/“ <4 众;的吞哪扭 = 印 5 的 , 5 α 。 月 5
。<Ζβχ?Σ‘δ月2ε记∃二叨灿Υ勺叱
潮%∋竖噶根分泌物浓度
< 2 ∀ Α Α ∀ ≅ Β Π ?
≅ 02 ∀ 9 Λ :
细胞光密度值 Ε “‘
醉活性
> ∀ 器界∀ Α
Π Α ≅玉, 0≅φ
降酚效率ΧΟ Α ∀ 2 ) ?
Ρ绍ΒΠ Ρ Π ≅ 02 ∀
对照 <2 ∀ ≅ Β2 )
处理
Η ΒΑ Π ≅ ( Α ∀ ≅
。6
∋ 。 &
. 2
. ∗ 。 生
些_ _ 。 ∋
⎯ & ∃ &
⎯ ∋ ∃ %
_ ∗ ∃ Ω
& ∋ 。 ∋
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‘ 6二一六礼、 户
工、丫‘
。。。鹭
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∋ + &公 , + 加 %+ 加 . +时间 Η 0( Α 9 ΡΠ φ # :
∗−邵&_%
∃∋七Ρ丹Τ七曰六η匕,∃厅‘Β七 口_⋯∋&%&∋%
图 . 凤眼莲根分泌物中还原抢的动态及 其对 名∀脚。如5≅ ΑΒ
∀2 Δ ∃ 的作用
∃ . Η 0( Α Α 2 Σ Β# Α 2 Ξ ΒΑ Ρ Σ Α 0∀ = #
ΞΒ2 ( > ∃ 5阴岛印“ Π ∀ Ρ ≅ Ο
Σ = ΠΒ# Π Α Α Σ ( Σ )Π ≅02 ∀ 0 ∀ 一Β2 ≅ Α Ψ ?Α 0Β 0∀ Ξ)Σ Α ∀ Α Α # 2 ∀ > 月血丫口阮‘翻丫
哈珑ΣΡΠ
# Ι ∃ ∀ 2 Δ ·
图 % 凤眼莲根分泌物作用下 >形。Β砧口5≅ΑΒ #Χ ∃ ∀ 2Δ ∃ <Ν> 电泳图谱的差异
Ν 0= ∃ % <2 ( Ι Π ≅0 # 2 ∀ 2 Ξ <Ν> Χ4 ς > ΞΒ 2 ( > 月 ≅‘Β 2 αΠ “Α Β # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃= Β2 [∀ 2 ∀ Ρ 0ΞΞ七饮∀ ≅ Α 2 ∀5 Α ∀ ≅ ΒΠ ≅ 02 ∀ # 2 Ξ Β 2 2 ≅ Α Ψ Σ Ρ Π≅ Α ∃ 加( > ∃Μ # 0Χ “ ∃细菌分别生长在 以酚 9 + ∋ 滩/( ): 为唯 一碳源 94 : 及加有 &Λ
9 ! : ; &。写 9 < :和 % ∋ Λ 9 Ε :根分泌物的含酚 9 + ∋ ∋拌= / ( ):合成培
养掖中∃
< Α )) = Β2[ ∀ 2 ∀ ( ΑΡ 0Π Α 2 ∀ ≅ Π 0∀ 0∀ = + ∋ ∋雌 /( & Ι Ο Α ∀ 2 ) 94 : Π ∀ Ρ+∋ ∋ 拌= /( & Ι Ο Α ∀ 2 )∴ &Λ 9 ! : , ∴ & ∋Λ 9< : , ∴ %∋ 写 9 Ε : Β2 ≅ Α Ψ Σ ?Ρ Π ≅ Α Υ ΞΒ 2 ( > ∃ 5ΒΠ ## 0Χ Α # ∃
. ∃ . 凤眼莲根分泌物中还原糖动态变化及其
对 > ∀ ≅ΑΒ2 αΠ Α ≅ΑΒ # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃ 的影响
分别收集培养 + 、 一2 、 & + 、 % ∋ 、 % + 、 + ∋ 、 . + 和
∗∋ 天凤眼莲根分泌物 , 分析还原糖的含量 , 并
测试其对 > 心娜乙Π5 ≅ΑΒ # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃ 的影响 ∃ 如图 .
凤眼莲根分泌物中还原糖随培养时间的增加而
圈 ∗ 培养不同时间凤眼莲的根分泌物对 肠≅ΑΒ 口如5≅Α Υ #Χ∃
∀ 2 Δ ∃ <此 电泳图谱的影响Ν 0= ∃ ∗ <2 ( Ι Π Β 0# 2 ∀ Ξ <Ν> Χ4ς > ΞΒ2( > ∀ “Β 2 加5妙 # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃= Β2[ ∀ 2 ∀ Β 2 ≅ Α Ψ Σ Ρ Π ≅Α # 2 Ξ > ∃ 5 ΒΠ “户“ 5 Σ )≅Σ Β Α Ρ Ξ2 Β Δ Π 02 Σ #
Ρ Π φ# ∃
勿菌分别生长在以酚 9+ 。。产= / ( ): 为唯一碳源 9 4 : 及加有培养
& 9 ! : , %以< : 和 ∗。9Ε :夭凤眼莲的根分泌物的含酚合成培养
液中∃
< Α )) =姆[ ∀ 2 ∀ ( Α Ρ 0Π Α 2 ∀ ≅ Π 0∀ 0∀ = + ∋即= / ( ) Ι Ο Α ∀ 2 ) ∴ Β 2 Β Α Ψ Σ ?
Ρ Π ≅Α # ΞΒ 2 ( ￡ ∃ 5ΒΠ “0Χ‘, ∃ Α Σ )≅ Σ Β ΑΡ Ξ2 Β 2 94 : , & ∋ 9! : , %∋ 9< : , ∗ ∋9 Ε : Ρ Π φ# ∃
. ∃ ∗ 风眼莲根分泌物各分离组分对 > ∀≅ ΑΒ ?
2αΠ 5≅ ΑΒ # Ι ∃ ∀ 2 Δ ∃ 的影响
. ∃ ∗ ∃ & 乙醚抽提液的抑菌效应 用微量进样器
Ρ期 吴 辉等 8凤眼莲根分泌物对石川娜占“ ;≅= Β Χ 5 4< Δ 5 苯酚代谢的影响
吸取 Ψ Ε 、 ! Ε 、 _Ε 、 ∴ Ε 和 Ε Ε拜Ρ的 乙醚抽提液 , 分
别滴加在无菌圆形滤纸片上 , 待乙醚挥发后 ,置
于加有 Ε 5 ΥΟ Ρ实验菌液的肉汤琼脂平板上 ,
9℃培养 Ψ 天 , 结果摄影 , 见图 ∴5
Ψ。、 ! Ε 、 _ Ε 和 : Ε川凤眼莲根分泌物 的乙醚
抽提液对细菌的作用不太明显 , 但是 Ε Ε川根
分泌物对细菌的抑制作用较明显 , 抑菌圈直径
达 5 _ ≅Ο 6图 ∴ 7 5
农 Ψ 反眼菠根分泌物各组分对瓜;。加Ν ‘, 8 Χ 5 Μ< Δ 5 的形响ϑ 5 >5 Ψ & Κ=≅? ; <= Κ= 3 ? Ν < 5 日 <= = < < ; ≅ ΛΜ Ν3 ;≅Β = < 5 5 & 5 ‘, “应产 ∴ < 4
召5 翻 , 吞5 ‘翻= 即二。 , 5
根分泌物浓度
∀ < 4 ≅ ≅ 4 ; = 3
;Π< 4 < Κ
Κ=3 ? ; Π< 4 Β
6Γ 7
细胞光密度宜)0 “‘
醉活性& 4 吕明Ο ≅
3 ? ;Π Δ Π;Ξ
降阶效率/ Θ即<Ρ ,Ν ≅ Σ =3 Ν 3 Ζ
韶
对烈∀< Μ; =< Ρ水溶性组分
Τ 3 ; ≅ =
Ν < ΡΜ > Ρ≅Κ=3 ≅ ;Π< 4 Β
氮基徽组分
, Ο Π4 <
3 ? ΠΝ
Κ=3 ≅ ; Π< 4 Β
绪组分
∋ Μ Σ 3 =
有机酸组分< = Σ 3 4 Π≅
3 ≅ΠΝΚ= 3 ≅ ; Π< 4 Β
Ε Ε Ε5 Ε沪
Ε! 5 ∴ Ε ! 5 :
Ψ ΨΨ 5 Ε 5 ∴
Ε ! 5 ! 9 5 _
Ψ Ε Ψ : , : Ε 。
Ε 5 ∴ ∴ 5 Ψ
Ψ Ε∴ 5 Ε 5 ∴
Ε Ε Ε 。 Ε 9。 _
Ψ Ε 9 5 Ε Ε 5 ∴
Ε 5 ∴ Ε 9 5
Ψ Ε 5 ∴ ∴ 5 Ψ
Ε ∴ 5 : 9 5 !
Ψ Ε 9 5 ∴ Ε 5 Ε
Ε Ε 。 Ε 。
Ψ 9 5 Ε Ε 9 5
Ε %1 一
ΨΕ % 1 一
Ε Ε ‘
Ε Ψ 。 !
Ε Ε 5 Ε
9 。 :
9 5 :
5 :
。 :
Ε Ε 一 _
。 :
Ε 5
: 5 :
: ! 5 Ε
9: 5 :
Ε Ε 。 _
: 。 :
图 ∴ 凤眼莲根分泌物乙醚抽提液对 & 二扭阳占口山= 叩 ‘ 4< , 5 的
抑制作用
外 5 弓∃4 ΘΠ>Π; < = Ξ ≅Κ≅ ≅ ; < Κ ≅ ;Θ≅ = ≅ Λ ; = 3 ≅ ; Β Κ= < Ο =< < ; ≅ Λ Μ Ν ;≅ Β <Κ
& 5 ?=3 Β护“ < 4 肠扮砧口‘扮 Β/5 4 <Δ ·
5 ! 5 Ψ 凤眼莲根分泌物的水溶性组分及其分离
成分对 & 4 ;≅ = < >3 ?;≅= Β/ 5 4 <Δ 5 的影响 培养液
中水溶性成分浓度为 Γ时 , 细菌的生长 、降酚
酶活性和降酚效率都有所增加 Α ΨΓ的浓度虽使
细菌种群增长 , 但降酚酶活性和降酚效率有减
弱的趋势 5 而当水溶性组分的浓度达 Ε 写、
Ψ Ε Γ时 , 细菌种群增长显著 , 但降酚酶活性和降
酚效率明显减弱 5 根分泌物糖组分对细菌的影
响趋势与水溶性组分的相似 6表 Ψ7 5 而不同浓
度的氨基酸组分对细菌的生长、降酚酶活性和
降酚效率影响的差别不显著 5 低浓度的有机酸
对细菌的作用不明显 , 高浓度的有机酸完全抑
制细菌的生长 5
5 ∴ 还原糖对 & 4 ;≅ = < >3 ‘;≅= Β/ 5 4 < Δ 5 的影响
培养液中还原糖浓度的不同对 & 4 ;≅= < _3 ‘ Ζ
;≅ 8 Β/ 5 4 < Δ 5 影响的差异显著6表 7 5 果糖和葡
萄 糖对 细菌的作 用 比较一 致 , 低浓度 6簇
Ε Ε/ Χ Ο 7糖可以促进细菌生长 ,提高降酚效率 5
当糖浓度达 Υ<Ε/ Χ Ο 时 , 细菌生长虽然加快 , 但
注 8 % 1 表示不生长 , 3 、 > 、≅ 分别对应于 Ε 5 9 ΒΕ 0 Β一。光密度值 , !Ε ∗ Ι耐 醉比活和 : 肠的降盼效率 5%1 β 。Ε Σ =< [ ;卜, 3 , > , ≅ 七< = = ≅Β Χ助Ν Π峪 ; < Ε 5 9 ∴ ) 0 ‘一‘ , ! < ∗ ΙΟ Ρ ≅ 4 ς ΞΟ ≅ 3 ≅ ; ΠΔ Π;Ξ , 3 4 Ν : : Γ Χ Θ≅ 4 < Ρ 一 Ν ≅ Σ = 3Ν 3 ;Π< 4 = ≅ ΒΧ ≅ ≅ ; ΠΔ ≅ Ζ
ΡΞ 5
表 还原抢对 老加苦砂砧5 “‘= 叩二<Δ , 的影响
ϑ 3 > 5 & ΚΚ伙;Β < Κ =≅ Ν Μ ≅ Π4 Σ Β ΜΣ3 =Β <4 众介, 吞5 ≅ ;,= ΒΧ二< Δ ·
还原格浓度
∀ < 4 ≅ ≅ 4 ;= 3 Ζ
;) 4
6Χ ΧΟ 7
细胞 醉活性 降阶效率光密 & 4 砂Ο < /Θ≅ 4 <Ρ Ζ度值 3 ≅ ;ΠΔΠ;Ξ Ν ≅ Σ =“3 ;Π< 4) 0 Β‘。 6肠7
对照 ∀< 以=< Ρ
葡萄糖
1 ΡΜ ≅ < Β ≅
5 果糖. = Μ ; < Β ≅
菊萄糖χ
果搪
. = Μ ; ≅ < Β ≅ χ
1 ΡΜ ≅ < Β ≅
6Ρ 盆 7
Ε
ΨΕ
ΕΕ
Ψ ΕΕ
ΕΕ Ε
Ψ ΕΕ Ε
Ψ Ε
Ε Ε
ΨΕ Ε
ΕΕ Ε
Ψ Ε Ε Ε
Ψ Ε
Ε Ε
Ψ Ε Ε
Ε Ε Ε
Ψ Ε Ε Ε
Ε 。 9 ∴
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Ψ 5 Ε Ε 。
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Ψ : 5 ! ! 5
! 5 _ 。
∴ 5 : Ψ 5 Ψ
降酚酶活性和 降酚能力都减弱 , 而糖浓 度为
ΨΕ Ε Χ Χ Ο 时 , 细菌几乎不能降酚 , 主要利用糖
作为能源 5 电泳结果 6图 _7 也表明 8 糖浓度为
ΨΕ Ε Ε/ Χ Ο 时生长的细菌的 ? .& 的谱带比其它
期 吴 辉等 8风眼莲根分泌物对 & 4; ≅ =< > 3 ? ;≅= Β/ 5 4 <Δ 5 苯酚代谢的影响
低降酚效率 5 说明根分泌物在凤眼莲和细菌降
酚系统中起重要作用 5
生态因子对生物是综合起作用的 5 各因子
相互影响 , 相互作用 5 根分泌物对细菌的作用不
是单一组 分 的 效 应 , 而 是 各组 分的 综合效
应 ⊥ς’〕5 凤眼莲根分泌物与单一的还原糖组分 、
有机酸和氨基酸组分对细菌的影响有差异 , 与
这一理论是一致的 5 但是各因子的作用也不是
等同的 , 只有少数因子才是决定生物生长 、繁殖
和生理功能的关键因素 5 根分泌物中的氨基酸
组分是一种正趋化物质〔‘召〕, 凤眼莲根分泌物中
氨基酸组分也是如此闭 5 实验中不成为 & 4; ≅。
) >3 ?;≅= “/5 4 < Δ5 生长和降酚的限制因子 5 用被乐毅全等证明有正趋化性的氨基酸 6Δ 3 Ρ , ∋≅ = ,
− ≅ Μ , 1 ΡΜ , , Β Χ 7进行模拟发现 , 并没有因为细菌
的正趋化而促进其生长和降酚 6结果未列 7 5 大
肠杆菌对特定化合物的趋化性与是否有利于它
的生 长没 有必然 联系 ⊥ΡΨ 〕5 根瘤菌 + Θ Πς <> Ρ’Μ Ο
∀ 3 ! 也有 同样的反应〔绷根分泌物中有机酸很
多是 ϑ ∀ , 的 中间体 , 它们是 一种 不 良的碳
源吻几
凤眼莲根分泌物中有机酸组分能通过抑制
细菌生长来降低降酚效果 5 另外 ,用根分泌物中
存在广泛的有机酸 6草酸 、苹果酸 、柠檬酸 、唬拍
酸 、 乙酸 7⊥Ρ ∴〕模拟实验也说 明了这一点 6结果未
列出7 5 根分泌物中还原糖的存在早就为人们所
证实〔川 , 其中果糖和葡萄糖是较普遍的 5 郑师
章等〔幻对凤眼莲根分泌物 中还原糖分析发现 ,
凤眼莲根分泌物中还原糖 6果糖和葡萄糖 7含量
达 。5 Ψ! Γ 5 糖模拟实验说 明 , 高浓度的还原糖
6妻Υ))/ Χ Ο 7抑制细菌降酚酶的诱导 , 而低浓度
的糖能促进细菌降酚 , 这与凤眼莲根分泌物中
还原糖的变化及其对细菌降酚的影响是 一致
的 5 可见 , 凤眼莲根分泌物中糖组分是影响细菌
降酚的关键因子 5
! 5 凤眼莲根分泌物对细菌降酚影响的机制
在以苯酚为唯一碳源的培养液 中 , 细菌诱
导 δ & ϑ , 途径代谢苯酚 , 加入凤 眼莲根分泌
物会使细菌优先利用根分泌物中的糖 , 细菌消
耗糖产生代谢抑制物阻止苯酚代谢的诱导−‘_皿,
只有当糖组分被消耗到一定程度时 , 产生的抑
制物不足于阻止苯酚代谢时 , 才能降解苯酚 5 在
高浓度凤 眼莲根分泌物及其还原糖组分作用
下 , 细菌细胞内微弱直至丧失的邻苯二酚 Ψ ,
加氧酶活性引证了这一点 5 因此 , 在组建凤眼莲
和细菌降酚系统时要考虑凤眼莲的密度 , 避免
根分泌物的大量集聚 , 影响凤眼莲和细菌降酚
系统的运行 5
! 5 ! 凤眼莲和非根际细菌组建高效降酚系统
的可能性
实 验 中 非 根 际 细 菌 6& 4; ≅=< > 3 ?; ≅= Β/ 5
4< Δ 5 7和凤 眼莲组成 系统的降酚效果 6 ΨΘ 为
∴ 。Γ 7 , 没有根际 细菌 6假 单胞 菌 % ) 5 ∴ 7和
凤 眼莲 组成 系统的降酚 效 果 明显 6ΕΘ 为
9 5 ∴ Γ户〕, 除了酚浓度这个特定的背景差异
外 , 还与非根际细菌和凤眼莲组成系统的原始
性有关 , 细菌和风 眼莲相互作用 , 遵循一般种间
关系原则 ,从开始时负相互作用的趋势 , 经过一
定的适应阶段 , 才逐渐向互利方向发展 , 最终形
成一个能维持两者共生系统 5 可见 , 人工组建凤
眼莲和非根际细菌 & 4; ≅=<> 3? ;≅ 8 Β Χ 5 4< Δ5 系统 8
提高降酚效果是可能的 5
参考文献
王崇效 、徐赛兰 、谭 常5 ” :_ 5 凤眼莲净化含 酚污水的研
尧 5 环境科学学报 , _6 Ψ7 8 Ψ Ε 9一Ψ ∴5Ψ 王崇效 、徐赛兰 、 王志香 5 : _ 5 凤眼莲净化含酚污水的研
究 5 上海交通大学学报 , Ψ 6 Ψ 7 8 9_ 一 : 5
乐毅全 、郑师章 、周纪纶 5 Ε 5 凤眼莲根际微生物系统的
降酚效果 5 植物生态学与地植物学学报 , !6 Ψ7 8 ∴ ∴一 ∴ 5
! 乐毅全 、郑师章 、周纪纶 5 5 凤眼莲根际细菌的趋 化性
研究 5 复旦学报 , Ψ, 6 7 8 ! 一 5
∴ 孙文浩 、俞子文 、余叔文 5 : : 5 水葫芦对藻类的克制效应 5
植物生理学报 , Π‘6 7 8 Ψ !一 Ε Ε 5
_ 吴振斌 、夏宜峥 、丘 昌强 5 : : 5 石化废水中酚对凤眼莲的
影响 5 水生生物学报 , Ψ 6Ψ 7 8 Ψ ∴一 Ψ 5
9 郑师章 、何 敏 5 叨 5 水葫芦根分泌物对若干细菌作用的
研究 5 生态学杂志 5 , 6∴ 7 8 ∴_ 一∴9 5
: 郑师章 、昊 辉 、何 敏 5 5 凤 眼莲根分泌物 中还原塘
分析及其化学信息作用5 生态学研究进展 5 中国科学技术
出版社 , 北京 , 9Ε 一 9 Ψ5
, 谭 常 、王崇效 、部根 福5 : _ 5 凤 眼莲净化含酚污水的研
究 百 5 环境科学学报 , ‘6Ψ 7 8 Ψ _一 Ψ Ψ 5
。 蔡武城 、袁厚积 5 : Ψ 5 生物物质常用化学分析法 5 科学 出
版社 , 北京 , Ρ一 Ψ 5
Ω 5 & 5 布坎南 , % 5 & 5 洁年斯编 5 :! 5 伯杰 氏细菌鉴定手册
6第 : 版 7 5 科学 出版社 ,北京 , : 5
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