全 文 ：nese Hans residents in Anhui province including 150 subjects wi th normal glucose tolerance(NG T)and 285 w ith
T2DM .Polymerase chain reaction-sing le st rand confo rmation polymo rphism (PCR-SSCP)was used to deter-
mine whether variation exist in apM 1 gene.Then , exact mutat ion w as perfo rmed by automated DNA direct se-
quencing.Results　①Three types of abno rmal strands were found in SSCP analysis:H 142 P , R221S and H 241
P mutations in heterozygotes revealed by DNA direct sequencing.②The frequency of H142P and R221S muta-
tions w as not different between T2DM and NGT g roups statist ically (P >0.05).And T 2 DM group had mo re
H 241 P mutation than NGT group(P =0.038).Conclusion　There w ere three mutations in exon 3 coding re-
gion of apM 1 gene , among which H241P mutation w as associated w ith T2DM.
MeSH　diabetes mellitus , type Ⅱ/gent ics;dependent;mutation;exons
Free words　apM 1 gene
豹皮樟总黄酮抗炎作用及部分机制研究
陈　琳　程文明　胡成穆　金　涌　李　荣　李　俊
摘要　目的　研究豹皮樟总黄酮(LCTF)的抗炎作用及部分
机制。方法　采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀 、角叉菜胶诱导
的大鼠足爪肿胀 、棉球诱导的大鼠肉芽肿和佛氏完全佐剂诱
导的大鼠佐剂性关节炎模型观察 LCTF 的抗炎作用;采用腹
腔巨噬细胞培养并诱导生成 IL-1的方法探讨 LCTF 抗炎作
用机制。结果　LCTF对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀 、角叉菜
胶诱导的大鼠足爪肿胀 、棉球诱导的大鼠肉芽肿和大鼠佐剂
性关节炎具有抑制作用 ,对 AA 大鼠腹腔巨噬细胞 IL-1 的生
成有抑制作用。结论　豹皮樟总黄酮具有较强的抗炎作用 ,
抗炎机制与抑制 IL-1 的生成有关。
主题词　樟科;黄酮类/药理学;消炎;关节炎;佐剂性
中图分类号　 R 282.71;R 684.3
文献标识码 A 文章编号 1000 1492(2004)06 0439 04
　　豹皮樟(Litsea Coreana Leve Var)属于樟科 ,木
姜子属 ,以其的嫩梢和叶片为原料 ,以简便的工艺
(蒸汽杀青或沸水烫漂杀青后晒干或烤干)制成的饮
品是我国江南农村长期饮用的一种植物代用茶 ,民
间饮用历史悠久 ,又称“老鹰茶” 。它是一种无毒副
作用 、无污染 、风味较佳的天然野生饮品 。原料丰
富 ,加工简单 ,饮用方便。豹皮樟的嫩叶中含有丰富
2004 03 29收稿 , 2004 05 27修回
基金项目:安徽省自然科学基金(编号:No 0304300)
作者单位:安徽医科大学药学系 、临床药理研究所 ,合肥　230032
作者简介:陈　琳 ,女 , 27岁 ,硕士研究生;现在广州暨南大学附属华
乔医院药理室;
李　俊 ,男 , 43岁 ,教授 ,博士生导师,通讯作者 , E-mail:a-
muicplj@mail.hf.ah.cn
的氨基酸及多种矿物质元素 ,总黄酮(TF , total
f lavonoid)含量可高达 3.45%, 已知黄酮有山柰酚
(kaempferol),山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempfer-
ol-3-O-β-D-glucopy ranoside), 槲皮素-3-O-β-D-葡萄
糖苷(quercetin-3-O -β-D-glucopy ranoside)[ 1～ 4] 。有
关豹皮樟总黄酮的药理作用目前未见报道 ,为了更
好地开发 、利用新的药物资源 ,我们对豹皮樟总黄酮
进行了抗炎方面的药理学研究。
1　材料
1.1　药物及试剂　豹皮樟总黄酮 ,由乙醚萃取而
得 ,为墨绿色粉末 ,具有特殊香味 ,主要成份为黄酮
类 ,由本校药学系研制 ,总黄酮含量>75%。新生小
牛血清 ,杭州四季青生物工程材料有限公司提供 ,批
号:031020;RPMI-1640 粉 , sigma 公司提供;二甲
苯 , 安 徽蚌 埠 新 科 电 化 试 剂厂 产 品 , 批 号
200008012;萘普生(naproxen , NAP),广东何济公
药厂生产 ,批号 19950423;雷公藤多苷片(t ripery-
gium wilfordii polyco ride , TPT),上海复旦复华药业
有限公司生产 ,批号 030402;卡介苗(BCG),卫生部
上海生物制品研究所产品 ,批号 20030601。
1.2　仪器　分光光度计 722S ,上海精密科学仪器
有限公司产品;电热恒温水浴锅 , GSY-8 北京市医
疗设备厂意成公司产品;水套式 CO2 培养箱 shal-
lab2323 ,广州南方生化医学仪器有限公司产品。
1.3　动物　昆明种小鼠 , ♀♂各半 ,体重(20±2)g ,
·439·安徽医科大学学报　Acta Universitatis Medicinalis Anhui 　2004 Dec;39(6)
(皖医实动准第 02 号);SD 大鼠 , ♀♂各半 ,体重
(160±20)g ,(皖医实动准第 01号),均由安徽医科
大学动物实验中心提供。以上动物均为清洁动物 。
2　实验方法
2.1　二甲苯诱导小鼠耳肿胀[ 5] 　昆明种小鼠 ,随
机分为 5组 ,每组 10只 ,分别为模型组 、阳性药萘普
生组及 LCTF 组。灌胃给药 ,每天一次 ,连续 5 d ,模
型组给予相应体积的 CMC-Na 。末次给药后 1.5 h
于小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯 50 μl ,右耳作对
照 ,1.5 h 后将小鼠脱颈处死 ,沿耳廓基线剪下两
耳 ,用直径 9 mm 的打孔器分别在同一部位打下圆
耳片 ,用分析天平称重 ,以左右耳片之差为肿胀度 ,
比较药物组与对照组差异并求出肿胀抑制率 ,抑制
率=〔(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对
照组平均肿胀度〕×100%。
2.2　角叉菜胶诱导大鼠足肿胀[ 5] 　SD 大鼠 , ♀♂
各半 ,分组及给药同前。末次灌胃后于每鼠右足趾
皮下注射 1%角叉菜胶 0.1ml致炎。分别在致炎前
和致炎后 1 、3 、5 、7 h ,用足爪仪测量致炎侧足容积 ,
以各鼠致炎前 、后容积的差值为肿胀度 。
2.3　棉球诱导大鼠肉芽肿[ 5] 　SD大鼠分组同前 。
用 10%水合氯醛(350 mg/kg)ip 注射麻醉大鼠 ,在
无菌条件下操作 ,将棉球[每个(50±1)mg , 高压灭
菌]分别植入大鼠两侧腹股沟皮下 ,肌肉注射氨苄青
霉素 。手术当天开始灌胃给药 ,每天1次 ,连续 7 d ,
模型组给予相应体积的 CMC-Na。第 8天颈椎脱臼
致死 ,取出棉球 ,置 60℃烤箱烤至恒重 ,减去原棉球
净重 ,即为肉芽肿净重 ,按 mg/100 g 表示 。
2.4　大鼠佐剂性关节炎症
2.4.1　AA 大鼠原发性炎症检测[ 6] 　SD 大鼠 , ♂,
随机分为 5组 ,每组 10只 ,分别为模型组 ,LCTF 组
及阳性药(萘普生)组 。将 BCG 80℃1 h 灭活 ,用灭
菌液体石蜡配成 10 g/L 的乳剂 ,充分研磨混匀即成
佛氏完全佐剂(Freund s complete adjuvant , FCA),
放置 4℃冰箱保存备用 ,使用前摇匀。大鼠 ig 给药 ,
连续 5 d , 然后于每鼠左后足趾皮内注射 0.1 ml
FCA致炎造模。致炎前及致炎后 6 h 、12 h 、18 h 及
24 h 用足爪仪检测大鼠致炎侧足肿胀 ,以致炎前后
足容积差(ml)为肿胀度 ,以观察 LCTF 对 AA 大鼠
原发性炎症的影响。
2.4.2　AA 大鼠继发性炎症检测[ 6] 　AA 大鼠致炎
后第 12 天开始 ig 给药 , 阳性药给予雷公藤多苷
(TPT),并检测非致炎侧足肿胀 ,每 4d 1次 ,以致炎
前后足容积差为肿胀度 。
2.4.3　AA 大鼠腹腔巨噬细胞产生的 IL-1 的检
测[ 7] 　处死大鼠 ,于腹腔内注入 D-Hank 液 5 ml ,轻
揉腹部 ,抽出灌洗液 ,重复 1次 ,合并灌洗液 ,离心洗
涤细胞即得富含巨噬细胞的腹腔细胞 。RPMI-1640
重悬细胞 ,调整细胞浓度为 2×106/ ml ,按分组将细
胞悬液加入 24孔板中(1 ml/孔),5%CO2 , 37℃饱
和湿度培养箱中培养 4 h ,弃上清 , 用 37℃预温的
5%小牛血清的 Hank s液洗涤 2次 ,弃除不贴壁细
胞 ,余下为单层腹腔巨噬细胞(PMφ)。按文献方法
采用 LPS 诱导腹腔巨噬细胞产生 IL-1 。用放免法
测定 IL-1的含量。
2.5　剂量设置　阳性对照药:雷公藤多苷 。小鼠 60
mg/kg ,大鼠 40 mg/kg;萘普生:小鼠 30 mg/kg ,大鼠
20 mg/kg 。其剂量均为人常用有效剂量经体表面积
折算。LCTF:小鼠 100 、200 、400 mg/kg ,大鼠:66.5 、
133 、266 mg/kg ,剂量经实验筛选后所确定。
2.6　统计学处理　结果以 x ±s表示 ,组间比较采
用 t 检验。
3　结果
3.1　LCTF对二甲苯致小鼠耳肿胀模型的影响　
结果显示 LCTF 200 mg/kg 、400 mg/kg 两个剂量组
均能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀 ,见表 1 。
表 1　豹皮樟总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响( x±s , n=10)
组别 剂量(mg/ kg)
耳肿胀
(mg)
抑制率
(%)
模型 - 18.00±6.71　 -
豹皮樟 100 12.86±5.92 17.29
200 11.40±5.43＊ 17.37
400 10.71±6.57＊ 17.41
萘普生 30 9.95±7.45＊ 17.45
　　与模型组比较:＊P<0.05
3.2　LCTF 对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型的影
响　结果表明 LCTF 133 mg/kg 、266 mg/kg 两个剂
量在各个时段均能明显抑制角叉菜胶所致的足肿
胀 ,见表 2 。
3.3　LCTF对棉球诱导大鼠肉芽肿模型的影响　
结果显示 LCTF 66.5 mg/kg 、133 mg/kg 、266 mg/
kg三个剂量组均能减轻棉球诱导的大鼠肉芽肿的
重量 ,见表 3。
3.4　LCTF对 AA大鼠关节炎症的影响及部分作用
机制
·440· 安徽医科大学学报　Acta Universitatis Medicinalis Anhui 　2004 Dec;39(6)
表 2　豹皮樟总黄酮对角叉菜胶所致的急性炎症的影响( x ±s , n=10)
组别 剂量(mg/ kg)
足　肿　胀　(ml)
1 h 3 h 5 h 7 h
模型 - 0.556±0.244　 1.321±0.318　 1.272±0.259　 1.152±0.371　
豹皮樟 66.5 0.474±0.126 1.237±0.267 1.115±0.269 0.898±0.244
133 0.381±0.133＊ 1.036±0.140＊ 0.998±0.163＊＊ 0.870±0.207＊
266 0.376±0.052＊＊ 0.967±0.179＊＊ 0.894±0.120＊＊ 0.700±0.254＊＊
萘普生 20 0.385±0.164＊ 1.014±0.287＊＊ 0.901±0.230＊＊ 0.860±0.301＊
　　与模型组比较:＊P <0.05 , ＊＊P<0.01
表 3　豹皮樟总黄酮对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响( x±s , n=10)
组别 剂量 肉芽肿重(m g/ 100g)
模型 - 63.17±15.31　
豹皮樟 66.5 53.64±12.74＊
133 53.33±6.69＊
266 53.23±4.71＊
萘普生 20 51.23±9.70＊
　　与模型组比较:＊P <0.05
3.4.1　LCTF 对 AA 大鼠原发性炎症的影响 　结
果表明结果显示 LCTF 133 mg/kg 、266 mg/kg 两个
剂量组在各个时段均能抑制 FCA 所致的急性炎症 ,
见表 4。
3.4.2　LCTF 对 AA 大鼠继发性炎症的影响　结
果表明 LCTF 66.5 mg/kg 、133 mg/kg 、266 mg/kg
三个剂量组均能抑制 FCA 所致 AA 大鼠继发性足
爪肿胀 ,见表 5 。
3.4.3　LCTF 对 AA大鼠腹腔巨噬细胞产生的 IL-
1的影响　结果表明 LCTF 66.5 mg/kg 、133 mg/
kg 、266 mg/kg 三个剂量组均能抑制腹腔巨噬细胞
I L-1的生成 ,见表 6 。
表 4　豹皮樟总黄酮对 AA大鼠原发性炎症的影响( x±s , n=10)
组别 剂量(mg/ kg)
不同时间足肿胀(ml)
6 h 12 h 18 h 24 h
模型 - 0.480±0.187　 0.550±0.198　 0.604±0.173　 0.638±0.211　
豹皮樟 66.5 0.435±0.139 0.524±0.147 0.543±0.127 0.633±0.128
133 0.282±0.104＊＊ 0.406±0.074＊ 0.420±0.155＊ 0.437±0.114＊
266 0.152±0.124＊＊ 0.402±0.091＊ 0.407±0.097＊ 0.402±0.145＊
萘普生 20 0.271±0.168＊＊ 0.408±0.270＊ 0.454±0.278＊ 0.484±0.258＊
　　与模型组比较:＊P <0.05 , ＊＊P<0.01
表 5　豹皮樟总黄酮对 AA大鼠继发性炎症的影响( x±s , n=10)
组别 剂量(mg/ kg)
不同时间足肿胀(ml)
16 d 20 d 24 d 28 d
模型 - 0.187±0.048　 0.220±0.54　 0.270±0.052　 0.368±0.078　
豹皮樟 66.5 0.119±0.035＊＊ 0.177±0.048＊ 0.204±0.047＊ 0.255±0.058＊＊
133 0.115±0.029＊＊ 0.169±0.055＊ 0.200±0.060＊ 0.248±0.014＊＊
266 0.105±0.030＊＊ 0.109±0.049＊＊ 0.181±0.059＊ 0.223±0.098＊＊
雷公藤 40 0.112±0.032＊＊ 0.149±0.018＊＊ 0.203±0.111＊ 0.235±0.029＊＊
　　与模型组比较:＊P <0.05 , ＊＊P<0.01
表 6　豹皮樟总黄酮对 AA大鼠腹腔 IL-1生成的影响( x ±s , n=10)
组别 剂量(mg/ kg) IL-1(ng/ L)
模型 - 0.425±0.110　
豹皮樟 66.5 0.322±0.058＊
133 0.306±0.025＊
266 0.279±0.080＊＊
雷公藤 40 0.302±0.080＊
　　与模型组比较:＊P <0.05 , ＊＊P<0.01
4　讨论
史书记载豹皮樟有明显的消暑解渴 、消食化积 、
解毒 、消肿 、明目 、健胃 、益思 、助消化 、顺气 、利尿 、解
表等多种药理活性 。本实验采用了急性 、慢性及免
疫性炎症模型 ,观察豹皮樟总黄酮的抗炎作用。结
果表明 LCTF 能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀 、
角叉莱胶所致大鼠足肿胀 、棉球诱导肉芽肿 ,对 AA
大鼠具有一定的预防及治疗作用。RA 是慢性免疫
介导的炎症性疾病 ,一般认为 , RA起因主要为 T 细
胞对未知抗原的反应 , T 细胞被激活后 ,释放淋巴因
子 ,继而激活单核/巨噬细胞释放多种单核因子 ,如
I L-1。近来研究表明 , I L-1 与炎症骨质破坏密切相
·441·安徽医科大学学报　Acta Universitatis Medicinalis Anhui 　2004 Dec;39(6)
关 , IL-1[ 8]在 RA 发病中的作用首先表现在对免疫
和炎症细胞的局部效应 ,即在 RA 病变早期可协助
其它细胞的迁徙和刺激内皮细胞的各种反应 , IL-1
对炎细胞有趋化和黏附作用 ,可促进活化细胞进入
炎性部位 ,促进炎细胞附壁和滑膜细胞增殖 ,且能增
加血管通透性 、刺激内皮细胞释放血小板活性因子
及前列环素 。 IL-1可促进滑膜纤维母细胞产生胶
原酶和 PGE2 ,使病情向中晚期发展。 IL-1 是 RA
发病机制中居中心地位的促炎症细胞因子。本实验
中以 AA大鼠为模型 ,以 I L-1 为研究对象 ,探讨了
豹皮樟总黄酮的部分作用机制。结果表明 ,豹皮樟
总黄酮能够明显抑制 LPS 诱导的 AA 大鼠腹腔巨
噬细胞过度分泌的细胞因子 IL-1。综上所述 ,豹皮
樟总黄酮具有明显的抗炎作用 ,其机制与调节体内
IL-1的生成有关。
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腔巨噬细胞 IL-1 , IL-6 和 TNF-α产生的动态影响.中国药理学
报 , 2002;23(8):752～ 6
Study on anti-inflammatory effects of total
flavonoids of litsea coreana Leve.Var
Chen Lin , Cheng Wenming , Hu Chengmu et al
(School of Pharmacy , Anhui Medical Universi ty , Hefei 　230032)
Abstract　Objective　To study the anti-inf lammatory ef fect and possible mechanism of total flavonoids of Li tsea
Coreana Leve.Var.(LCTF).Methods　Anti-inflammatory action of LCTF was tested by:Ear edema induced
by xylene , hind paw swelling by carrageenan , granuloma of subcutaneous tissue by cot ton ball , adjuvant arthri-
tis(AA)by FCA.IL-1 product ion f rom peritoneal macrophages was assayed in AA rats to elucidate the possible
mechanism of LCTF .Resul ts　LCTF markedly inhibited the ear edema in mice , sw elling paw induced by car-
rageena and g ranuloma induced by co tton ball.LCTF have preventive and therapeutic effects on AA rats and can
signif icantly suppresse activity of IL-1.Conclusion 　LCTF has effects of anti-inf lammatory in mice and rats.
The anti-inflammatory mechanisms of LCTF in AA rats might be related to inhibitory level of I L-1 from PMφ
in v ivo.
Free word　li tsea Co reana Leve.Var.
MeSH　lauraceae;f lavones/pharmacolog y;anti-inflammatory ;arthritis , adjuvant
·442· 安徽医科大学学报　Acta Universitatis Medicinalis Anhui 　2004 Dec;39(6)