全 文 ：L P H C法测定满山红油胶丸中杜鹃酮的含量 “
方 芳 ’ ` ,方洪壮 `井,李百强 2 ,王英爽3 ,吴 刚`(1 . 佳木斯大学化学与药学院,佳木斯市 巧4的;7 2 . 黑龙江
绥化市药品检验所,绥化市 152062 ; 3 . 天赐康制药有限公司,绥化市 152051)
中图分类号 R 2 83 . 64 ; R 9 27 . 2 文献标识码 A 文章编号 100 1一 0 40 8 (2 00 9 ) 12一 0 9 16 一 0 3
摘 要 目的 : 建立 以高效液相色谱法测定满山红油胶九中杜鹃酮含量的方法 。 方法 : 色谱柱为 Z or b ax S B 一 C l式150 m m x 4 . 6
m m
,
5 产m ) , 流动相为 乙睛 一 水 (6 5 : 35 ) , 流速为 1 . o m L · m in 一 ` , 检测波长为 2 10 n m , 柱温为室温 。 结果 : 杜鹃酮进样量在
0
.
02 9 8一 5
,
96 0 0 拜g 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系 ( : 二 0 . 9 9 9) ; 平均回收率为 10 . 0 % , R S O 一 0 . 42 % ( : = 9) 。 结
论 : 本法简单、 快速 、 准确 , 可用于满山红油胶九的质量控制 。
关键词 满 山红油胶丸 ;杜鹃酮 ; 高效液相色谱法 ;含量测定
D e t e r m i n a t i o n o f G e r m a e r o n e i n M a n s h a n h o n g 0 11 S o f t G e l a t i n C a P s u l e b y H P L C
F A N G F a n g
,
F A N G H o n g
一 z h u a n g
,
W U G
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e m i s t r y a n d P h a r m a e y
,
J i a m u s i U n i v e r s i t y
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m u s i 1 5 4 0 0 7
,
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a n g S u ih u a I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
S u ih u a 1 52 062
,
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a n g P h a r m a e e u t i e a l C o
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S u ih u a 15 2 0 5 1
,
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A B S T R A C T O BJ E C T IV E
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o e s t a b li s h a n H P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t l o n o f g e r m a e r o n e I n M
a n s h a n h o n g 0 11 s o f t
g e la t i n e a p s u l e
.
M ET H O D S
: T h e d e t e r nr l n a t l o n w a s p e r f o r m e d o n a Z o r b a x SB 一 C 18 e o lu m n ( 150 m m 又 4
.
6 nr m
,
5 拌m ) w it h
C H 3 CN 一 H刃 ( 6 5 : 35 ) u s e d a s m o b l le p h a s e a t a f l o w r a t e o f 1 . 0 m L · m in 一 ` . T h e d e r e e t , v e w a v e le n g t h w a s s e t a t 2 10 n m a n d
t h e e o lu m n t e m p e r a t u r e w a s s e t a t r o o rn t e m p e r a t u r e
.
R E S U L T S : T h e 11 n e a r r a n g e o f g e r m a e r o n e w a s 0
.
0 2 9 8 一 5 . 96 0 0 拌g
(
r = 0
.
9 99 9 ) w i
t h a n a v e r a g e r e e o v e r y o f 100
.
0 `沁 ( R S D = 0 . 4 2% , n = 9 ) . CO N C L U S IO N : T h e d e v e lo p e d n l e t h o d 15 s l rn p l e ,
r a p i d a n d a e e u r a t e
, a n d it 一5 a p p l ie a bl e f o r t h e q u a ll t y e o n t r o l o f M a n s h a n h o n g 0 11 s o f t g e l a t i n e a p s u le
.
K EY w 0 R D S M
a n s h a n h o n g 0 11 s o f t g e la t i n e a p s u le ; G e r m a e r o n e : H P L C ; C o n t e n t d e t e r n l in a t io n
满山红油胶丸为满山红油与适量稀释剂制成的胶丸 , 具有 山红及其胶丸的现行质量标准中尚无定量内容 , 仅是在鉴别项
止咳祛痰之功效 ,临床用于急 、慢性支气管炎的治疗 川。 方中的 下对满山红油中杜鹃酮进行薄层显色 ; 对杜鹃酮的定量测定方
满 山红油为杜鹃花科植 物兴安杜鹃的干燥叶— 满 山红 法 , 也只有气相色谱法 3[] 。 为有效控制满山红油胶丸的质量 ,笔
R h 。do de
:
dr
。 :
da
u : 女二 , L . 的挥发油 。 药理和临床研究证 者采用高效液相色谱 ( H P L )C 法测定制剂中杜鹃酮的含量 , 方
实 ,满山红油中主要有效成分为杜鹃酮 ,且有较高的含量 2[ {。 满 法简单 、快速 、准确 , 可用于该制剂的质量控制 。
一卜 · 十 ~ 十 二 叫卜 ~ 叫卜 “ 叫卜 ~ + ~ 申 · 十 州卜 ~ 一卜 斗 一 十 ~ 十 一卜 一卜 十 明 十 ~ 刁卜一卜 斗 一 命 一 十 ~ 叫卜 ” 刊卜 斗 ~ 十 一 十 ” 叫卜 一卜 ~ 十 斗 二 十 ~ 月卜 ” 叫卜 十 十 二 十 , · 叫卜 ~ - 卜 ” ~ 卜 ~ 十 十 一卜 州卜~ 叫卜 二 斗 十 ·
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们l J2]314钊.11土ùl,11r
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几
( 1 )
: 3 7
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s t i t
u e n t s f r o m g y n u r a d i v a r i e a t a s u b s p
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2 00 3
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5 5 ( 2 )
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, a n e w h i g h l y e y t o t o x i e
a e e t o g e n i n
,
f r o m t h e b a r k o f a s im i n a t r ilo b a lJ」. J阪 t
△ 黑龙江省中医药重点科研项目 ( ZH Y 0 6 一 2 4 3)
* 硕士研究生 。研究方向 : 中药质量控制 。 E 一 m ial : faf a @ 1 63 . c o m
# 通讯作者 : 教授 。 研究方向 : 中药分析 、药物分析 。 E 一 m a il : hf z -
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@ 1 63
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c o m
P
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(收稿日期 : 2 0 0 8 一 0 4一 0 7 修回 日期 : 2 0 0 8一 0 6一 1 0 )
·
9 1 6
·
C h in a P h a rm
a e y 2 0 0 9 V o l
.
2 0 N o
.
12 中国药房 2 0 0 9 年第 2 0 卷第 12 期
1 仪器与试药
1 10 0型 H P L C 仪 ,包括四元泵 、 真空在线脱气机 、 自动进
样器 、 二极管阵列紫外检测器 、 色谱工作站 (美国 A isl e nt 公
司 ) ; F A 20 04 型电子天平 ( 上海恒平科学仪器有限公司 ) ;
K Q 一 25 0D E 型医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限
公司 ) 。 杜鹃酮对照品 ( 中国药品生物制品检定所 , 批号 :
n 166 5 一 20 060 50 8) ;满山红油胶丸 (黑龙江天赐康制药有限公
司 , 批号分别为 200 6 120 1 、 2 00 70 108 、 2 00 704 2 1 、 2 00 70 70 1 、
2 00 708 0 1
、
200 7 100 6 ) ; 满山红油 (黑龙江天赐康制药有限公司 ,
批号 : 2 00 6 1101 ) ; 稀释用油 (市售精制食用油 ) ; 乙睛 、 甲醇 (色
谱纯 , 天津市科密欧试剂开发中心 ) ;磷酸 (分析纯 , 天津瑞金特
化学品有限公司 ) ;无水硫酸钠 (分析纯 , 天津化学化工厂 ) 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱 : z 〔 ) r b a x S B 一 C I。 ( 150 m m X 4 . 6 n l n : , 5 拼rn ) : 流动
相 : 乙睛 一 水 ( 65 : 3 5) ; 检测波长 : 2 10 n m ; 柱温 : 室温 ; 流速 :
1
.
0 m L
·
m in ’ 。 理论塔板数 : n 930 ; 拖尾因子 : 1 ; 分离度 :
1
.
54
。 在此条件下 ,供试品色谱中相邻峰对杜鹃酮无干扰 , 杜鹃
酮达到充分分离 ; 杜鹃酮峰的保留时间与对照品的保留时间一
致 。 色谱见图 1 。
() 2
.
5 5 7
.
5 I O n l lr z
分别精密吸取 “ 2 . 2 ” 项下对照品贮备液 3 、 1() 、 20 拼L 及对
照品溶液 1 、 3 、 10 、 巧 、 20 :* L , 经 。 . 45 拌m 微孔滤膜过滤后按上述
色谱条件进样 〔 以杜鹃酮进样量 ( X ) 为横坐标 , 峰面积积分值
( Y ) 为纵坐标 , 进行线性回归 , 得回归方程为 Y = 2 9 28 . 2 X +
28
.
74(
: 二 0 . 9 99 9) 。 结果表明 , 杜鹃酮进样量在 0 . 0四 8 一
5
.
96 0 0 拌g 范围内与其峰面积积分值呈 良好线性关系。
2
.
6 精密度试验
取对照品溶液 , 按上述色谱条件连续进样 6 次 , 每次 15
拌L , 测定峰面积 。结果 , R S D = 0 . 18 % , 表明仪器精密度良好 )
2
.
7 重现性试验
取满山红油 6 份 , 各约 0 . 1 9 ,精密称定 , 分别置于 1 () m L
容量瓶中 , 用乙睛溶解并定容。 分别精密量取 1 m L 至 10 m L
容量瓶中 , 用乙睛定容 。 各进样 20 拜L , 按上述色谱条件测定峰
面积并计算杜鹃酮含量 。 结果 , R S D 一 1 . 2 `%, ,表明方法重现性
良好。
2
.
8 稳定性试验
取一份供试品溶液 , 分别于 O 、 4 、 8 、 12 、 24 、 36 h 进样 2()
拜L , 按上述色谱条件测定峰面积 。 结果 , R S D = 1 . 8 % , 表明满
山红油供试品溶液中杜鹃酮在 36 h 内稳定 。
2
.
9 加样回收率试验
取已知杜鹃酮含量的满山红油胶丸约 0 . 1 9 , 共 9 份 ,精密
称定 , 用乙睛稀释 ,使杜鹃酮含量为 0 . 1 m g · m L ’ 。 取此胶丸
油稀释液 , 分别置于 10 m L 容量瓶中 ,每 3 份为一组 , 按低 、 中 、
高浓度分别精密加人对照品溶液 2 . 0 、 3 . 5 、 5 . 0 m L , 加乙睛定
容。 经 0 . 45 , , m 微孔滤膜过滤后进样 20 肛L , 按上述色谱条件
测定峰面积 , 经回归方程计算杜鹃酮含量 ,并计算加样回收率 ,
结果见表 l 〕
表 l 加样回收率试验结果《n = 9)
l
’
a b 1 R e s u l t s o f r e e o v e r y r e s t (
n = 9 )
加人量
图 1 高效液相色谱
A
. 供试品 ; B . 对照品?;( . 供试品 + 对照品 ; 、 . 杜鹃酮
F 19 1 H P L C
A
. 、 a m p le : B
.
e o n t r o l ; C
. 、 ,一nr lo le + e o n t r o l ; s
.
g c r m a e r ( ) n e
样品含量
小 g
0
.
1 98 9
0
.
1 96 7
0
.
2 0 3 2
0
.
2 0 4 6
0
.
2 0 5 2
0
.
19 4 2
0
.
2 0 3 2
0
.
2 0 8 1
0
.
19 8 9
测得觉
I/
, g
回收率
/%
/砚 R S I夕/ %
2
.
2 对照品溶液的制备
取经五氧化二磷干燥的杜鹃酮对照品约 7 . 45 m g , 精密称
定 , 加乙睛溶解并定容至 2 5 n 1 L , 摇匀 , 即得对照品贮备液 精
密量取此贮备液 1 m L , 置于 l() m L 容量瓶中 , 加乙睛稀释至
刻度 ,摇匀 , 即得对照品溶液 )
2
.
3 供试品溶液的制备
取满山红油胶丸适量 ,精密称定 , 加乙睛稀释成浓度为 0 . 1
m g’ m L ` 的溶液 , 经 0 . 45 拜 n l 微孔滤膜过滤 , 即得供试品溶
液 。
2
.
4 杜鹃酮峰的确定
取供试品溶液及对照品贮备液 , 分别进样 10 ,, L , 在色谱
柱上进行分离 , 记录 2 10 n m 波长处的色谱 (见图 1 中 A 、 B ) ;
另分别取对照品贮备液与供试品溶液适量 , 经 自动进样器混匀
进样 , 按上述色谱条件洗脱 , 记录色谱 (见图 1 中 C ) 。 比较对照
品加人前 、后的色谱图可知 , 对照品加人后 , 供试品溶液在 9 . 23
m in 处的色谱峰 ( 、 ) 明显增高 , 由此确定保留时间 9 . 23 m in 处
的色谱峰 ( S )为杜鹃酮峰 。
2
.
5 线性关系考察
( )
.
2 9 8
3 1 8 5 10 0
.
2
3 1 5 7 9 9
.
9
3 2 2 6 1 0 0
.
1
4 13 4 1 0 0
.
1
4 12 2 9 9
.
4 1( ) ( )
.
( ) ( )
.
4 2
40 3 2 1 0 0
.
2
5 () 1 6 1 0 0
.
2
50 4 6 9 9
.
3
49 8 1 1 0 0
.
6
n村曰日0U9乙,óùb6h八曰0
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Jqù,一9`9ùé臼.…价曰()日0(j
2
.
10 样品含量测定
分别取不同批次的样品约 0 . 1 9 ,精密称定 置于 l o o m L
容量瓶中 , 用乙睛溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 精密移取 1 m L , 置
于 10 m L 容量瓶中 , 加乙睛定容 , 摇匀 。 经 0 . 45 拼m 微孔滤膜
过滤 , 进样 20 拜L , 按上述色谱条件测定 。 另取杜鹃酮对照品溶
液进样 20 I L , 测定 , 经外标法计算杜鹃酮含量 川 。 结果 , 6批样
品 (批号分别为 20 06 120 1 、 20 0 7070 1 、 20 07 ()4 2 1 、 2 00 7 10 06 、
20 07 010 8
、
2 () 0 7 080 1 ) 中杜鹃酮的含量分另l』为 23 1 . 8 、 2 3 5 . 6 、
23 3
.
9
、
2 36
.
7
、
24 0
.
0
、
2 35
.
0 m g
·
g
一 ` , R S D 分别为 0 . 4 2% 、
0
.
35伙, 、 0 . 4 3% 、 0 . 4 7% 、 0 . 59% 、 0 . 6 1% ( , , 一 6 ) 。
3 讨论
预试验曾采用不同种类及不同配比的流动相 , 结果表明 ,
当以乙睛 一 水 ( 65 : 3 5) 为流动相时 , 杜鹃酮峰形对称 、尖锐 、达
到较为理想的分离效果 。
笔者在试验过程中曾取一定量稀释用油 , 用乙睛稀释 1() (j
中国药房 2 00 9 年第 2 0 卷第 1 2 期 C h z n a P ha r m a e v 2 0 0 9 V o l . 2 0 N o . 1 2 · 9 17
鼻渊灵颗粒的稳定性考察 “
李瑞平 ` * ,刘素霞2 ,李春花 3续 ,侯芳洁 3( 1 . 河北保定市药品检验所,保定市 071051 ; 2 . 河北医科大学第三医
院, 石家庄市 050091 ; 3 . 河北医科大学, 石家庄币 050091 )
中图分类号 R 28 3 . 62 7 : R 92 7 . 11 文献标识码 A 文章编号 100 1一 04 08 (20 09 ) 12一 09 18 一 0 3
摘 要 目的 : 考察鼻渊灵颗粒中黄答普的稳定性 ,并预测其有效期 方法 :采用反相高效液相色谱法测定鼻渊灵颗粒中黄答普的
含量 : 色谱柱为 D i a nr o n 、 11 O D s c l : ( 2 00 nr m 又 4 . 6 n 、m , 5 抖m ) , 流动相为 甲醇 一 水 一 磷酸 ( 53 : 47 : 0 . 2 ) , 检测 波长为 27 4 n m : 采
用经典恒温加速试验法考察药物的稳定性 ,并计算其有效期 。 结果 : 该制剂中黄答普在 25 ℃ 下分解常数 K 一 4 . 5 92 x 10 一 “ h ’ ,有
效期 t ! 9二 2 . 62 a 结论 : 本方法科学、合理 , 可用于鼻渊灵颗粒的稳定性考察
关键词 鼻渊灵颗粒 ;稳定性 ;黄答菩 ;反相高效液相色谱法 ; 经典恒温加速试验法
S t a b i l i t y o f B i y u a n l i n g G r a n u l e s
L l R u i
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p i n g ( H
e b e i B a o d i n g In s t i t u t e f
o r D r u g C o n t r o l
,
B a o d i n g 0 7 1 05 1
,
C h i
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)
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一 x i a ( H
e b e i M e d i e a l U n i v e r s i t y T h i r d H o s p i t a l
,
S h ij ia z h u a n g 05 0 0 9 1
,
C h i n a )
L 1 C h u n
一
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,
H O U F a n g
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e b e i M e d i e a l U n i v e r s i t y
,
Sh ij i a z h u a n g 05 0 0 9 1
,
C h i n a )
A B S T R A C T O BJ E C T IV E
: T o s t u d y t h e s t a b il i t y o f B a i e a l in i n B , y u a n l i n g g r a n u le s a n d p r e d i e a t e i t s v a ll d i t y d u r a t i o n
.
M E T HO D S
: T h e e o n t e n t o f B a ie a l in i n B iy u a n li n g g r a n u l e s w a s d e t e r m i n e d b y R P 一 H P L C o n D l a rn o n s il O D S C l。 e h r o m a t分
g r a p h ie e o l u m n ( 200 m m
X 4
.
6 rn m
,
5 拌m ) w i t h m e t h a n o l 一 w a t e r 一 p h o s p h o r i e a e i d ( 5 3 : 4 7 : 0 . 2 ) u s e d a s m o b i le p h a s e
.
T h e
d e t e e t iv e w a v e le n g t h w a s s e t a t 2 74 n m
.
T h e s t a b il it y o f B a i e a l i n i n B iy u a n li n g g r a n u le s w a s d e t e r m i n e d by e la s s l e a l a e e e l e r a t e d
t e s t p r o e e 、 、 一n e o n s t a n t t e m p e r a t u r e a n d i t s v a li d i t y d u r a t io n w a s e o m p u t e d
.
R E S U L T S : T h e d i s l n t e g r a t io n e o n s t a n t o f
B a i e a li n a t 2 5 ℃ w a s K = 4 . 59 2 X I O “ h 飞 , a n d t h e v a l id i t y d u r a t io n w a s t g 一 2 . 6 2 y e a r s . C O N C L U S IO N : T h e m e t h o d d e -
v e lo p e d I n t h is s t u dy w a s p r o v e d t o b e s e 一e n t if i e , r e a s o n a b le a n d s u i t a b le fo r t h e s t u d y o f t h e s t a b i li t y o f B i y u a n l i n g g r a n u le s
.
K E Y w 0 R D s B i y
u a n l in g g r a n u l e s ; S t a b i li t y : B a l e a ll n : R P 一 H P L C : C la s s ie a l a e e e le r a t e d t e s t p r o e e s s in e o n s t a n t t e m p e r a
-
t l T e
鼻渊灵颗粒主要由黄芬 、 白芷 、 苍耳子等组成 , 具有祛风宣 析天平 (上海精科仪器厂 ) ; K Q 一 2 50 B 型超声波清洗机 (上海
肺 、 清热解毒之效 , 临床用于治疗鼻渊 , 疗效满意。 方中主药黄 必能信超声有限公司 ) 。 黄琴普对照品 (中国药品生物制品检定
芬的有效成分黄芬昔具有邻二酚轻基结构 , 久置会氧化降解 , 所 , 批号 : 1 107 15 一 2 00 5 14) ; 鼻渊灵颗粒及空白颗粒由河北医
且温度可加速这一变化过程 。 因此 , 本试验以反相高效液相色 科大学中药药剂教研室提供 ; 甲醇 (色谱纯 , 天津市康科德科技
谱 ( R P 一 H P L C )法测定黄芬昔的含量 , 按照化学动力学原理 , 有限公司 ) ;磷酸 (分析纯 , 开封化学试剂总厂 ) ;重蒸馏水 (河北
采用高温加速试验对鼻渊灵颗粒中黄芬昔的分解变化进行考 医科大学实验中心制备 ) 。
察 , 以为其制定有效期提供试验依据 2 方法与结果
1 仪器与试药 2 . 1 色谱条件
s P D 一 z oA 、 ,。 H p L C 系统 、 S p D 一 10 A 、 。紫外检测仪 、 手 色谱柱 : D i a m o n s i l O D S C l吕(2 00 m m 火 4 . 6 m n , , 5 拼m ) : 流
动进样器 、 N 20 10 色谱工作站 ( 日本岛津公司 ) ; 181 0 一 B C 型石 动相 : 甲醇 一水 一磷酸 ( 53 : 47 : 0 . 2) 伙流速 : 1 . o m L · m in 一 ` ;
英自动双重纯水蒸馏器 ( 江苏省金坛市白塔石英玻仪厂 ) ; 检测波长 : 2 74 n m ;柱温 : 室温 ;进样量 : 20 拜L 。
T D 2 001 型电子天平 (天津天平仪器有限公司 ) ; T G 32 8B 型分 2 . 2 对照品溶液的制备 ’ “ ’
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倍后进样 , 色谱分离结果显示 , 杜鹃酮峰保留时间处无色谱峰
出现 ,表明稀释用油对杜鹃酮测定无干扰 。
参考文献
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* 副主任药 师 。 研究方向 : 药物质量控制 。 E 一 m ial : : iu 卜
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# 通讯作者 : 教授 , 硕士 。 研究方向 : 中药制剂新技术 、新方法 E -
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